專利名稱：芳基乙烯磺酰胺衍生物的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及N-[6-甲氧基-5-(2-甲氧基苯氧基)-2-(嘧啶-2-基)嘧啶-4-基]-2-苯基乙烯磺酰胺或其鹽的新用途。
背景技術(shù)：
內(nèi)皮素(endothelin，以下稱“ET”)是由21個(gè)氨基酸組成的內(nèi)源性具生理活性的肽，已知存在氨基酸序列稍有不同的ET-1、ET-2和ET-3三種異肽(isopeptide)。ET通過與靶細(xì)胞膜上的ET受體結(jié)合而呈現(xiàn)生理活性，ET受體至今至少已知有ETA和ETB兩種亞型存在。ETA受體對(duì)ET-1及ET-2的親和性高于ET-3，而ETB受體對(duì)ET-1、ET-2和ET-3顯示同等的親和性。
N-[6-甲氧基-5-(2-甲氧基苯氧基)-2-(嘧啶-2-基)嘧啶-4-基]-2-苯基乙烯磺酰胺(以下稱“化合物A”)或其鹽，在國際公開第97/22595號(hào)公報(bào)中被揭示，具體揭示了其抑制ET-1對(duì)ETA受體的結(jié)合及抑制ET-1誘發(fā)的血管收縮、升壓的作用，但對(duì)此外的作用未具體揭示。另一方面，指出與ET可能有關(guān)的疾病，例如例舉了原發(fā)性高血壓、肺動(dòng)脈高壓、紅細(xì)胞生成素誘發(fā)的高血壓、環(huán)孢素A誘發(fā)的高血壓、支氣管哮喘、急性腎衰竭、慢性腎衰竭、腎小球腎炎、環(huán)孢素誘發(fā)的腎衰竭、急性心肌梗塞、不穩(wěn)定型心絞痛、慢性心力衰竭、主要是蛛網(wǎng)膜下出血后的腦血管痙攣、腦缺血障礙、尿失禁、良性前列腺肥大、動(dòng)脈硬化、雷諾綜合征、糖尿病性末稍循環(huán)障礙、糖尿病性腎病、先兆子癇、早產(chǎn)、消化性潰瘍、肝功能衰竭、風(fēng)濕病、PTCA后的再狹窄、慢性呼吸衰竭、慢性阻塞性肺病、肺心病、急性呼吸衰竭、肺水腫、郁血性肝病、成人呼吸窘迫綜合征、間質(zhì)性肺炎、肺纖維化、青光眼、變形性關(guān)節(jié)病、慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肝硬變、炎癥性腸病、癌等許多疾病的名稱。
發(fā)明的揭示本發(fā)明者以創(chuàng)制新型治療藥為目的，對(duì)化合物A或其鹽用于更具體的疾病的治療的可能性進(jìn)行了深入探討，結(jié)果意外地發(fā)現(xiàn)化合物A或其鹽能改善前述國際公開第97/22595號(hào)公報(bào)中未具體揭示的糖尿病的以下特定癥狀。即，糖尿病中的(1)血糖上升，(2)并發(fā)早期腎病后的血中脂質(zhì)上升，(3)并發(fā)早期腎病后的腎功能障礙，(4)并發(fā)早期腎病后尿中白蛋白排泄增加，(5)并發(fā)早期腎病后腎小球過度濾過，(6)轉(zhuǎn)為慢性腎衰竭后的腎功能障礙，(7)轉(zhuǎn)為慢性腎衰竭后的尿蛋白排泄增加。
即如下述試驗(yàn)例1所示，化合物A或其鹽對(duì)鏈佐星(STZ)誘發(fā)糖尿病的大鼠，口服1mg/kg/day對(duì)STZ所引起的顯著的血中葡萄糖濃度上升、血中膽固醇濃度上升和血中甘油三酯濃度上升均顯現(xiàn)明顯的改善作用。糖尿病并發(fā)早期腎病時(shí)的病癥常顯現(xiàn)為血中膽固醇濃度或血中甘油三酯濃度的上升，這是腎功能障礙引起的白蛋白等蛋白質(zhì)泄漏的結(jié)果。
這些改善作用在上述國際公開第97/22595號(hào)公報(bào)中未揭示，也未暗示，是本發(fā)明者首次發(fā)現(xiàn)的化合物A或其鹽的新作用。而且，據(jù)報(bào)道具有ETA受體拮抗作用的直鏈三肽化合物FR139317及非肽類ETA/B受體拮抗劑波生坦，對(duì)STZ誘發(fā)糖尿病的大鼠的血漿葡萄糖濃度不引起變化(Progress in Medicine，15(10)，2108，1995，Kidney Int.，57(5)，1882，2000)，非肽類ETA受體拮抗劑達(dá)盧生坦(darusentan)口服100mg/kg可使血中甘油三酯水平降低(但也不過是STZ誘發(fā)糖尿病的大鼠的甘油三酯水平不上升，與對(duì)照組相比甘油三酯水平下降)，而血中葡萄糖濃度無變化(J.Pharm.Exp.Ther.，293(2)，351，2000)。即，尚未見ET受體拮抗劑具有改善糖尿病的血糖升高的作用的報(bào)告，以及具有改善糖尿病并發(fā)早期腎病后血中脂質(zhì)升高的作用的報(bào)告。
而且，如下述試驗(yàn)例1所示，化合物A或其鹽對(duì)STZ誘發(fā)糖尿病的大鼠，口服1mg/kg/d對(duì)STZ所引起的顯著增加尿中的白蛋白的排泄有明顯的改善作用，對(duì)STZ所引起的腎小球過度濾過也顯示改善的傾向，即顯現(xiàn)出腎功能障礙的改善作用。此外，如下述試驗(yàn)例2所示，口服1mg/kg/d的化合物A或其鹽對(duì)慢性腎衰竭模型動(dòng)物，即腎切除5/6的大鼠的顯著增加的尿蛋白排泄具有顯著的改善作用，即顯現(xiàn)出腎功能障礙的改善作用，而對(duì)血壓沒有影響。
作為上述國際公開第97/22595號(hào)公報(bào)記載的寄予期望的許多疾病名稱之一，與并發(fā)上述的早期腎病或轉(zhuǎn)為慢性腎衰竭的糖尿病的腎功能障礙的改善作用有關(guān)聯(lián)的，可列舉“糖尿病性腎病”、“慢性腎衰竭”、“急性腎衰竭”，但未揭示證據(jù)，關(guān)于改善尿中白蛋白排泄增加的作用，改善腎小球過度濾過的作用、改善尿蛋白排泄增加的作用，則完全沒有記載。而且，對(duì)于上述肽性FR13917，雖有在腹腔內(nèi)持續(xù)注入對(duì)STZ誘發(fā)糖尿病的大鼠能減少微量白蛋白尿和抑制腎小球細(xì)胞外基質(zhì)基因表達(dá)的報(bào)告(Diabetes 44，895-899，1995)，但關(guān)于可口服的非肽類ET受體拮抗劑，只有上述達(dá)盧生坦在與本發(fā)明的有效成分相比以極高的劑量100mg/kg/d服用160日才具有減少STZ誘發(fā)的糖尿病大鼠的微量白蛋白尿的傾向(J.Cardiovasc，Pharmacol.，3 1(Suppl 1)，S492-S495，1998)的報(bào)道。而慢性腎衰竭，作為進(jìn)行性慢性腎疾病之一的糖尿病性腎病的最終臨床表現(xiàn)，從糖尿病性腎病轉(zhuǎn)為慢性腎衰竭后直到透析療法期(腎與透析，41，腎疾患治療手冊，191-193，1996臨增)，還沒有口服ETA受體拮抗劑能改善慢性腎衰竭時(shí)的尿蛋白排泄增加的報(bào)道。
此外，如下述試驗(yàn)例3所示，化合物A或其鹽口服100mg/kg的高劑量也不會(huì)使自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)的全身血壓發(fā)生變化。
糖尿病性腎病目前的治療采用ACE抑制劑和鈣拮抗劑等降壓療法進(jìn)行，但會(huì)影響全身血流動(dòng)態(tài)的降壓藥在降低血壓的同時(shí)可能使腎灌流壓降低。特別對(duì)腎功能低下的患者，必須注意ACE抑制劑引起的急性腎衰竭(最新醫(yī)學(xué)，48(9)，84-90，1993；治療學(xué)，30(8)，27-32，1996)。作為保存期慢性腎衰竭的藥物治療，ACE抑制劑在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中顯示出有用性，但對(duì)腎功能低下的急性腎衰竭臨床上認(rèn)為要特別注意，因此對(duì)末期腎衰減，ACE抑制劑的處方受到限制。另外，下述試驗(yàn)例2，即腎功能低下例給藥時(shí)，服用ACE抑制劑依那普利組見2例死亡，而服用本發(fā)明的有效成分組則未見死亡例。
糖尿病患者和糖尿病模型動(dòng)物的ET-1的產(chǎn)生出現(xiàn)亢進(jìn)(Diabetologia，33，306-310，1990；J.Lab.Clin.Meb.，122，149-156，1993)，血中ET-1的濃度與腎病的嚴(yán)重程度相關(guān)(Jpn.J.Nephrol.，38(Suppl 1)，141，1996)。而且據(jù)報(bào)道，ET-1在包括腎血管的血管內(nèi)皮細(xì)胞及腎小球、集合管等腎臟部位產(chǎn)生(Kidney Int.，45，336-344，1996)，會(huì)使腎臟小動(dòng)脈(輸入及輸出小動(dòng)脈)收縮，在引起腎小球膜細(xì)胞的收縮和增殖的同時(shí)，也使細(xì)胞外基質(zhì)蓄積(血管和內(nèi)皮，2(3)，297-304，1992；J.Clin.Invest.，83，708-712，1989)，對(duì)腎小管中鈉和水的重吸收具有抑制作用(醫(yī)學(xué)的發(fā)展，170(5)，393-396，1994)。腎小球膜細(xì)胞的增殖是膜區(qū)域擴(kuò)大向腎小球硬化病變發(fā)展的前階段，是引起最終腎功能低下的一個(gè)原因。如下述試驗(yàn)例4所示，化合物A或其鹽對(duì)大鼠腎小球膜細(xì)胞的由ET-1引起的細(xì)胞增殖顯現(xiàn)抑制作用，即對(duì)伴有ET誘發(fā)的基質(zhì)變化的腎功能障礙，例如糖尿病性腎病、ET誘發(fā)的早期腎病、伴有作為糖尿病并發(fā)癥的最終臨床表現(xiàn)的腎小球硬化病變的慢性腎衰竭等引起的腎功能障礙具有改善作用。
即，本發(fā)明提供了以化合物A或其藥學(xué)上許可的鹽為有效成分、能改善糖尿病患者的選自以下(1)～(7)的1個(gè)以上的特定癥狀的醫(yī)藥組合物。
(1)血糖上升，(2)并發(fā)早期腎病后的血中脂質(zhì)上升，(3)并發(fā)早期腎病后的腎功能障礙，(4)并發(fā)早期腎病后尿中白蛋白排泄的增加，(5)并發(fā)早期腎病后腎小球過度濾過，(6)轉(zhuǎn)為慢性腎衰竭后的腎功能障礙，(7)轉(zhuǎn)為慢性腎衰竭后的尿蛋白排泄增加。
更具體說，本發(fā)明提供了以化合物A或其藥學(xué)上許可的鹽為有效成分的改善糖尿病患者的血糖上升的醫(yī)藥組合物；改善并發(fā)早期腎病后的糖尿病患者的血中脂質(zhì)上升的醫(yī)藥組合物、改善腎功能障礙的醫(yī)藥組合物、作為改善尿中白蛋白排泄增加的醫(yī)藥組合物的改善腎功能障礙的醫(yī)藥組合物及/或作為改善腎小球過度濾過的醫(yī)藥組合物的改善腎功能障礙的醫(yī)藥組合物；改善轉(zhuǎn)為慢性腎衰竭后的糖尿病患者的腎功能障礙的醫(yī)藥組合物及/或作為改善尿中蛋白質(zhì)排泄增加的醫(yī)藥組合物的改善腎功能障礙的醫(yī)藥組合物；改善糖尿病性腎病患者的腎功能障礙的醫(yī)藥組合物、作為改善尿中白蛋白排泄增加的醫(yī)藥組合物的改善腎功能障礙的醫(yī)藥組合物及/或作為改善腎小球過度濾過的醫(yī)藥組合物的改善腎功能障礙的醫(yī)藥組合物；改善ET誘發(fā)的早期腎病患者的腎功能障礙的醫(yī)藥組合物、作為改善尿中白蛋白排泄增加的醫(yī)藥組合物的改善腎功能障礙的醫(yī)藥組合物及/或作為改善腎小球過度濾過的醫(yī)藥組合物的改善腎功能障礙的醫(yī)藥組合物；改善慢性腎衰竭患者的腎功能障礙的醫(yī)藥組合物及/或作為改善尿蛋白排泄增加的醫(yī)藥組合物的改善腎功能障礙的醫(yī)藥組合物。
本發(fā)明還涉及化合物A或其藥學(xué)上許可的鹽在制備糖尿病患者的選自上述(1)～(7)的1個(gè)以上特定癥狀的改善劑中的應(yīng)用。
具體來說，本發(fā)明涉及化合物A或其藥學(xué)上許可的鹽在制備糖尿病患者的血糖上升的改善劑；并發(fā)早期腎病后的糖尿病患者的血中脂質(zhì)上升的改善劑、腎功能障礙改善劑、作為尿中白蛋白排泄增加的改善劑的腎功能障礙改善劑及/或作為腎小球過度濾過改善劑的腎功能障礙改善劑；轉(zhuǎn)為慢性腎衰竭后的糖尿病患者的腎功能障礙改善劑及/或作為尿蛋白排泄增加的改善劑的腎功能改善劑；
糖尿病性腎病患者的腎功能障礙改善劑，作為尿中白蛋白排泄增加的改善劑的腎功能障礙改善劑及/或作為腎小球過度濾過改善劑的腎功能障礙改善劑；ET誘發(fā)的早期腎病患者的腎功能障礙改善劑、作為尿中白蛋白排泄增加的改善劑的腎功能障礙改善劑及/或作為腎小球過度濾過的改善劑的腎功能障礙改善劑；慢性腎衰竭患者的腎功能障礙改善劑及/或作為尿蛋白排泄增加的改善劑的腎功能障礙改善劑中的應(yīng)用。
此外，本發(fā)明提供了包括給患者服用治療有效量的化合物A或其藥學(xué)上許可的鹽在內(nèi)的糖尿病患者的選自上述(1)～(7)的1個(gè)以上的特定癥狀的改善方法。
具體來說，本發(fā)明提供了包括給患者服用治療有效量的化合物A或其藥學(xué)上許可的鹽在內(nèi)的糖尿病患者的血糖上升的改善方法；并發(fā)早期腎病后的糖尿病患者的血中脂質(zhì)上升的改善方法、腎功能障礙改善方法、作為尿中白蛋白排泄增加的改善方法的腎功能障礙改善方法及/或作為腎小球過度濾過的改善方法的腎功能障礙的改善方法；轉(zhuǎn)為慢性腎衰竭后的糖尿病患者的腎功能障礙的改善方法及/或作為尿中蛋白質(zhì)排泄增加的改善方法的腎功能障礙的改善方法；糖尿病性腎病患者的腎功能障礙的改善方法、作為尿中白蛋白排泄增加的改善方法的腎功能障礙的改善方法及/或作為腎小球過度濾過的改善方法的腎功能障礙的改善方法；ET誘發(fā)的早期腎病患者的腎功能障礙的改善方法、作為尿中白蛋白排泄增加的改善方法的腎功能障礙的改善方法及/或作為腎小球過度濾過的改善方法的腎功能障礙的改善方法；慢性腎衰竭患者的腎功能障礙的改善方法及/或作為尿蛋白排泄增加的改善方法的腎功能障礙的改善方法。
此外，對(duì)作為糖尿病性腎病的現(xiàn)行療法而實(shí)施的降壓療法來說，要擔(dān)心影響全身血流動(dòng)態(tài)而發(fā)生血壓低下和腎灌流壓低下，而本發(fā)明的有效成分引起的全身血壓變化的程度不必?fù)?dān)心，故可成為有這類擔(dān)心的患者能夠服用的藥物。而且，本發(fā)明的有效成分口服時(shí)的吸收特別好，可成為良好的口服治療藥。
下面對(duì)本發(fā)明作更詳細(xì)的說明。
根據(jù)繁田等平成3年的厚生省糖尿病調(diào)查研究報(bào)告書，腎病隨著病情的進(jìn)展可分類為第1期(腎病前期)、第2期(早期腎病期)、第3期(顯性腎病期)、第4期(腎衰竭期)、第5期(透析療法期)。因此，本說明書中的“并發(fā)早期腎病后的糖尿病患者”是指糖尿病并發(fā)的腎病處于第2期以后的患者；“轉(zhuǎn)為慢性腎衰竭后的糖尿病患者”是指糖尿病并發(fā)的腎病處于第4期以后的患者；“ET誘發(fā)的早期腎病患者”是指糖尿病等因ET亢進(jìn)引發(fā)的腎病處于第2期以后的患者。
本說明書中的“全身血壓不發(fā)生變化”是指對(duì)作為糖尿病性腎病的現(xiàn)行療法而實(shí)施的降壓療法來說，全身的血壓變化不必?fù)?dān)心到影響全身血流動(dòng)態(tài)而引發(fā)血壓低下和腎灌流壓低下的程度。因此，“不產(chǎn)生全身血壓變化的腎功能障礙改善用醫(yī)藥組合物”是指對(duì)擔(dān)心引起急性腎衰竭而禁忌或慎用ACE抑制劑等的腎功能低下病例等也能夠服用的腎功能障礙改善用醫(yī)藥組合物。
本發(fā)明的醫(yī)藥的有效成分是化合物A或其藥學(xué)上許可的鹽。這種鹽可列舉上述國際公開第97/22595號(hào)公報(bào)記載的鹽，具體可列舉與鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、硝酸、磷酸等無機(jī)酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、天冬氨酸或谷氨酸等有機(jī)酸的酸加成鹽，與鈉、鉀、鎂、鈣、鋁等無機(jī)堿、甲胺、乙胺、乙醇胺、賴氨酸、鳥氨酸等有機(jī)堿的鹽和銨鹽等。特別好的是鉀鹽。
本發(fā)明的有效成分包括所有的各種異構(gòu)體的混合物以及分離的異構(gòu)體、水合物和溶劑合物。而且本發(fā)明的有效成分有時(shí)也存在多晶型，故包括所有這些晶型。
這些化合物根據(jù)上述國際公開第97/22595號(hào)公報(bào)記載的制法或參照這些制法容易得到。
本發(fā)明的藥劑可用適于口服或非口服的有機(jī)或無機(jī)載體、賦形劑及其他添加劑，根據(jù)常規(guī)方法調(diào)制成口服固體制劑、口服液體制劑或注射劑。本發(fā)明的醫(yī)藥的有效成分因具優(yōu)良的口服吸收性，故本發(fā)明的藥劑適于制成口服制劑。最好是患者自己容易服用，且保存、攜帶方便的口服固體制劑。
口服固體制劑可使用片劑、散劑、細(xì)粒劑、顆粒劑、膠囊劑、丸劑、緩釋劑等。這類固體組合物中的1種以上的活性物質(zhì)至少與1種惰性稀釋劑，例如乳糖、甘露醇、葡萄糖、羥丙纖維素、微晶纖維素、淀粉、玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、鋁硅酸鎂等混合。組合物依常規(guī)方法可含有惰性稀釋劑以外的添加劑，例如羥丙纖維素、羥丙甲纖維素等粘合劑；硬脂酸鎂、聚乙二醇、淀粉、滑石粉等潤滑劑；纖維素乙醇酸鈣、羥甲纖維素鈣等崩解劑；乳糖等穩(wěn)定劑；谷氨酸或天冬氨酸等助溶劑；聚乙二醇等增塑劑；二氧化鈦、滑石粉、黃色氧化鐵等著色劑。片劑或丸劑必要時(shí)可包以蔗糖、明膠、瓊脂、果膠、羥丙纖維素、羥丙甲纖維素鄰苯二甲酸酯等糖衣或胃溶性或腸溶性薄膜。
口服液體制劑包括藥劑學(xué)上許可的乳劑、溶液劑、懸浮劑、糖漿劑、酏劑等，一般可含有常用的惰性稀釋劑，例如精制水、乙醇。這種組合物中可含有惰性稀釋劑以外的濕潤劑、懸浮劑等助劑、甜味劑、調(diào)味劑、芳香劑、防腐劑。
靜脈注射、肌肉注射、皮下注射等注射劑中包含無菌的水性或非水性的溶液劑、懸浮劑、乳濁劑。作為水性的溶液劑、懸浮劑的稀釋劑，例如有丙二醇、聚乙二醇、橄欖油等植物油、乙醇等醇類、吐溫80等。這類組合物也可含有防腐劑、濕潤劑、乳化劑、分散劑、乳糖等穩(wěn)定劑、谷氨酸和天冬氨酸等助溶劑等助劑。它們可通過除菌濾器過濾或配合殺菌劑或經(jīng)照射而無菌化。它們也可制成無菌的固體組合物，于臨用前以無菌水或無菌的注射用溶劑溶解后再使用。
本發(fā)明的有效成分化合物的給藥量考慮給藥途徑、疾病癥狀、給藥對(duì)象的年齡和性別等依不同情況而適當(dāng)決定，但通?？诜r(shí)成人用量為0.1～100mg/d，較好為1～20mg/d，分1～2次給藥。
此外，本發(fā)明的藥劑可與其他治療糖尿病的藥物同時(shí)或錯(cuò)開時(shí)間并用。可與本發(fā)明的藥劑并用的藥劑包括胰島素、中性胰島素、無定形胰島素鋅水性懸浮劑、雙相低精蛋白胰島素水性懸浮劑、低精蛋白胰島素水性懸浮劑、胰島素鋅水性懸浮劑、魚精蛋白胰蛋素鋅水性懸浮劑、結(jié)晶胰島素鋅水性懸浮劑等胰島素制劑；甲苯磺丁脲、格列吡脲、醋酸己脲、妥拉磺脲、氯磺丙脲、格列本脲、格列齊特等磺酰脲類藥物；格列丁唑(glybuzole)等磺酰胺類藥物；鹽酸二甲雙胍、鹽酸丁福明等雙胍類藥物；依帕司他等醛糖還原酶抑制劑；伏格列波糖、阿卡波糖等α-葡糖甘酶抑制劑；曲格列酮、吡格列酮等胰島素抗性改善劑；美卡舍明等生長調(diào)節(jié)素C制劑；那格列胺(nateglinide)等其他降血糖藥；貝前列素、前列地爾阿法環(huán)糊精包含物、lipoPGE1、lipoprost阿法環(huán)糊精包合物等前列腺素類似物；馬來酸依那普利等ACE抑制劑；牛車腎氣丸等中藥制劑；血管緊張素II受體拮抗劑；血栓烷合成酶抑制劑；維生素B制劑；鈣拮抗劑；利尿劑等。
附圖的簡單說明

圖1表示化合物A的鉀鹽(以下稱為“化合物1”)對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)的平均血壓和心率所起的作用。
圖2表示ET-1、ET-3、角蝰毒素(sarafotoxin)S6c(以下稱為“S6c”)對(duì)大鼠培養(yǎng)的腎小球膜細(xì)胞的增殖促進(jìn)作用。
圖3表示ET-1、ET-3、S6c對(duì)大鼠培養(yǎng)的腎小球膜細(xì)胞的肥大促進(jìn)作用。
實(shí)施發(fā)明的最佳方式以下根據(jù)實(shí)施例和試驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明作更詳細(xì)的說明，但本發(fā)明并不限于這些實(shí)施例等。以下實(shí)施例和試驗(yàn)例中所用的化合物1指化合物A的鉀鹽。
實(shí)施例1膠囊劑表1

將表1所示的成分混合，填入膠囊制得膠囊劑。
試驗(yàn)例1對(duì)鏈佐星(STZ)誘發(fā)糖尿病的大鼠的血中參數(shù)及尿中參數(shù)的作用(方法)將9周齡的Wistar(Crj)大鼠預(yù)先分成尿中無排泄白蛋白的傾向的5組，4組靜脈注射STZ(50mg/kg)。自注射STZ的次日起的6周內(nèi)，對(duì)照組(STZ-Cont.)僅給予溶劑(0.5％甲基纖維素溶液(以下稱0.5％MC)，化合物1的低劑量組(STZ-低劑量(0.1))給予0.1mg/kg的化合物1，高劑量組(STZ-高劑量(1))給予1mg/kg的化合物1，ACE抑制劑組(STZ-Ena.)給予馬來酸依那普利10mg/kg，均連續(xù)口服，每日1次。另外剩下的1組靜脈注射生理鹽水，作為對(duì)照組(Sham)，連續(xù)口服溶劑(0.5％MC)。于開始給藥2、4、6周后在代謝籠中實(shí)行24小時(shí)采尿，測定尿中參數(shù)。另于2、4周后經(jīng)尾靜脈、6周后于麻醉下經(jīng)腹部大動(dòng)脈實(shí)行采血，測定血中參數(shù)。
測定結(jié)果以平均值±誤差表示。Sham組與CTZ-Cont.組的比較采用不成對(duì)的t檢驗(yàn)，在概率不滿5％時(shí)認(rèn)為差異顯著。而給予STZ的大鼠的各藥物組間的比較于一元方差分析后分別進(jìn)行不成對(duì)的多重比較(Dunnet檢驗(yàn))，在概率不滿5％時(shí)認(rèn)為差異顯著。
(結(jié)果)(1)對(duì)STZ誘發(fā)糖尿病的大鼠的血中參數(shù)的作用1)血糖表2

**；p＜0.01(與Sham組比較)、##；p＜0.01(與STZ-Cont.組比較)如表2所示，觀察到由于給予STZ，自給藥后2周起血中葡萄糖濃度顯著上升。在給藥6周后，見STZ-高劑量(1)組以1mg/kg的極低劑量可使血中葡萄糖濃度與STZ-Ena.組同等下降。
因此提示化合物1對(duì)糖尿病的血糖上升具有改善作用。
2)血中脂質(zhì)表3

**；p＜0.01(與Sham組比較)、#；p＜0.05(與STZ-Cont.組比較)表4

**；p＜0.01(與Sham組比較)、#；p＜0.05(與STZ-Cont.組比較)如表3及表4所示，由于給予STZ，在給藥第4周血中膽固醇濃度及血中甘油三酯濃度顯著上升。STZ-高劑量(1)組以1mg/kg的極低劑量使血中膽固醇濃度及血中甘油三酯濃度與STZ-Ena.組同等下降。
因此，上述模型顯示血中膽固醇濃度或血中甘油三酯濃度上升，存在某些腎功能障礙，可以說是并發(fā)早期腎病后的糖尿病的病癥，因而提示化合物1對(duì)并發(fā)早期腎病后的糖尿病的血中脂質(zhì)上升具有改善作用。
(2)對(duì)STZ誘發(fā)糖尿病的大鼠的尿中參數(shù)的作用1)尿中白蛋白表5

*；p＜0.05(與Sham組比較)、#；p＜0.05(與STZ-Cont.組比較)如表5所示，觀察到由于給予STZ，自給藥第2周起尿中白蛋白排泄量(UAE)有所增加。依賴于化合物1的劑量，給藥開始2、4、6周后的UAE有所減少。另一方面，STZ-Ena.組未見UAE減少。
因此，提示化合物1對(duì)并發(fā)早期腎病后的糖尿病的尿中白蛋白排泄增加具有改善作用。
2)肌酐清除率表6

*；p＜0.05(與Sham組比較)
如表6所示，由于給予STZ，給藥第2周肌酐清除率(Ccr)顯著升高，出現(xiàn)因腎小球過度濾過現(xiàn)象。第4周以后Ccr未見顯著上升。STZ-高劑量(1)組在給藥2周后對(duì)Ccr的上升有抑制的傾向。另一方面，STZ-Ena.組對(duì)Ccr的上升未見有抑制的傾向。
因此，提示化合物1對(duì)于并發(fā)早期腎病后的糖尿病的腎小球過度濾過具有改善作用。
試驗(yàn)例2對(duì)于腎臟切除5/6的慢性腎衰竭(5/6 Nx)大鼠的腎功能的作用(方法)實(shí)驗(yàn)使用8周齡的雄性Wistar大鼠。大鼠在戊巴比妥麻醉下切除左腎的2/3，于1周后將右腎完全摘除。切除5/6腎臟2周后用tail-caff法測定收縮期血壓(SBP)，在代謝籠中采集24小時(shí)尿測定尿蛋白排泄量，分成3組，每組n＝9，使各組沒有差異。其后8周內(nèi)，給5/6Nx-Cont.組口服溶劑(0.5％MC)，給藥量為5ml/kg。5/6Nx-化合物1組給予1mg/kg/d的化合物1，5/6Nx-Ena.組給予馬來酸依那普利10mg/kg/d，各溶于溶劑(0.5％MC)，連續(xù)口服，每日1次。另一方面，以只行開腹手術(shù)的大鼠作為對(duì)照組(Sham)，僅口服溶劑(0.5％MC)。每隔2周采集24小時(shí)尿，測定尿蛋白排泄量。并每隔4周測定SBP，探討對(duì)血壓的影響。
測定結(jié)果以平均值±誤差表示。Sham組與5/6Nx-Cont.組的比較進(jìn)行不成對(duì)的t檢驗(yàn)，將概率不滿5％的情況看作有顯著差異。而5/6Nx大鼠的給藥組間的比較于一元方差分析后分別進(jìn)行不成對(duì)的多重比較(Dunnet檢驗(yàn))，把概率不滿5％的情況看作有顯著差異。
(結(jié)果)(1)對(duì)尿蛋白排泄的作用表7

**；p＜0.01(與Sham組比較)、#；p＜0.05，##；p＜0.01(與STZ-Cont.組比較)如表7所示，與Sham組相比，5/6Nx-Cont.組的尿蛋白排泄量顯著增加。5/6Nx-Ena.組從第2周至第8周尿蛋白排泄量的增加受到顯著抑制?；衔?給藥組在給藥第8周以1mg/kg的極低劑量顯著抑制了尿蛋白排泄量的增加。
因此，提示化合物1對(duì)轉(zhuǎn)為慢性腎衰竭后的糖尿病的尿蛋白排泄增加具有改善作用。
(2)對(duì)血壓上升的作用表8

**；p＜0.01(與Sham組比較)、#；p＜0.05，##；p＜0.01(與5/6Nx-Cont.組比較)如表8所示，與Sham組相比，5/6Nx-Cont.組的SBP顯著升高。確認(rèn)5/6Nx-Ena.組有顯著的降壓作用?；衔?給藥組未見對(duì)SBP的上升有顯著抑制作用。
(3)對(duì)腎功能低下病例給藥后對(duì)死亡率的作用對(duì)各組9例進(jìn)行研究，試驗(yàn)期間5/6Nx-Ena.組見2例死亡例，而化合物1給藥組未見死亡例。
試驗(yàn)例3對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)血壓的影響的探討試驗(yàn)(方法)使用17～19周齡(體重276～350g)的雄性SHR(星野試驗(yàn)動(dòng)物，八潮)。用戊巴比妥(60mg/kgi.p.)麻醉SHR，將聚乙稀插管(PE-50)自左頸總動(dòng)脈插入，并植入使其前端位于大動(dòng)脈弓。插管另一端從背側(cè)頸部向體外導(dǎo)出，切開部位施以外科縫合。經(jīng)過手術(shù)后的恢復(fù)期，分別在每一籠中在無麻醉、無拘束下測定SHR的血壓及心率。插管的另一端經(jīng)活節(jié)(PLYMOUTH MEETING PA，Instech laboratories)連接到壓力換能器(AP-601G，日本光電)，心率以血壓脈波驅(qū)動(dòng)心搏計(jì)(AT-601G，日本光電)進(jìn)行測定。經(jīng)口以胃管口服藥物或溶劑(0.5％MC)，服用5ml/kg。此外，采用收縮期血壓為160mmHg以上的SHR進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。測定結(jié)果以平均值±誤差表示。
(結(jié)果)如圖1所示，給無麻醉、無拘束下的SHR口服30mg/kg或100mg/kg的化合物1后，經(jīng)過24小時(shí)發(fā)現(xiàn)對(duì)血壓及心率沒有影響。
作為糖尿病性腎病的現(xiàn)行療法實(shí)施的降壓療法要擔(dān)心對(duì)全身血流動(dòng)態(tài)的影響引起的血壓降低和腎灌流壓下降，而化合物1引起的全身血壓變化的程度不會(huì)引起這種擔(dān)心，這就說明本發(fā)明能夠在使用ACE抑制劑等有禁忌或應(yīng)慎用的情況給藥。
試驗(yàn)例4對(duì)大鼠腎小球膜細(xì)胞的ET-1引起的細(xì)胞增殖的抑制作用(方法)(1)大鼠腎小球膜細(xì)胞的培養(yǎng)大鼠腎小球細(xì)胞的培養(yǎng)用已知的方法進(jìn)行(Kidney Int.，42，860-866，1992)。即，在麻醉下從7～10周齡的雄性Wistar大鼠摘出腎臟后，在無菌狀態(tài)下以sieving法分離腎小球，然后在95％空氣，5％CO2、37℃的條件下在RPMI-1640中含血清和營養(yǎng)因子等的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，得到均一的腎小球膜細(xì)胞。其后約1周內(nèi)繼代培養(yǎng)1次，實(shí)驗(yàn)采用第4～10代的細(xì)胞。
(2)細(xì)胞增殖、肥大活性測定細(xì)胞增殖活性測定是將大鼠培養(yǎng)的腎小球膜細(xì)胞在48孔測定平板上培養(yǎng)，在鋪滿50％時(shí)，除去培養(yǎng)液中的營養(yǎng)因子(ITS)，以胎牛血清(FCS)從20％降至0.5％的培養(yǎng)液中培養(yǎng)2天，使細(xì)胞同步進(jìn)入靜止期。然后，在0.5％的FCS及ITS存在下添加ET-1、ET-3及S6c，培養(yǎng)69小時(shí)。接著，在培養(yǎng)液中加入AlamarBlue試劑(IWAKI)(50ml/孔)，溫育3小時(shí)，測定570/600nm的吸光度，按標(biāo)準(zhǔn)曲線求得細(xì)胞數(shù)，作為細(xì)胞增殖活性。
肥大活性的測定是將以Alamar Blue試劑測定細(xì)胞增殖活性之后的細(xì)胞以磷酸緩沖液洗滌3次，然后在細(xì)胞內(nèi)加入蛋白質(zhì)直接測定試劑(BioRad)，測定595nm的吸光度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得蛋白質(zhì)含量。再由增殖活性測定得到的細(xì)胞數(shù)求得單位細(xì)胞的蛋白質(zhì)含量作為肥大活性。為探討對(duì)ET-1的增殖促進(jìn)作用的抑制作用，在使ET-1起作用前的30分鐘在培養(yǎng)液中加入化合物1。
(3)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果以平均值±誤差表示。增殖、肥大活性的差異顯著性的檢驗(yàn)是在一元方差分析后以肽濃度值為0作為對(duì)照組分別進(jìn)行不成對(duì)的多重比較(Dunnet檢驗(yàn))，將概率不到5％的情況看作差異顯著。
(結(jié)果)(1)ET對(duì)大鼠培養(yǎng)的腎小球膜細(xì)胞增殖、肥大的作用如圖2及圖3所示，ET-1及ET-3在10-12～10-7M濃度時(shí)均對(duì)大鼠培養(yǎng)的腎小球膜細(xì)胞的增殖及肥大具有濃度依賴性的促進(jìn)作用。兩者在10-8M都可得到幾乎最大的反應(yīng)，但細(xì)胞增殖及肥大促進(jìn)活性是ET-1比ET-3強(qiáng)，可以認(rèn)為ET-1及ET-3的細(xì)胞增殖及肥大促進(jìn)作用未發(fā)現(xiàn)濃度反應(yīng)存在差異，兩者的反應(yīng)平行地發(fā)生。
(2)對(duì)ET-1誘導(dǎo)的大鼠培養(yǎng)的腎小球膜細(xì)胞的增殖作用的效果表9

(n＝5～8)如表9所示，化合物1在濃度為10-11～10-8M時(shí)能以濃度依賴性抑制10-8M的ET-1引起的大鼠培養(yǎng)的腎小球膜細(xì)胞的增殖。
因此，提示化合物1能有效地改善ET誘發(fā)的基質(zhì)變化所伴隨的腎功能障礙，例如糖尿病性腎病、ET誘發(fā)的早期腎病、作為糖尿病并發(fā)癥的最終臨床表現(xiàn)的腎小球硬化病變伴發(fā)的慢性腎衰竭等引起的腎功能有障礙。
產(chǎn)業(yè)上利用的可能性本發(fā)明能提供用于改善糖尿病患者的特定癥狀的醫(yī)藥組合物。即能提供改善糖尿病患者的血糖上升的醫(yī)藥組合物；改善糖尿病患者并發(fā)早期腎病后的血中脂質(zhì)上升的醫(yī)藥組合物；改善糖尿病患者并發(fā)早期腎病后的腎功能障礙的醫(yī)藥組合物；改善糖尿病患者轉(zhuǎn)為慢性腎衰竭后的腎功能障礙的醫(yī)藥組合物；改善糖尿病性腎病患者的腎功能障礙的醫(yī)藥組合物；改善ET誘發(fā)的早期腎病患者的腎功能障礙的醫(yī)藥組合物；改善慢性腎衰竭患者的腎功能障礙的醫(yī)藥組合物。
特別是上述腎功能障礙的改善通過抑制糖尿病并發(fā)早期腎病后、糖尿病性腎病及/或ET誘發(fā)的早期腎病所伴的尿中白蛋白排泄及/或腎小球過度濾過、或者抑制轉(zhuǎn)為慢性腎衰竭后的糖尿病及/或慢性腎衰竭所伴的尿蛋白排泄而實(shí)現(xiàn)。
此外，作為糖尿病性腎病的現(xiàn)行療法實(shí)施的降壓療法對(duì)全身血流動(dòng)態(tài)具有影響，要擔(dān)心血壓降低和腎灌流壓下降，而本發(fā)明能提供全身血壓變化程度不必有上述擔(dān)心的上述醫(yī)藥組合物及/或口服吸收性優(yōu)良的上述醫(yī)藥組合物。
權(quán)利要求
1.醫(yī)藥組合物，其特征在于，以N-[6-甲氧基-5-(2-甲氧基苯氧基)-2-(嘧啶-2-基)嘧啶-4-基]-2-苯基乙烯磺酰胺或其藥學(xué)上許可的鹽為有效成分，改善糖尿病患者的選自以下(1)～(7)的1個(gè)以上的特定癥狀(1)血糖上升，(2)并發(fā)早期腎病后的血中脂質(zhì)上升，(3)并發(fā)早期腎病后的腎功能障礙，(4)并發(fā)早期腎病后尿中白蛋白排泄的增加，(5)并發(fā)早期腎病后腎小球過度濾過，(6)轉(zhuǎn)為慢性腎衰竭后的腎功能障礙，(7)轉(zhuǎn)為慢性腎衰竭后的尿蛋白排泄增加。
2.如權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其特征還在于，為改善糖尿病患者的血糖上升的醫(yī)藥組合物。
3.如權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其特征還在于，為改善并發(fā)早期腎病后的糖尿病患者的血中脂質(zhì)上升的醫(yī)藥組合物。
4.如權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其特征還在于，為改善并發(fā)早期腎病后的糖尿病患者的腎功能障礙的醫(yī)藥組合物。
5.如權(quán)利要求4所述的醫(yī)藥組合物，其特征還在于，為改善并發(fā)早期腎病后的糖尿病患者的尿中白蛋白排泄增加的醫(yī)藥組合物。
6.如權(quán)利要求4所述的醫(yī)藥組合物，其特征還在于，為改善并發(fā)早期腎病后的糖尿病患者的腎小球過度濾過的醫(yī)藥組合物。
7.如權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其特征還在于，為改善轉(zhuǎn)為慢性腎衰竭后的糖尿病患者的腎功能障礙的醫(yī)藥組合物。
8.如權(quán)利要求7所述的醫(yī)藥組合物，其特征還在于，為改善轉(zhuǎn)為慢性腎衰竭后的糖尿病患者的尿蛋白排泄增加的醫(yī)藥組合物。
9.醫(yī)藥組合物，其特征在于，以N-[6-甲氧基-5-(2-甲氧基苯氧基)-2-(嘧啶-2-基)嘧啶-4-基]-2-苯基乙烯磺酰胺或其藥學(xué)上許可的鹽為有效成分，改善糖尿病性腎病患者的腎功能障礙。
10.如權(quán)利要求9所述的醫(yī)藥組合物，其特征還在于，為改善糖尿病性腎病患者的尿中白蛋白排泄增加的醫(yī)藥組合物。
11.如權(quán)利要求9所述的醫(yī)藥組合物，其特征還在于，為改善糖尿病性腎病患者的腎小球過度濾過的醫(yī)藥組合物。
12.醫(yī)藥組合物，其特征在于，以N-[6-甲氧基-5-(2-甲氧基苯氧基)-2-(嘧啶-2-基)嘧啶-4-基]-2-苯基乙烯磺酰胺或其藥學(xué)上許可的鹽為有效成分，改善ET誘發(fā)的早期腎病患者的腎功能障礙。
13.如權(quán)利要求12所述的醫(yī)藥組合物，其特征還在于，為改善ET誘發(fā)的早期腎病患者的尿中白蛋白排泄增加的醫(yī)藥組合物。
14.如權(quán)利要求12所述的醫(yī)藥組合物，其特征還在于，為改善ET誘發(fā)的早期腎病患者的腎小球過度濾過的醫(yī)藥組合物。
15.醫(yī)藥組合物，其特征在于，以N-[6-甲氧基-5-(2-甲氧基苯氧基)-2-(嘧啶-2-基)嘧啶-4-基]-2-苯基乙烯磺酰胺或其藥學(xué)上許可的鹽為有效成分，改善慢性腎衰竭患者的腎功能障礙。
16.如權(quán)利要求15所述的醫(yī)藥組合物，其特征還在于，為改善慢性腎衰竭患者的尿蛋白排泄增加的醫(yī)藥組合物。
17.如權(quán)利要求1～16中任一項(xiàng)所述的醫(yī)藥組合物，其特征還在于，不使全身血壓發(fā)生變化。
18.如權(quán)利要求1～17中任一項(xiàng)所述的醫(yī)藥組合物，其特征還在于，為口服制劑。
全文摘要
N－[6－甲氧基－5－(2－甲氧基苯氧基)－2－(嘧啶－2－基)嘧啶－4－基]－2－苯基乙烯磺酰胺或其藥學(xué)上許可的鹽的新用途。能夠改善糖尿病患者的以下特定癥狀(1)血糖上升，(2)并發(fā)早期腎病后的血中脂質(zhì)上升，(3)并發(fā)早期腎病后的腎功能障礙，(4)并發(fā)早期腎病后尿中白蛋白的排泄增加，(5)并發(fā)早期腎病后腎小球過度濾過，(6)轉(zhuǎn)為慢性腎衰竭后的腎功能障礙，(7)轉(zhuǎn)為慢性腎衰竭后的尿蛋白排泄增加。
文檔編號(hào)A61P43/00GK1499971SQ0280764
公開日2004年5月26日 申請(qǐng)日期2002年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2001年4月3日
發(fā)明者藤森明, 湯山弘法, 田原敦生, 園田理惠, 柴崎久美子, 惠, 法, 生, 美子 申請(qǐng)人:山之內(nèi)制藥株式會(huì)社