專利名稱：一種刺五加提取物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種刺五加提取物的制備方法。
背景技術(shù)：
刺五加為五加科植物Acanthopanax senticosus (Rupr. et Maxim. ) Harms.的根、 根莖和莖，莖葉、果實(shí)均可作藥用。又名五加參、刺拐棒，主要分布在我國(guó)東北、華北地區(qū)，以及朝鮮、日本及俄羅斯等地，在祖國(guó)醫(yī)學(xué)中作為藥物廣泛應(yīng)用已有悠久的歷史。具有益氣健脾、補(bǔ)腎安神的功效，用于脾腎陽(yáng)虛，體虛乏力，食欲不振，腰膝酸痛，失眠多夢(mèng)。刺五加根和根莖的主要成分之一總苷為酹苷和黃酮苷類化合物，它是其生物活性成分之一，而且紫丁香苷和刺五加苷E占總苷含量最高?？傑赵诟透o中的含量分別占干藥材重量的O. 6% O. 9%和O. 6% I. 5%。從文獻(xiàn)資料上知刺五加苷能改善衰老大鼠免疫功能，延緩免疫衰老；刺五加總皂苷具有改善家兔血液流變性、抑制血栓形成作用，而此作用是通過(guò)解聚紅細(xì)胞聚集性、降低全血黏度完成的；刺五加總皂苷對(duì)犬急性心肌缺血有較好的保護(hù)作用，此外還有抗疲勞、抗腫瘤及抗炎等作用。在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)著作中記載刺五加具有抗炎作用，國(guó)內(nèi)也有學(xué)者研究了刺五加水提物的抗炎作用，指出刺五加水提物可能通過(guò)抑制活化巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的炎癥介質(zhì)發(fā)揮其抗炎功效。目前，市場(chǎng)上可買(mǎi)到的刺五加相關(guān)產(chǎn)品有刺五加浸膏、五加參茶、刺五加片、五加參沖劑、刺五加注射液等，這些產(chǎn)品都是刺五加原藥的粗提物處理所得，成分復(fù)雜，其有效成分含量和質(zhì)量控制都很模糊，因而難以進(jìn)行深入的研究。因此，對(duì)剌五加的抗炎有效部位進(jìn)行深入研究，進(jìn)而開(kāi)發(fā)出新的安全有效的藥物，具有廣闊的前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種刺五加提取物的制備方法。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種刺五加提取物的制備方法，包括如下步驟(I)以刺五加根為原料，放入過(guò)量的乙醇中浸泡至少12h，然后進(jìn)行加熱，回流提取I 3h ;重復(fù)上述操作至少2次，合并提取液，得到刺五加醇提物；(2)取大孔樹(shù)脂，濕法裝柱，將上述刺五加醇提物上樣，使其吸附達(dá)到飽和，水洗至 Molishi反應(yīng)呈陰性，然后進(jìn)行乙醇梯度洗脫，收集各段洗脫液；即可得到刺五加提取物。優(yōu)選的技術(shù)方案，所述步驟(I)中的乙醇為體積濃度50 70%的乙醇。上述技術(shù)方案中，所述步驟(2)中，依次以3倍柱體積10%、20%、30%、40%、 50^^60^^70^^80%乙醇梯度洗脫，收集各段洗脫液；即可得到刺五加提取物。優(yōu)選的技術(shù)方案，所述刺五加提取物為50%洗脫部位100 μ g/mL和70%洗脫部位 30 μ g/mLο優(yōu)選的技術(shù)方案，所述步驟(2)中的大孔樹(shù)脂為HPD 100大孔樹(shù)脂。
本發(fā)明同時(shí)請(qǐng)求保護(hù)上述刺五加提取物在制備抗炎藥物中的應(yīng)用。過(guò)量的一氧化氮(NO)的釋放是炎癥的特征之一，有關(guān)研究認(rèn)為急慢性炎癥的發(fā)生均與NO有關(guān)系。本發(fā)明是圍繞抗炎新藥研究標(biāo)準(zhǔn)，以開(kāi)發(fā)刺五加新藥為目的對(duì)刺五加中總苷進(jìn)行工藝純化以及對(duì)所得有效部位和有效成分進(jìn)行抗炎作用研究。本發(fā)明采用大孔吸附樹(shù)脂純化刺五加總苷類有效成分，在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究刺五加有效部位及有效成分，以LPS和IFN-Y誘導(dǎo)的單核巨噬細(xì)胞RAW264. 7作為細(xì)胞炎癥模型，通過(guò)一氧化氮釋放抑制活性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)刺五加醇提物上大孔吸附樹(shù)脂后10%到 80%不同濃度乙醇洗脫部位均表現(xiàn)出很強(qiáng)的活性，并且呈劑量依賴性。從中篩選出了兩個(gè)最好的活性部位當(dāng)測(cè)試樣品濃度在100 μ g/mL時(shí)，50%乙醇洗脫部位表現(xiàn)出最強(qiáng)的NO釋放抑制活性，抑制率大于95% ;當(dāng)濃度在30μ g/mL時(shí)，70 %乙醇洗脫部位表現(xiàn)出最強(qiáng)的NO 釋放抑制活性，抑制率大于85%，均高于陽(yáng)性對(duì)照，并且兩部分無(wú)細(xì)胞毒性。由于上述技術(shù)方案運(yùn)用，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有下列優(yōu)點(diǎn)I.本發(fā)明開(kāi)發(fā)了一種刺五加提取物的制備方法，先用乙醇提取得到醇提物，再用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行純化，獲得了刺五加提取物，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)測(cè)試樣品濃度在100 μ g/mL 時(shí)，50%乙醇洗脫部位表現(xiàn)出最強(qiáng)的NO釋放抑制活性，抑制率大于95% ;當(dāng)濃度在30 μ g/ mL時(shí)，70%乙醇洗脫部位表現(xiàn)出最強(qiáng)的NO釋放抑制活性，抑制率大于85%，均高于陽(yáng)性對(duì)照，并且兩部分無(wú)細(xì)胞毒性。2.本發(fā)明采用大孔吸附樹(shù)脂純化刺五加總苷類有效成分，具有快速、便捷的優(yōu)點(diǎn)。3.本發(fā)明的制備方法簡(jiǎn)單，易于實(shí)現(xiàn)，且成本較低，適于推廣應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述實(shí)施例一一種刺五加提取物的制備方法，包括如下步驟(I)刺五加的提取稱取刺五加根lOOOg，放入IOL的圓底燒瓶中用8000mL60%乙醇浸泡過(guò)夜，用電熱套加熱使微沸，回流提取2h ;重復(fù)三次，合并提取液，濃縮至浸膏；(2)大孔樹(shù)脂對(duì)刺五加醇提物的純化取已處理的HPD 100大孔樹(shù)脂，濕法裝柱，將刺五加醇提物以lBV/h的上樣速度上樣，上樣體積為18BV，使其吸附達(dá)到飽和，水洗至Molishi反應(yīng)呈陰性，依次以3倍柱體積10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %乙醇梯度洗脫，收集各段洗脫液，每柱體積經(jīng)適當(dāng)稀釋后，HPLC法測(cè)定其中紫丁香苷和刺五加苷E的量，并濃縮蒸干，稱重；結(jié)果見(jiàn)下表
權(quán)利要求
1.一種刺五加提取物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟(1)以刺五加根為原料，放入過(guò)量的乙醇中浸泡至少12h，然后進(jìn)行加熱，回流提取I 3h ;重復(fù)上述操作至少2次，合并提取液，得到刺五加醇提物；(2)取大孔樹(shù)脂，濕法裝柱，將上述刺五加醇提物上樣，使其吸附達(dá)到飽和，水洗至 Molishi反應(yīng)呈陰性，然后進(jìn)行乙醇梯度洗脫，收集各段洗脫液；即可得到刺五加提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種刺五加提取物的制備方法，其特征在于所述步驟(I) 中的乙醇為體積濃度50 70%的乙醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種刺五加提取物的制備方法，其特征在于所述步驟(2) 中，依次以3倍柱體積10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %乙醇梯度洗脫，收集各段洗脫液；即可得到刺五加提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種刺五加提取物的制備方法，其特征在于所述刺五加提取物為50%洗脫部位100 μ g/mL和70%洗脫部位30 μ g/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種刺五加提取物的制備方法，其特征在于所述步驟(2) 中的大孔樹(shù)脂為HPD 100大孔樹(shù)脂。
6.權(quán)利要求I所述的一種刺五加提取物在制備抗炎藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種刺五加提取物的制備方法，包括如下步驟(1)以刺五加根為原料，放入過(guò)量的乙醇中浸泡至少12h，然后進(jìn)行加熱，回流提取1～3h；重復(fù)上述操作至少2次，合并提取液，得到刺五加醇提物；(2)取大孔樹(shù)脂，濕法裝柱，將上述刺五加醇提物上樣，使其吸附達(dá)到飽和，水洗至Molishi反應(yīng)呈陰性，然后進(jìn)行乙醇梯度洗脫，收集各段洗脫液；即可得到刺五加提取物。本發(fā)明開(kāi)發(fā)了一種刺五加提取物的制備方法，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)測(cè)試樣品濃度在100μg/mL時(shí)，50％乙醇洗脫部位表現(xiàn)出最強(qiáng)的NO釋放抑制活性，抑制率大于95％；當(dāng)濃度在30μg/mL時(shí)，70％乙醇洗脫部位表現(xiàn)出最強(qiáng)的NO釋放抑制活性，抑制率大于85％，均高于陽(yáng)性對(duì)照，并且兩部分無(wú)細(xì)胞毒性。
文檔編號(hào)A61P29/00GK102600221SQ20121011707
公開(kāi)日2012年7月25日 申請(qǐng)日期2012年4月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月20日
發(fā)明者李賀然, 樊潔 申請(qǐng)人:蘇州大學(xué)