專利名稱：一種板藍根的抗病毒有效部位的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種板藍根的抗病毒有效部位及其制備方法。本發(fā)明還涉及包含板藍根的抗病毒有效部位的藥物制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
板藍根(Radix isatidis)別名靛青根、藍靛根、靛根，系十字花科植物菘藍(Isatis indigotica Fort)的干燥根，作為常用的中藥被收載于《中國藥典)》第一部。其味苦性寒，入心、胃經(jīng)，具有清熱解毒、涼血消腫的功效。臨床上多用于治療流行性乙型腦炎、流行性感冒、流行性腮腺炎、小兒急性肝炎、單皰病毒性角膜炎、咽炎、扁平疣、紅眼病、淚囊炎、水痘等，是公認的有較好抗病毒效果的少數(shù)中藥之一，具有較高的臨床應(yīng)用價值。
現(xiàn)有的板藍根制劑有各種口服制劑及板藍根注射液，及其與其它中藥制成的復(fù)方口服制劑?！吨袊幍洹?2000年版)記載的板藍根制劑主要有板藍根顆粒、板藍根茶，用于感冒、病毒性肝炎、咽喉腫痛等。板藍根注射用于治療腮腺炎，角膜炎及其它病毒性疾病，在臨床上取得了較好的治療效果，但是目前的板藍根注射液由于純度不高、有效成份含量低，只能用于肌肉注射和穴位注射，大大限制了板藍根注射液的臨床應(yīng)用。目前還沒有有效成份含量高、質(zhì)量穩(wěn)定、生物利用度高可供靜脈注射使用的板藍根靜脈注射劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明擬在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下，在已有研究成果的基礎(chǔ)上，進一步明確了板藍根的抗病毒有效部位，采用特定的提取純化工藝最大限度的保留有效成分，除去有關(guān)雜質(zhì)成分，提取并純化了板藍根的抗病毒有效部位，并研制開發(fā)了新一代供靜脈注射用的板藍根靜脈注射劑。
因此，本發(fā)明的一個目的是提供一種板藍根抗病毒有效部位。
本發(fā)明還一個目的是提供含有板藍根抗病毒有效部位的藥物制劑。
本發(fā)明的目的是通過以下的技術(shù)方案實現(xiàn)一種板藍根抗病毒有效部位，其是通過以下方法制得(1)取板藍根藥材，加水煎煮二次，合并煎煮液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.0～1.1；(2)取上述濃縮液，加乙醇使含醇量達65～70％，攪勻，靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮，靜置，濾過，得濾液A；(3)取濾液A，加熱煮沸0.5-2小時，并補加水至原體積，冷藏，濾過，濾液用氨試液調(diào)節(jié)pH值至8.0～8.5，冷藏，濾過，得濾液B；(4)取濾液B，過大孔吸附樹脂，水洗至無茚三酮反應(yīng)，收集流出液和水洗液，得洗脫液C；再用醇洗至無色或顏色很淺，減壓回收乙醇至無醇味，得濃縮液D；取洗脫液C，過聚醚砜膜，收集分子量100-10000的部分得濾液E；取濃縮液D，加乙醇，靜置，過濾，濾液過脫色樹脂，收集洗脫液，回收乙醇至無醇味，濃縮，得濃縮液F；(5)合并洗脫液E和濃縮液F，減壓濃縮，冷藏過濾，濾液用碳酸鈉溶液調(diào)pH值至7.0～7.5，加入針用活性炭，加熱，濾過，濾液即為板藍根抗病毒有效部位。
本發(fā)明的板藍根抗病毒有效部位的制備工藝中的純化步驟的主要特點是采用大孔吸附樹脂和脫色樹脂聯(lián)合純化精制，同時采用膜過濾技術(shù)，最大限度地保留了有效成分，除去有關(guān)雜質(zhì)成分。
優(yōu)選，本發(fā)明的板藍根抗病毒有效部位，是通過以下方法制得(1)取板藍根藥材，加7～10倍量水煎煮0.5-2小時，藥渣加3-6倍量水再同法煎煮0.5-2小時，合并煎煮液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.0～1.1；(2)取上述濃縮液，加乙醇使含醇量達65～70％，攪勻，靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮，冷藏過夜，濾過，得濾液A；(3)取濾液A，加熱煮沸0.5-2小時，并補加水至原體積，冷藏24～48小時，濾過，濾液用氨試液調(diào)節(jié)pH值至8.0～8.5，冷藏48小時以上，濾過，得濾液B；(4)取濾液B，過大孔吸附樹脂，水洗至無茚三酮反應(yīng)，收集流出液和水洗液，得洗脫液C；再用60-80％醇洗至無色或顏色很淺，減壓回收乙醇至無醇味，得濃縮液D；取洗脫液C，過聚醚砜膜，收集分子量100-10000的部分得濾液E；取濃縮液D，加2-4倍量乙醇，靜置，過濾，濾液過脫色樹脂，收集洗脫液，回收乙醇至無醇味，濃縮，得濃縮液F；(5)合并洗脫液E和濃縮液F，減壓濃縮至適量，冷藏過濾，濾液用碳酸鈉溶液調(diào)pH值至7.0～7.5，加入0.3％～0.5％針用活性炭，加熱，濾過，濾液即為板藍根抗病毒有效部位。
上述制備工藝步驟(4)中使用的大孔吸附樹脂包括D101、D21、AB-8等型號的吸附樹脂。所使用的脫色樹脂包括ZTC-2，D301。
本發(fā)明還提供了一種抗病毒的藥物制劑，其含有本發(fā)明所述的板藍根抗病毒有效部位和藥用輔料。該藥物制劑可以是各種劑型，包括注射劑、大容量注射劑、凍干粉針劑，給藥途經(jīng)為靜脈注射，藥用輔料可以是臨床上可接受的pH調(diào)節(jié)劑諸如氫氧化鈉、碳酸鈉；滲透壓調(diào)節(jié)劑諸如氯化鈉；冷凍干燥賦形劑諸如右旋糖酐、甘露醇、山梨醇、果糖或木醇糖；增溶劑及注射用水。
本發(fā)明包含板藍根抗病毒有效部位的注射劑的制備方法為取本發(fā)明制得的板藍根抗病毒有效部位，加臨床上可接受的藥用輔料諸如甘露醇，并加注射用水，用碳酸鈉溶液(10％)調(diào)pH值至7.0-7.5，冷藏過夜，精濾，灌封，100℃流通蒸汽滅菌，即得。注射劑的規(guī)格為2～10ml，每2ml相當(dāng)于原藥材1g。用法一日三次，每次1-3支。
本發(fā)明包含板藍根抗病毒有效部位的大容量注射液的制備方法為取本發(fā)明制得的板藍根抗病毒有效部位，加等滲調(diào)節(jié)劑、甘露醇和注射用水，用(10％)碳酸鈉溶液調(diào)pH值至7.0～7.5，冷藏過夜，精濾，灌裝于輸液瓶中，100℃流通蒸汽滅菌30min，即得。該大容量注射劑的規(guī)格為100～500ml，每100ml相當(dāng)于原藥材1g。
本發(fā)明包含板藍根抗病毒有效部位的凍干粉針劑的制備方法為取板藍根抗病毒有效部位，加山梨醇、右旋糖酐等臨床上可接受的凍干粉針賦形劑為支撐材料，再加注射用水，用(10％)碳酸鈉溶液調(diào)pH值至7.0～7.5，冷藏過夜，精濾，灌裝于西林瓶中，按凍干曲線冷凍干燥即得。凍干粉針劑的規(guī)格為200～600mg，每200mg相當(dāng)于原藥材1g。
板藍根的主要化學(xué)成分有靛苷(indican)、靛藍(indigo)、靛玉紅(indirubin)、菘藍苷B(isatanB)、尿苷(uridine)、次黃嘌呤(hypoxanthine)、尿嘧啶(uracil)、水楊酸(salicylicacid)、青黛酮(qingdainone)、胡蘿卜苷(daucosterol)、腺苷(adenosine)、芥子苷、β-谷甾醇、棕櫚酸、蔗糖、多種氨基酸(精氨酸、脯氨酸、酪氨酸、纈氨酸、γ-氨基丁酸等)、多糖、epigoitrin以及α-羥基-3-丁烯基-硫氰化物，此外尚含有抗革蘭氏陰性或陽性細菌的抑菌物質(zhì)等。
板藍根的主要藥理作用《本草綱目》記載板藍根主治“時氣頭痛、火熱口瘡、熱病發(fā)斑、熱毒下痢、喉痹、丹毒、黃疸、痄腮......”?，F(xiàn)代實驗證明板藍根有以下藥理活性(1)抗病毒作用。板藍根對肝炎病毒(HBV及HAV)、甲型流感病毒、乙型流感病毒、腮腺炎病毒、乙型腦炎病毒、腎病出血熱病毒(HFRSV)、單皰病毒(HSV-2)、人巨細胞病毒(HCMV)、柯薩奇病毒(CVB3)均有抑制作用。
(2)抗菌作用。板藍根水浸液對金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、枯草桿菌、八聯(lián)球菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、甲型鏈球菌、肺炎雙球菌、流感桿菌、腦膜炎雙球菌均有抑制作用，抑菌有效成分為色胺酮等一些化學(xué)方法尚未闡明的吲哚類衍生物。
(3)抗內(nèi)毒素作用。板藍根注射液經(jīng)鱟試驗法、家兔熱原檢查法[4]研究證明有滅活內(nèi)毒素作用。據(jù)報道苯甲酸、水楊酸、2-氨基苯甲酸、丁香酸在體外具有抗內(nèi)毒素的活性。
(4)免疫調(diào)節(jié)作用。板藍根多糖(HP)對特異性、非特異性免疫、體液免疫及細胞免疫均能起到一定促進作用。腹腔注射板藍根多糖25～100mg/kg可顯著增強二硝基氯苯及環(huán)磷酰胺所致免疫抑制小鼠的遲發(fā)型過敏反應(yīng)。
(5)保肝作用。板藍根中的氨基酸可以降低血氨、影響中樞傳遞介質(zhì)，糾正肝功能低下造成的氨基酸失橫，還有趨脂作用，對部分肝臟疾病具有直接治療作用。據(jù)有關(guān)報道，用精氨酸治療114例病毒性肝炎谷丙轉(zhuǎn)胺酶異常的病人，總有效率為92.98％，臨床痊愈和基本痊愈率為72.81％，其中急性病毒性肝炎的有效率為100％，且用于治療期間未發(fā)現(xiàn)任何副作用。
(6)抗腫瘤作用。50％板藍根注射液對小鼠Friend紅白血病細胞3CL-8有體外殺傷作用，但腹腔注射本品對3CL-8紅白血病細胞無殺傷作用。脂溶性板藍根提取物——板藍根二酮B對肝癌BEL-7402細胞、卵巢癌A2780細胞具有較強的體外殺傷能力，其半數(shù)抑制量分別為8.2μg/ml和7.8μg/ml。
本發(fā)明的板藍根提取純化工藝保留了板藍根有效成分氨基酸、結(jié)合型氨基酸、腺苷、尿苷以及包括丁香酸在內(nèi)的各種有機酸，達到了最大限度的保留了有效成分，除去有關(guān)雜質(zhì)成分的目的，使固體物中可測成分達到80％以上。由本發(fā)明提取純化工藝制備的板藍根抗病毒有效部位其抗病毒作用確切，質(zhì)量穩(wěn)定，安全性好，起效快，生物利用度高，對流感、病毒性肝炎、上呼吸道感染、腮腺炎，角膜炎及其它病毒性疾病均具有很好的治療效果。
主要藥效學(xué)試驗本發(fā)明對含有板藍根抗病毒有效部位的注射劑進行了抗內(nèi)毒素、保肝等方面的研究，部分研究結(jié)果表明(1)板藍根注射液抗內(nèi)毒素活性試驗采用家兔致熱法。受試組按1g藥材/kg給藥，模型組注射內(nèi)毒素后1h、2h、3h的體溫變化分別為1.13±0.047℃、1.20±0.082℃、1.67±0.050℃，受試組為0.87±0.050℃、0.60±0.080℃、0.067±0.21℃。受試組家兔的體溫均低于模型組，與其比較有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。板藍根注射液可顯著抑制家兔發(fā)熱，具有抗內(nèi)毒素活性。
(2)通過板藍根注射液對四氯化碳所致肝損傷小鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶(SGPT)的影響來研究了板藍根注射液的保肝作用。模型組酶活力單位為262.55±26.17，空白組為55.82±10.74，受試組1.3g藥材/kg與2.6g藥材/kg給藥后的酶活力單位分別為229.52±42.98、213.00±55.77，與模型組比較具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。板藍根注射液對肝臟有一定的保護作用。
具體實施例方式
下列實施例是為了進一步舉例描述本發(fā)明，而不是以任何方式限制本發(fā)明。
實施例1注射液取板藍根1000g，加7倍量水煎煮1小時，藥渣加5倍量水再同法煎煮1小時，合并煎煮液，濾過，濾液濃縮約1000ml，加乙醇(95％)使含醇量達65％，攪勻，室溫放置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇至無醇味，并濃縮至約1000ml，冷藏放置過夜，濾過，加熱煮沸1小時，加水至1000ml，冷藏24小時，濾過，濾液用氨試液調(diào)節(jié)pH值至8.5，冷藏48小時，濾過，濾液過D101大孔樹脂，水洗約2倍樹脂床體積至無茚三酮反應(yīng)，收集流出液和水洗液，過聚醚砜膜(截留分子量為10000)，收集分子量小于10000的流出液，再用70％醇洗大孔樹脂至無色或顏色很淺，約5～6倍樹脂床體積，減壓回收乙醇至無醇味，濃縮后加3倍量乙醇，冷藏放置24小時，過濾，濾液過ZTC-2脫色樹脂，收集洗脫液，回收乙醇至無醇味，濃縮，與上述流出液合并，減壓濃縮至約900ml，冷藏過濾，濾液用10％碳酸鈉溶液調(diào)pH值至7.0，加入0.3％針用活性炭，加熱0.5小時，濾過。濾液加20g甘露醇，并加注射用水至2000ml，用10％碳酸鈉溶液調(diào)pH值至7.0～7.5，冷藏過夜，微孔濾膜過濾，熔封于2ml安瓿中，100℃流通蒸汽滅菌30min，即得。
實施例2大容量注射液取板藍根1000g，加7倍量水煎煮1小時，藥渣加5倍量水再同法煎煮1小時，合并煎煮液，濾過，濾液濃縮至濃縮至約1000ml，加乙醇(95％)使含醇量達65％，攪勻，室溫放置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇至無醇味，并濃縮至約1000ml，冷藏放置過夜，濾過，加熱煮沸1小時，加水至1000ml，冷藏24小時，濾過，濾液用氨試液調(diào)節(jié)pH值至8.5，冷藏48小時，濾過，濾液過D101大孔樹脂，水洗約2倍樹脂床體積至無茚三酮反應(yīng)，收集流出液和水洗液，過聚醚砜膜(截留分子量為10000)，收集分子量小于10000的流出液，再用70％醇洗大孔樹脂至無色或顏色很淺，約5～6倍樹脂床體積，減壓回收乙醇至無醇味，濃縮后加3倍量乙醇，冷藏放置24小時，過濾，濾液過ZTC-2脫色樹脂，收集洗脫液，回收乙醇至無醇味，濃縮，與上述流出液合并，減壓濃縮至約900ml，冷藏過濾，濾液用10％碳酸鈉溶液調(diào)pH值至7.0，加入0.3％針用活性炭，加熱0.5小時，濾過。濾液加650g氯化鈉和20g甘露醇，再加注射用水至全量100000ml，用10％碳酸鈉溶液調(diào)pH值至7.0，冷藏過夜，精濾，灌裝于100ml輸液瓶中，100℃流通蒸汽滅菌30分鐘，即得。
實施例3凍干粉針取板藍根1000g，加7倍量水煎煮1小時，藥渣加5倍量水再同法煎煮1小時，合并煎煮液，濾過，濾液濃縮至濃縮至約1000ml，加乙醇(95％)使含醇量達65％，攪勻，室溫放置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇至無醇味，并濃縮至約1000ml，冷藏放置過夜，濾過，加熱煮沸1小時，加水至1000ml，冷藏24小時，濾過，濾液用氨試液調(diào)節(jié)pH值至8.5，冷藏48小時，濾過，濾液過D101大孔樹脂，水洗約2倍樹脂床體積至無茚三酮反應(yīng)，收集流出液和水洗液，過聚醚砜膜(截留分子量為10000)，收集分子量小于10000的流出液，再用70％醇洗大孔樹脂至無色或顏色很淺，約5～6倍樹脂床體積，減壓回收乙醇至無醇味，濃縮后加3倍量乙醇，冷藏放置24小時，過濾，濾液過ZTC-2脫色樹脂，收集洗脫液，回收乙醇至無醇味，濃縮，與上述流出液合并，減壓濃縮至約900ml，冷藏過濾，濾液用10％碳酸鈉溶液調(diào)pH值至7.0，加入0.3％針用活性炭，加熱0.5小時，濾過。濾液加180g右旋糖酐和40g甘露醇，再加注射用水至全量2500ml，微孔濾膜過濾，分裝于西林瓶中，每瓶裝量為2.5ml。凍干條件預(yù)凍溫度-50℃，預(yù)凍時間3小時；升華溫度-25℃，升華時間10小時；第一次干燥溫度20℃，干燥時間4小時；第二次干燥溫度40℃，干燥時間6～8小時，即得。
權(quán)利要求
1.一種板藍根抗病毒有效部位，該方法包括以下步驟(1)取板藍根藥材，加水煎煮二次，合并煎煮液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.0～1.1；(2)取上述濃縮液，加乙醇使含醇量達65～70％，攪勻，靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮，靜置，濾過，得濾液A；(3)取濾液A，加熱煮沸0.5-2小時，并補加水至原體積，冷藏，濾過，濾液用氨試液調(diào)節(jié)pH值至8.0～8.5，冷藏，濾過，得濾液B；(4)取濾液B，過大孔吸附樹脂，水洗至無茚三酮反應(yīng)，收集流出液和水洗液，得洗脫液C；再用醇洗至無色或顏色很淺，減壓回收乙醇至無醇味，得濃縮液D；取洗脫液C，過聚醚砜膜，收集分子量100-10000的部分得濾液E；取濃縮液D，加乙醇，靜置，過濾，濾液過脫色樹脂，收集洗脫液，回收乙醇至無醇味，濃縮，得濃縮液F；(5)合并洗脫液E和濃縮液F，減壓濃縮，冷藏過濾，濾液用碳酸鈉溶液調(diào)pH值至7.0～7.5，加入針用活性炭，加熱，濾過，濾液即為板藍根抗病毒有效部位。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的板藍根抗病毒有效部位，該方法包括以下步驟(1)取板藍根藥材，加7～10倍量水煎煮0.5-2小時，藥渣加3-6倍量水再同法煎煮0.5-2小時，合并煎煮液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.0～1.1；(2)取上述濃縮液，加乙醇使含醇量達65～70％，攪勻，靜置，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮，冷藏過夜，濾過，得濾液A；(3)取濾液A，加熱煮沸0.5-2小時，并補加水至原體積，冷藏24～48小時，濾過，濾液用氨試液調(diào)節(jié)pH值至8.0～8.5，冷藏48小時以上，濾過，得濾液B；(4)取濾液B，過大孔吸附樹脂，水洗至無茚三酮反應(yīng)，收集流出液和水洗液，得洗脫液C；再用60-80％醇洗至無色或顏色很淺，減壓回收乙醇至無醇味，得濃縮液D；取洗脫液C，過聚醚砜膜，收集分子量100-10000的部分得濾液E；取濃縮液D，加2-4倍量乙醇，靜置，過濾，濾液過脫色樹脂，收集洗脫液，回收乙醇至無醇味，濃縮，得濃縮液F；(5)合并洗脫液E和濃縮液F，減壓濃縮至適量，冷藏過濾，濾液用碳酸鈉溶液調(diào)pH值至7.0～7.5，加入0.3％～0.5％針用活性炭，加熱，濾過，濾液即為板藍根抗病毒有效部位。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的板藍根抗病毒有效部位，其中所述的大孔吸附樹脂包括D101、D21、AB-8型號的吸附樹脂；所述的脫色樹脂包括ZTC-2，D301。
4.一種抗病毒的藥物制劑，其含有權(quán)利要求3所述的板藍根抗病毒有效部位和藥用輔料。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗病毒的藥物制劑，其中所述的藥用輔料是臨床上可接受的氫氧化鈉、碳酸鈉pH調(diào)節(jié)劑；氯化鈉滲透壓調(diào)節(jié)劑；右旋糖酐、甘露醇、山梨醇、果糖或木醇糖冷凍干燥賦形劑；增溶劑及注射用水。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗病毒的藥物制劑，其是注射劑或凍干粉針劑的形式。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗病毒的藥物制劑的制備方法，所述的藥物制劑是注射劑形式，該方法包括以下步驟取板藍根抗病毒有效部位，加臨床上可接受的藥用輔料甘露醇，并加注射用水，用碳酸鈉溶液調(diào)pH值至7.0-7.5，冷藏過夜，精濾，灌封，滅菌，即得。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗病毒的藥物制劑的制備方法，所述的藥物制劑是凍干粉針劑形式，該方法包括以下步驟取板藍根抗病毒有效部位，加山梨醇、右旋糖酐臨床上可接受的凍干粉針賦形劑為支撐材料，再加注射用水，用碳酸鈉溶液調(diào)pH值至7.0～7.5，冷藏過夜，精濾，灌裝于西林瓶中，按凍干曲線冷凍干燥即得。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種板藍根的抗病毒有效部位及其制備方法。本發(fā)明還涉及包含板藍根的抗病毒有效部位的藥物制劑及其制備方法。本發(fā)明的板藍根抗病毒有效部位的制備工藝中的主要特點是采用大孔吸附樹脂和脫色樹脂聯(lián)合純化精制，同時采用膜過濾技術(shù)，最大限度地保留了有效成分，除去有關(guān)雜質(zhì)成分。本發(fā)明的藥物制劑對流感、病毒性肝炎、上呼吸道感染、腮腺炎，角膜炎及其它病毒性疾病均具有很好的治療效果。
文檔編號A61K125/00GK1853665SQ20051006445
公開日2006年11月1日 申請日期2005年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月18日
發(fā)明者劉玉輝, 唐星 申請人:深圳市天一譽醫(yī)藥投資咨詢有限公司