專利名稱：納米粒子藥物組合物的制備方法和納米粒子藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及納米粒子藥物領(lǐng)域，具體地，涉及一種納米粒子藥物組合物的制備方法和由該方法制備的納米粒子藥物組合物。
背景技術(shù)：
納米載藥體系是指藥物與納米載體形成的粒徑介于1-1OOOnm的藥物輸送系統(tǒng)，包括納米球、納米囊、納米粒子和納米脂質(zhì)體等。納米載藥體系與其它藥物載體相比，具有顯著優(yōu)勢(shì):(1)超微小體積，可通過人體最小的毛細(xì)血管，不易被吞噬細(xì)胞迅速清除，延長(zhǎng)了在循環(huán)系統(tǒng)中的存留時(shí)間；⑵到達(dá)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)分布集中的肝、脾、肺、骨髓、淋巴等靶部位；(3)能穿透組織間隙并被細(xì)胞吸收，有利于透皮吸收和細(xì)胞內(nèi)藥效發(fā)揮；(4)藥物可包埋或鍵合在納米粒子內(nèi)部，也可吸附或偶合在其表面；(5)利用納米材料本身的生物可降解性，PH或溫度敏感性等，達(dá)到藥物控制釋放的效果；(6)提高藥物的生物利用度和降低毒副作用等。納米粒子是納米載藥體系中常用的一種選擇，通常用作為藥物載體的聚合物負(fù)載藥物，來得到納米粒子藥物組合物。但是，目前公開的納米粒子藥物組合物的制備方法得到的納米粒子藥物組合物多為只負(fù)載一種藥物化合物的納米粒子藥物組合物。如對(duì)于親水性小分子藥物化合物，通過親水性乳化的方式將藥物化合物負(fù)載在聚合物上，具體方法為:將兩親性聚合物溶解于有機(jī)溶劑中，并與親水性小分子藥物化合物的水溶液混合后在超聲波條件下進(jìn)行第一次乳化，第一次乳化后的物料加入表面活性劑進(jìn)行第二次乳化，將第二次得到的乳液分散于表面活性劑水溶液中并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，離心分離后得到負(fù)載親水性小分子藥物化合物的納米粒子組合物。如對(duì)于疏水性藥物化合物,通過疏水性乳化的方式將藥物化合物負(fù)載在兩親性聚合物上，具體方法為:將溶解有藥物和兩親性聚合物的有機(jī)溶液緩慢滴入含有表面活性劑水溶液中，攪拌一定時(shí)間后超聲波乳化得到乳液，將得到的乳液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，離心分離后得到負(fù)載疏水性藥物化合物的納米粒子組合物。當(dāng)負(fù)載多種藥物化合物時(shí)，如果分別通過親水性乳化的方式或疏水性乳化的方式將多種藥物化合物負(fù)載在聚 合物上，得到的納米粒子藥物組合物中，各藥物化合物之間的含量比例難以控制，限制了納米粒子藥物組合物的使用效果的提高。因此，現(xiàn)有的納米粒子藥物組合物存在各藥物化合物之間的含量比例難以控制的缺陷。

發(fā)明內(nèi)容
為了克服現(xiàn)有的納米粒子藥物組合物存在各藥物化合物之間的含量比例難以控制的缺陷，本發(fā)明提供了一種制備能夠按需求控制各藥物化合物之間的含量比例的納米粒子藥物組合物的制備方法以及該方法制備的納米粒子藥物組合物。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，不同的藥物化合物由于親水性和/或疏水性不同，在分別通過親水性乳化的方式或疏水性乳化的方式將多種藥物化合物負(fù)載在兩親性聚合物上時(shí)，得到的納米粒子藥物組合物中，各藥物化合物之間的含量比例只能為較窄范圍，而無法根據(jù)用藥需求進(jìn)行調(diào)整；但是，如果通過具有兩次乳化步驟的復(fù)乳法將親水性和/或疏水性不同的藥物化合物負(fù)載到所述兩親性聚合物上，就能夠很容易地根據(jù)用藥需求進(jìn)行調(diào)整得到的納米粒子藥物組合物中各藥物化合物之間的含量比例，并且由于陽離子聚合物的摻入，能夠?qū)崿F(xiàn)核酸藥物的負(fù)載，由此得到本發(fā)明。本發(fā) 明提供了一種納米粒子藥物組合物的制備方法，所述納米粒子藥物組合物含有兩親性聚合物、陽離子聚合物、疏水性藥物、親水性小分子藥物和核酸藥物，該方法包括以下步驟:(1)在超聲波輻射條件下，使第一溶液與親水性小分子藥物的水溶液混合并乳化，得到第一乳液；所述第一溶液含有所述兩親性聚合物和第一有機(jī)溶劑；所述第一有機(jī)溶劑為能夠溶解所述兩親性聚合物，但不溶于水，且在乳化條件下不與所述兩親性聚合物、所述疏水性藥物、所述親水性小分子藥物和所述核酸藥物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的有機(jī)溶劑；(2)將所述第一乳液與第一表面活性劑水溶液混合，并將所得混合后的物料與第二溶液和陽離子聚合物的水溶液混合并乳化，得到第二乳液；所述第二溶液含有所述疏水性藥物和第二有機(jī)溶劑；所述第二有機(jī)溶劑為能夠溶解所述疏水性藥物，但不溶于水，且在乳化條件下不與所述兩親性聚合物、所述疏水性藥物、所述親水性小分子藥物和所述核酸藥物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的有機(jī)溶劑；(3)將所述第二乳液與第二表面活性劑水溶液混合，并除去所述第一有機(jī)溶劑和所述第二有機(jī)溶劑，而后離心并分離得到沉淀物。(4)將所述沉淀物用水溶液溶解后與核酸藥物混合，分離得到納米粒子藥物組合物。本發(fā)明提供的方法，可以能夠很容易地根據(jù)用藥需求進(jìn)行調(diào)整使得本發(fā)明提供的納米粒子組合物中，親水性和/或疏水性不同的藥物化合物之間以及與核酸藥物的含量比例。通過上述調(diào)整，可以高效地利用納米載藥體系在給藥方式上的特有優(yōu)勢(shì)，達(dá)到最佳的藥物配伍使用效果，尤其是能夠使得在受藥靶位點(diǎn)的局部區(qū)域中，例如腫瘤發(fā)生位點(diǎn)中，親水性小分子藥物、疏水性藥物和核酸藥物化合物達(dá)到最佳的藥物配伍使用效果。本發(fā)明還提供了一種納米粒子藥物組合物，該納米粒子藥物組合物由上述方法制備得到，其中，所述疏水性藥物為紫杉醇，所述親水性小分子藥物為阿霉素，所述核酸藥物為SiRNA，所述兩親性聚合物為聚乙二醇單甲醚-聚乳酸-乙醇酸共聚物，所述陽離子聚合物為ε -多聚賴氨酸，所述納米粒子藥物組合物中，所述疏水性藥物和所述親水性小分子藥物的重量比為1: 10000-10000: I。實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明提供的上述納米粒子藥物組合物，與將只負(fù)載紫杉醇的納米粒子藥物組合物和只負(fù)載阿霉素的納米粒子藥物組合物按紫杉醇與阿霉素的重量比為I: 0.9-1.1混合后得到的藥物組合物相比，對(duì)于黑色素瘤、肺癌和肝癌等腫瘤具有更好的治療效果。本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的具體實(shí)施方式
部分予以詳細(xì)說明。


圖1為在透射電鏡下觀察實(shí)施例1得到的納米粒子藥物組合物的圖像。圖2為激光粒度儀測(cè)得實(shí)施例1得到的納米粒子藥物組合物的粒徑圖。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式
進(jìn)行詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的具體實(shí)施方式
僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。本發(fā)明提供了一種納米粒子藥物組合物的制備方法，所述納米粒子藥物組合物含有兩親性聚合物、陽離子聚合物、疏水性藥物、親水性小分子藥物和核酸藥物，該方法包括以下步驟:(I)在超聲波輻射條件下，使第一溶液與親水性小分子藥物的水溶液混合并乳化，得到第一乳液；所述第一溶液含有所述兩親性聚合物和第一有機(jī)溶劑；所述第一有機(jī)溶劑為能夠溶解所述兩親性聚合物，但不溶于水，且在乳化條件下不與所述兩親性聚合物、所述疏水性藥物、所述親水性小分子藥物和所述核酸藥物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的有機(jī)溶劑；(2)將所述第一乳液與第一表面活性劑水溶液混合，并將所得混合后的物料與第二溶液和陽離子聚合物的水溶液混合并乳化，得到第二乳液；所述第二溶液含有所述疏水性藥物和第二有機(jī)溶劑；所述第二有機(jī)溶劑為能夠溶解所述疏水性藥物，但不溶于水，且在乳化條件下不與所述兩親性聚合物、所述疏水性藥物、所述親水性小分子藥物和所述核酸藥物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的有機(jī)溶劑；(3)將所述第二乳液與第二表面活性劑水溶液混合，并除去所述第一有機(jī)溶劑和所述第二有機(jī)溶劑，而后離心并分離得到沉淀物。 (4)將所述沉淀物用水溶液溶解后與核酸藥物混合，分離得到納米粒子藥物組合物。其中，步驟(I)中，所述第一溶液與所述親水性小分子藥物的水溶液的體積比沒有特別的要求，為了進(jìn)一步提高所述納米粒子藥物組合物的使用效果，優(yōu)選情況下，所述第一溶液與所述親水性小分子藥物的水溶液的體積比為1: 1-1: 10;進(jìn)一步優(yōu)選為1:2-1: 6，最優(yōu)選為1: 4。根據(jù)本發(fā)明，所述第一溶液中，相對(duì)于每毫升的第一有機(jī)溶劑，所述兩親性聚合物的含量沒有特別的要求，為了進(jìn)一步提高所述納米粒子藥物組合物的使用效果，優(yōu)選情況下，所述第一溶液中，相對(duì)于每毫升的第一有機(jī)溶劑，所述兩親性聚合物的含量為5-100毫克；進(jìn)一步優(yōu)選為20-40毫克。根據(jù)本發(fā)明，所述親水性小分子藥物的水溶液中，相對(duì)于每毫升的水，所述親水性小分子藥物的含量沒有特別的要求，為了進(jìn)一步提高所述納米粒子藥物組合物的使用效果，優(yōu)選情況下，所述親水性小分子藥物的水溶液中，相對(duì)于每毫升的水，所述親水性小分子藥物的含量為1-100毫克；進(jìn)一步優(yōu)選為10-50毫克。根據(jù)本發(fā)明，步驟(I)中，所述兩親性聚合物的選擇沒有特別的要求，可以為納米粒子藥物組合物制備領(lǐng)域常規(guī)的選擇，例如，所述兩親性聚合物為同時(shí)含有親水性基團(tuán)和疏水性基團(tuán)的聚合物；所述親水性基團(tuán)可以為聚乙二醇基團(tuán)、聚氧乙烯基團(tuán)和聚異丁烯酸基團(tuán)等中的一種或多種，所述疏水性基團(tuán)可以為聚氧乙烯基團(tuán)、聚乳酸-乙醇酸基團(tuán)、聚苯乙烯基團(tuán)和聚己內(nèi)酯基團(tuán)中等的一種或多種。需要說明的是，所述兩親性聚合物的重復(fù)單元的排列方式?jīng)]有特別地要求，只要是能用于形成納米粒子藥物組合物即可，例如可以為交替、嵌段、無規(guī)或接枝中的一種或多種，也可以由含有親水性基團(tuán)和疏水性基團(tuán)的單體均聚得到；所述兩親性聚合物的分子量沒有特別的要求，只要是能用于形成納米粒子藥物組合物即可，例如所述兩親性聚合物按照SHT 1759-2007規(guī)定的方法測(cè)得的重均分子量可以為 104-105。根據(jù)本發(fā)明，為了使所述納米粒子藥物組合物還能具有更加特異的靶向性能和/或成像性能，優(yōu)選情況下，步驟(1)中，所述兩親性聚合物還含有靶向基團(tuán)和/或成像基團(tuán)。其中，所述靶向基團(tuán)和/或成像基團(tuán)的選擇沒有特別的要求，可以為納米粒子藥物組合物制備領(lǐng)域常規(guī)的選擇，為了進(jìn)一步提高所述納米粒子藥物組合物的使用效果，進(jìn)一步優(yōu)選情況下，所述靶向基團(tuán)為葉酸基團(tuán)、精-甘-天冬氨酸基序環(huán)肽(RGD)基團(tuán)和轉(zhuǎn)鐵蛋白基團(tuán)等中的一種或多種；所述成像基團(tuán)為量子點(diǎn)基團(tuán)和/或熒光染料基團(tuán)。例如，所述量子點(diǎn)基團(tuán)可以為金量子點(diǎn)基團(tuán)、鎘量子點(diǎn)基團(tuán)和鈀量子點(diǎn)基團(tuán)等納米材料中的一種或多種；所述熒光染料基團(tuán)可以為異硫氰酸熒光素基團(tuán)、四溴熒光素二鈉基團(tuán)和酸性紅87基團(tuán)中的一種或多種。其中，所述靶向基團(tuán)和/或成像基團(tuán)的含量沒有特別地要求，可以為納米粒子藥物組合物制備領(lǐng)域常規(guī)的選擇，例如，相對(duì)于每摩爾的親水性基團(tuán)，所述靶向基團(tuán)和/或成像基團(tuán)的含量可以為0.2-1摩爾。根據(jù)本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式，步驟(I)中，所述兩親性聚合物為聚乙二醇單甲醚-聚乳酸-乙醇酸、聚環(huán)氧乙烷-聚環(huán)氧丙烷、聚乙二醇和聚L-乳酸中的一種或多種。其中，所述聚乙二醇單甲醚-聚乳酸-乙醇酸的親水基團(tuán)為聚乙二醇單甲醚基團(tuán)，疏水基團(tuán)為聚乳酸-乙醇酸基團(tuán)，所述聚乙二醇單甲醚-聚乳酸-乙醇酸共聚物的重復(fù)單元的排列方式為嵌段，其中，乙二醇單元和乳酸-乙醇酸單元之間的摩爾比可以為1:1-1: 8，所述聚乙二醇單甲醚-聚乳酸-乙醇酸共聚物按照SHT 1759-2007規(guī)定的方法測(cè)得的重均分子量可以為104-105。符合上述要求的聚乙二醇單甲醚-聚乳酸-乙醇酸共聚物可以通過商購獲得。根據(jù)本發(fā)明，所述親水性小分子藥物的選擇沒有特殊的要求，可以根據(jù)所期望的藥效和藥物在水中的溶解度進(jìn)行選擇，所述親水性小分子藥物的分子量可以為IOOODa以下，例如，可以選擇在水中的溶解度大于lg/100g的藥物作為親水性小分子藥物，優(yōu)選情況下，所述親水性小分子藥物為阿霉素、米托蒽醌、柔紅霉素和表柔比星中的一種或多種。根據(jù)本發(fā)明，所述第一有機(jī)溶劑的選擇沒有特別的要求，可以為納米粒子藥物組合物制備領(lǐng)域常規(guī)的選擇，為了進(jìn)一步提高所述納米粒子藥物組合物的使用效果并降低成本，優(yōu)選情況下，所述第一有機(jī)溶劑為二氯甲烷、二甲基亞砜、四氫呋喃、丙酮、甲基丁酮、二氯苯和甲基異丙酮中的一種或多種。根據(jù)本發(fā)明，步驟(1)中，所述乳化的條件沒有特別的要求，可以為納米粒子藥物組合物制備領(lǐng)域常規(guī)的選擇，為了進(jìn)一步提高所述納米粒子藥物組合物的使用效果，優(yōu)選情況下，步驟(1)中，所述乳化的條件包括:超聲波輻射的頻率為20-25kHz，進(jìn)一步優(yōu)選為22-23kHz ;相對(duì)于每毫升接受超聲波輻射的物料，功率為19-190W，進(jìn)一步優(yōu)選為28.5-57W ;乳化的溫度為1_99°C，進(jìn)一步優(yōu)選為20_30°C ;乳化的時(shí)間為1_30分鐘，進(jìn)一步優(yōu)選為3-10分鐘。其中，步驟⑴中，所述混合的方式?jīng)]有特別的要求，可以為納米粒子藥物組合物制備領(lǐng)域常規(guī)的選擇，為了進(jìn)一步提高所述納米粒子藥物組合物的使用效果，優(yōu)選情況下，步驟(I)中，所述混合的方式包括:將所述親水性小分子藥物的水溶液加入到第一溶液中混合。根據(jù)本發(fā)明，步驟(2)中，所述第一表面活性劑水溶液的用量、所述第二溶液和陽離子聚合物的水溶液的用量沒有特別的要求，為了進(jìn)一步提高所述納米粒子藥物組合物的使用效果，優(yōu)選情況下，步驟⑵中，相對(duì)于I體積的第一乳液，所述第一表面活性劑水溶液的用量為0.5-2體積，進(jìn)一步優(yōu)選為0.8-1體積；所述第二溶液的用量為0.1-1體積，進(jìn)一步優(yōu)選為0.4-0.6體積；所述陽離子聚合物的水溶液的用量為0.1-1體積，進(jìn)一步優(yōu)選為0.4—0.6 體積。其中，步驟(2)中，所述第一表面活性劑水溶液中，相對(duì)于每毫升的水，所述第一表面活性劑的含量沒有特別的要求，可以為納米粒子藥物組合物制備領(lǐng)域常規(guī)的選擇，為了進(jìn)一步提高所述納米粒子藥物組合物的使用效果，優(yōu)選情況下，步驟(2)中，所述第一表面活性劑水溶液中，所述第一表面活性劑的含量為0.6-6重量％，進(jìn)一步優(yōu)選為2-4重量％。其中，步驟(2)中，所述第二溶液中，相對(duì)于每毫升的第二有機(jī)溶劑，所述疏水性藥物的含量沒有特別的要求，為了進(jìn)一步提高所述納米粒子藥物組合物的使用效果，優(yōu)選情況下，步驟(2)中，所述第二溶液中，相對(duì)于每毫升的第二有機(jī)溶劑，所述疏水性藥物的含量可為0.1毫克至所述疏水性藥物在所述第二有機(jī)溶劑中達(dá)到飽和濃度的含量，進(jìn)一步優(yōu)選為1-10毫克。

其中，步驟(2)中，所述陽離子聚合物的水溶液中，所述陽離子聚合物的含量沒有特別的要求，為了進(jìn)一步提高所述納米粒子藥物組合物的使用效果，優(yōu)選情況下，步驟(2)中，所述第四溶液中，所述陽離子聚合物的含量可為I毫克至所述陽離子聚合物在所水溶液中達(dá)到飽和濃度的含量，進(jìn)一步優(yōu)選為20-40毫克。根據(jù)本發(fā)明，步驟(2)中，所述第一表面活性劑的作用是提高第二乳液的穩(wěn)定性，從而可以提高納米粒子藥物組合物的穩(wěn)定性，其選擇沒有特別的要求，可以為納米粒子藥物組合物制備領(lǐng)域常規(guī)的選擇，為了進(jìn)一步提高所述納米粒子藥物組合物的使用效果，優(yōu)選情況下，步驟(2)中，所述第一表面活性劑為聚乙烯醇、土溫80、司盤和十二烷基磺酸鈉中的一種或多種。其中，所述聚乙烯醇的選擇沒有特別的要求，可以為納米粒子藥物組合物制備領(lǐng)域常規(guī)的選擇，例如，所述聚乙烯醇可以為醫(yī)藥級(jí)聚乙烯醇；所述聚乙烯醇的皂化度可以為70-95mol% ;所述聚乙烯醇在25°C下的粘度可以為500_900mPa.S。符合上述要求的聚乙烯醇可以通過商購獲得，例如可以購買自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司的牌號(hào)為PVA-124的
女口
廣叩ο其中，所述疏水性藥物的選擇沒有特殊的要求，可以根據(jù)所期望的藥效和藥物在水中的溶解度進(jìn)行選擇，例如，可以選擇在水中的溶解度小于Ig/IOOg的藥物作為疏水性藥物，優(yōu)選情況下，所述疏水性藥物為紫杉醇、喜樹堿、三尖杉酯堿和長(zhǎng)春瑞賓中的一種或多種。
其中，所述陽離子聚合物的選擇沒有特殊的要求，可以根據(jù)所期望的納米粒子表面電勢(shì)進(jìn)行選擇，例如，可以選擇在水中的為正電勢(shì)的陽離子聚合物，優(yōu)選情況下，所述陽離子聚合物為多聚賴氨酸、殼聚糖和聚醚酰亞胺-胺型樹枝狀高分子中的一種或多種。所述多聚賴氨酸優(yōu)選為ε-多聚賴氨酸。其中，步驟(2)中，所述乳化的條件沒有特殊的要求，可以根據(jù)所期望的藥效和藥物在水中的溶解度進(jìn)行選擇，為了進(jìn)一步提高所述納米粒子藥物組合物的使用效果，優(yōu)選情況下，步驟(2)中，所述乳化的條件包括:超聲波輻射的頻率為20-25kHz，進(jìn)一步優(yōu)選為22-23kHz ;相對(duì)于每毫升接受超聲波輻射的物料，功率為19-190W，進(jìn)一步優(yōu)選為28.5-57W ;乳化的溫度為1_99°C，進(jìn)一步優(yōu)選為20_30°C ;乳化的時(shí)間為1_30分鐘，進(jìn)一步優(yōu)選為3-10分鐘。其中，步驟(2)中，將所述第一乳液與所述第一表面活·性劑水溶液混合的過程中，所述混合的方式?jīng)]有特別的要求，可以為納米粒子藥物組合物制備領(lǐng)域常規(guī)的選擇，為了進(jìn)一步提高所述納米粒子藥物組合物的使用效果，優(yōu)選情況下，步驟(2)中，將所述第一乳液與所述第一表面活性劑水溶液混合的過程中，所述混合的方式包括:在100-1200轉(zhuǎn)/min的攪拌條件下，將所述第一乳液加入到所述第一表面活性劑水溶液中混合，且所述第一乳液加入的速度為0.l-3ml/min。其中，步驟(2)中，將如上混合所得混合后的物料與所述第二溶液和所述陽離子聚合物的水溶液混合并乳化的過程中，所述混合的方式?jīng)]有特別的要求，可以為納米粒子藥物組合物制備領(lǐng)域常規(guī)的選擇，為了進(jìn)一步提高所述納米粒子藥物組合物的使用效果，優(yōu)選情況下，步驟(2)中，將所得混合后的物料與所述第二溶液和所述陽離子聚合物的水溶液混合并乳化的過程中，所述混合的方式包括:在1000-1200轉(zhuǎn)/min的攪拌條件下，將所述第二溶液和所述陽離子聚合物的水溶液加入到如上混合所得混合后的物料中，且所述第二溶液加入的速度為0.1-lml/min。根據(jù)本發(fā)明，步驟(3)中，相對(duì)于I體積的所述第二乳液，所述第二表面活性劑水溶液的用量沒有特別的要求，可以為納米粒子藥物組合物制備領(lǐng)域常規(guī)的選擇，為了進(jìn)一步提高所述納米粒子藥物組合物的使用效果，優(yōu)選情況下，步驟(3)中，相對(duì)于I體積的所述第二乳液，所述第二表面活性劑水溶液的用量為2-20體積，進(jìn)一步優(yōu)選為10-15體積。其中，步驟(3)中，所述第二表面活性劑水溶液中，相對(duì)于每毫升的水，所述第二表面活性劑的含量沒有特別的要求，可以為納米粒子藥物組合物制備領(lǐng)域常規(guī)的選擇，為了進(jìn)一步提高所述納米粒子藥物組合物的使用效果，優(yōu)選情況下，步驟(3)中，所述第二表面活性劑水溶液中，所述第二表面活性劑的含量為0.3-3重量％，進(jìn)一步優(yōu)選為0.6-1重量％。其中，步驟(3)·中，所述第二表面活性劑的作用是提高所述沉淀物的穩(wěn)定性，從而可以提高納米粒子藥物組合物的穩(wěn)定性，其選擇沒有特別的要求，可以為納米粒子藥物組合物制備領(lǐng)域常規(guī)的選擇，為了進(jìn)一步提高所述納米粒子藥物組合物的使用效果，優(yōu)選情況下，步驟(3)中，所述第二表面活性劑為聚乙烯醇、土溫80、司盤和十二烷基磺酸鈉中的一種或多種。其中，所述聚乙烯醇的選擇沒有特別的要求，可以為納米粒子藥物組合物制備領(lǐng)域常規(guī)的選擇，例如，所述聚乙烯醇可以為醫(yī)藥級(jí)聚乙烯醇；所述聚乙烯醇的皂化度可以為70-95mol% ;所述聚乙烯醇在25°C下的粘度可以為500_900mPa.S。符合上述要求的聚乙烯醇可以通過商購獲得，例如可以購買自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司的牌號(hào)為PVA-124的產(chǎn)品。其中，在步驟(3)中，將所述第二乳液與第二表面活性劑水溶液混合的過程中，所述混合的方式?jīng)]有特別的要求，可以為納米粒子藥物組合物制備領(lǐng)域常規(guī)的選擇，為了進(jìn)一步提高所述納米粒子藥物組合物的使用效果，優(yōu)選情況下，在步驟(3)中，將所述第二乳液與第二表面活性劑水溶液混合的過程中，所述混合的方式包括:在100-1200轉(zhuǎn)/min的攪拌條件下，將所述第二乳液加入到所述第二表面活性劑水溶液中，且所述第二乳液加入的速度為0.l-3ml/min ;加入所述第二乳液后,可在100-1200轉(zhuǎn)/min的攪拌條件下維持5-100mino其中，在步驟(3)中，除去所述第一有機(jī)溶劑和第二有機(jī)溶劑的過程中，所述除去所述第一有機(jī)溶劑和第二有機(jī)溶劑的方法沒有特別的要求，例如，可以通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的方式除去所述第一有機(jī)溶劑和第二有機(jī)溶劑。其中，在步驟(3)中，離心并分離得到沉淀物的過程中離心的速度可以為5000_15000g。根據(jù)本發(fā)明，其中，步驟(4)中，相對(duì)于I重量份的所述沉淀物，水的用量可以為1-1000重量份，優(yōu)選為10-100重量份。其中，步驟(4)中，相對(duì)于I重量份的所述沉淀物，所述核酸藥物的用量可以為
0.001-1重量份，優(yōu)選為0.1-0.2重量份。其中，所述核酸藥物包括各種以核酸為有效成分的藥物，例如DNA藥物和RNA藥物，優(yōu)選為siRNA藥物。其中，在步驟(4)中，將所述沉淀物用水溶液溶解的過程和隨后與核酸藥物混合的過程中，溶解的方式和混合的方式?jīng)]有特別的要求，為了進(jìn)一步提高所述納米粒子藥物組合物的使用效果，優(yōu)選情況下，在步驟(4)中，將將所述沉淀物用水溶液溶解后與核酸藥物混合的方式包括:在100-1200轉(zhuǎn)/min的攪拌條件下，將所述沉淀物和所述核酸藥物加入到水中，然后，可在100-1200轉(zhuǎn)/min的攪拌條件下維持5_100min。其中，步驟(4)中，分離得到所述納米粒子藥物組合物的過程中，所述分離的方法沒有特別的要求，例如，可以通過離心并收集沉淀的方法(所得到的沉淀為所述納米粒子藥物組合物)進(jìn)行分離，離心的速度可以為5000-15000g。本發(fā)明還提供了一種納米粒子藥物組合物，該納米粒子藥物組合物由上述方法制備得到，其中，所述疏水性藥物為紫杉醇，所述親水性小分子藥物為阿霉素，所述核酸藥物為siRNA，所述兩親性聚合物為聚乙二醇單甲醚-聚乳酸-乙醇酸共聚物，所述陽離子聚合物為ε -多聚賴氨酸，所述納米粒子藥物組合物中，所述疏水性藥物和所述親水性小分子藥物的重量比為1: 10000-10000: I。其中，優(yōu)選情況下，所述疏水性藥物和所述親水性小分子藥物的重量比為I: 1000-1000: I。其中，所述核酸藥物可以按所需比例與納米粒子混合相對(duì)于I重量份的所述沉淀物，所述核酸藥物的用量可以為0.001-1重量份,優(yōu)選為0.01-0.2重量份。實(shí)驗(yàn)證明，所述納米粒子藥物組合物用于小鼠時(shí)，以阿霉素的量計(jì)算，經(jīng)靜脈給藥的有效量為0.l-10mg/kg體重。本發(fā)明中，氣體和液體的體積均為20°C下，一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓下的數(shù)值。以下，通過實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明，但本發(fā)明的范圍并不限于以下實(shí)施例中。實(shí)施例1本實(shí)施例按照以下步驟制備納米粒子藥物組合物。(I)將20mg的兩親性聚合物(聚乙二醇單甲醚-聚乳酸-乙醇酸，PLGA-PEG，購自濟(jì)南岱罡生物科技有限公司，該聚乙二醇單甲醚-聚乳酸-乙醇酸共聚物的親水基團(tuán)為聚乙二醇單甲醚基團(tuán)，疏水基團(tuán)為聚乳酸-乙醇酸基團(tuán)，所述聚乙二醇單甲醚-聚乳酸-乙醇酸共聚物的重復(fù)單元的排列方式為嵌段，其中，乙二醇單元和乳酸-乙醇酸單元之間的摩爾比為1: 1-1: 8，按照SHT 1759-2007規(guī)定的方法測(cè)得的重均分子量為IO4-L 5X IO5)`溶于Iml第一有機(jī)溶劑(二氯甲烷)中，得到第一溶液。將0.6mg的親水性小分子藥物(阿霉素，購自北京華豐科技有限公司，牌號(hào)為HF090516)溶于Iml水中，得到親水性小分子藥物的水溶液。將250 μ I的親水性小分子藥物的水溶液加入Iml的第一溶液中，得到混合后的物料。在25°C下，將Iml的上述得到的混合后的物料用功率為28.5W且頻率為23kHz的超聲波輻射3分鐘后，得到第一乳液。(2)將第一表面活性劑(聚乙烯醇，購自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，牌號(hào)為PVA-124，皂化度為85mol% ;在25°C下的粘度為700mPa.s)配制為濃度2重量％的水溶液，得到第一表面活性劑水溶液。在1000轉(zhuǎn)/min的攪拌條件下，將Iml步驟⑴得到的第一乳液以lml/min的速度加入到Iml第一表面活性劑水溶液中，得到混合后的物料。將
0.125mg疏水性藥物(紫杉醇，購自北京諾瑞醫(yī)藥技術(shù)有限公司，牌號(hào)為090328)溶于Iml第二有機(jī)溶劑(二氯甲烷)中，得到第二溶液。將20mg的陽離子聚合物多聚賴氨酸，購自浙江銀象生物工程有限公司)溶解在0.1ml水溶液中，得到陽離子聚合物的水溶液。在1000轉(zhuǎn)/min的攪拌條件下，將0.25ml的上述得到的第二溶液和0.1ml的上述得到的陽離子聚合物的水溶液分別以lml/min的速度加入上述得到的混合后的物料中，得到用于超聲的物料。在25°C下，將Iml上述得到的用于超聲的物料用功率為57W且頻率為23kHz的超聲波輻射5分鐘后，得到第二乳液。(3)將第二表面活性劑(聚乙烯醇，購自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，牌號(hào)為PVA-124，皂化度為85mol% ;在25°C下的粘度為700mPa.s)配制為濃度0.6%的水溶液，得到第二表面活性劑水溶液。在800轉(zhuǎn)/min的攪拌條件下，將Iml步驟⑵得到的第二乳液以2ml/min的速度加入到IOml的上述第二表面活性劑水溶液中，然后在600-800轉(zhuǎn)/min的攪拌條件下維持lOmin。在室溫。C下，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去第一有機(jī)溶劑(二氯甲烷)和第二有機(jī)溶劑(二氯甲烷)，得到旋蒸后的產(chǎn)物。將旋蒸后的產(chǎn)物在13000g的離心速度下離心10分鐘后，收集得到沉淀物。(4)將得到的沉淀物(IOmg左右)用2ml的水溶解后，加入0.05mg的核酸藥物(siRNA，正義鏈序列為 5’ -GAAUUAACCCUUGGUGAAUTT-3’ (SEQ ID NO:1)，反義鏈序列為5’-AUUCACCAAGGGUUAAUUCTT-3’ (SEQ ID NO: 2)，購自英濰捷基(上海)貿(mào)易有限公司，該siRNA能夠沉默抗凋亡蛋白survivin基因的表達(dá)，從而抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng))，振蕩混勻后室溫放置30分鐘，13000g的離心速度下離心10分鐘后，收集沉淀，得到納米粒子藥物組合物。按照文獻(xiàn)(AshlynnL.Z.Lee，等.生物材料(Biomaterials) 2009，30，919-927)中所述的方法，在透射電鏡下觀察本實(shí)施例得到的納米粒子藥物組合物，結(jié)果如圖1所示，說明得到的納米粒子藥物組合物的粒徑大小約為200nm。按照文獻(xiàn)(AshlynnL.Z.Lee,等.生物材料(Biomaterials) 2009, 30,919-927)中所述的方法，利用激光粒度儀測(cè)得本實(shí)施例得到的納米粒子藥物組合物的平均粒徑為200.63±12.36nm(圖2)，分散度為0.131，zeta電位為29.6±0.14，表明該納米粒子藥物組合物的穩(wěn)定性較好。按照文獻(xiàn)(AshlynnL.Z.Lee,等.生物材料(Biomaterials) 2009, 30,919-927)中所述的方法，將本實(shí)施例得到的納米粒子藥物組合物冷凍干燥后用乙腈溶解，利用高效液相色譜檢測(cè)(標(biāo)準(zhǔn)品購自Agilent Technologies,牌號(hào)Agilent 1200 series),可以看出本實(shí)施例得到的納米粒子藥物組合物同時(shí)具有阿霉素和紫杉醇的特征峰。并通過紫外分光光度計(jì)方法測(cè)得本實(shí)施例得到的納米粒子藥物組合物中含有siRNA，說明阿霉素和紫杉醇在本實(shí)施例得到的納米粒子藥物組合物中同時(shí)存在，且每克的本實(shí)施例得到的納米粒子藥物組合物中阿霉素的含量為0.15mg，紫杉醇的含量為0.075mg, siRNA的含量為0.045mg。對(duì)比例I本對(duì)比例按照實(shí)施例1的方法制備納米粒子藥物組合物，所不同的是:將20mg的兩親性聚合物(聚乙二醇單甲醚-聚乳酸-乙醇酸共聚物，PLGA-PEG，購自濟(jì)南岱罡生物科技有限公司)溶于Iml水中，得到的溶液作為第一溶液，即用水替換第一有機(jī)溶劑(二氯甲燒)。按照與實(shí)施例1相同的測(cè)量方法，利用激光粒度儀測(cè)得本對(duì)比例得到的納米粒子藥物組合物的粒徑為3 00nm ;測(cè)得每克的本對(duì)比例得到的納米粒子藥物組合物中阿霉素的含量為0.05g，紫杉醇的含量為0g，siRNA的含量為0g。對(duì)比例2按照以下步驟制備納米粒子藥物組合物。(I)將20mg的兩親性聚合物聚乙二醇單甲醚-聚乳酸-乙醇酸共聚物，PLGA-PEG，購自濟(jì)南岱罡生物科技有限公司)溶于Iml第一有機(jī)溶劑(二氯甲烷)中，得到第一溶液。將0.6mg的親水性小分子藥物(阿霉素，購自北京華豐科技有限公司，牌號(hào)為HF090516)溶于Iml水中，得到的溶液作為親水性小分子藥物的水溶液。將第一表面活性劑(聚乙烯醇，購自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，牌號(hào)為PVA-124)配制為濃度2重量％的水溶液，得到第一表面活性劑水溶液。將0.125mg疏水性藥物(紫杉醇，購自北京諾瑞醫(yī)藥技術(shù)有限公司，牌號(hào)為090328)溶于Iml第二有機(jī)溶劑(二氯甲烷)中，得到第二溶液。在1000轉(zhuǎn)/min的攪拌條件下，將上述得到的第一溶液、上述得到的第二溶液、上述得到的親水性小分子藥物的水溶液、上述得到的第一表面活性劑水溶液混合，得到用于超聲的物料。在25°C下，將Iml上述得到的用于超聲的物料先用28.5W的頻率為23kHz的超聲波輻射3分鐘后，再用57W的頻率為23kHz的超聲波輻射3分鐘，得到第二乳液。(2)將第二表面活性劑(聚乙烯醇，購自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，牌號(hào)為PVA-124)配制為濃度0.6重量％的水溶液，得到第二表面活性劑水溶液。在1000轉(zhuǎn)/min的攪拌條件下，將Iml步驟(I)得到的第二乳液以lml/min的速度加入到IOml的上述第二表面活性劑水溶液中,然后在600-800轉(zhuǎn)/min的攪拌條件下維持lOmin。在室溫下,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)lOmin，除去第一有機(jī)溶劑(二氯甲烷)和第二有機(jī)溶劑(二氯甲烷)，得到旋蒸后的產(chǎn)物。將旋蒸后的產(chǎn)物在13000g的離心速度下離心10分鐘后，收集得到沉淀物。(4)將得到的沉淀物(IOmg左右)用2ml的水溶解后，加入0.05mg的核酸藥物(siRNA,與實(shí)施例1中相同)，振蕩混勻后室溫放置30分鐘，13000g的離心速度下離心10分鐘后，收集沉淀，得到納米粒子藥物組合物。按照與實(shí)施例1相同的測(cè)量方法，利用激光粒度儀測(cè)得本對(duì)比例得到的納米粒子藥物組合物的粒徑為300nm ;測(cè)得每克的本對(duì)比例得到的納米粒子藥物組合物中阿霉素的含量為Og，紫杉醇的含量為0.02g，siRNA的含量為Og。實(shí)施例2本實(shí)施例按照實(shí)施例1的方法制備納米粒子藥物組合物，所不同的是，所述親水性小分子藥物的水溶液中阿霉素的濃度為0.4mg/ml，所述第二溶液中紫杉醇的濃度為10mg/ml,所述核酸藥物的用量為0.05mg。按照與實(shí)施例1相同的測(cè)量方法，利用激光粒度儀測(cè)得本實(shí)施例得到的納米粒子藥物組合物的粒徑約為200nm ;測(cè)得每克的本實(shí)施例得到的納米粒子藥物組合物中阿霉素的含量為0.0005g，紫杉醇的含量為0.5g，siRNA的含量為0.000045g。對(duì)比例3本對(duì)比例按照對(duì)比例2的方法制備納米粒子藥物組合物，所不同的是，所述親水性小分子藥物的水溶液中阿霉素的濃度為0.4mg/ml，所述第二溶液中紫杉醇的濃度為10mg/ml,所 述核酸藥物的用量為0.05mg。按照與實(shí)施例1相同的測(cè)量方法，利用激光粒度儀測(cè)得本對(duì)比例得到的納米粒子藥物組合物的粒徑為300nm ;測(cè)得每克的本對(duì)比例得到的納米粒子藥物組合物中阿霉素的含量為Og，紫杉醇的含量為0.lg, siRNA的含量為Og。實(shí)施例3本實(shí)施例按照實(shí)施例1的方法制備納米粒子藥物組合物，所不同的是，所述親水性小分子藥物的水溶液中阿霉素的濃度為IO m g /m I，所述第二溶液中紫杉醇的濃度為
0.4mg/ml,所述核酸藥物的用量為0.05mg。按照與實(shí)施例1相同的測(cè)量方法，利用激光粒度儀測(cè)得本實(shí)施例得到的納米粒子藥物組合物的粒徑為260nm ;測(cè)得每克的本實(shí)施例得到的納米粒子藥物組合物中阿霉素的含量為0.47g，紫杉醇的含量為0.00047g, siRNA的含量為0.000045g。對(duì)比例4本對(duì)比例按照對(duì)比例2的方法制備納米粒子藥物組合物，所不同的是，所述親水性小分子藥物的水溶液中阿霉素的濃度為IO m g /m I，所述第二溶液中紫杉醇的濃度為
0.4mg/ml,所述核酸藥物的用量為0.05mg。按照與實(shí)施例1相同的測(cè)量方法，利用激光粒度儀測(cè)得本對(duì)比例得到的納米粒子藥物組合物的粒徑為300nm ;測(cè)得每克的本對(duì)比例得到的納米粒子藥物組合物中阿霉素的含量為Og，紫杉醇的含量為0.lg, siRNA的含量為Og。對(duì)比例5本對(duì)比例按照與對(duì)比例2相同的方法制備納米粒子藥物組合物，所不同的是，不使用第二溶液，并且親水性小分子藥物的水溶液中阿霉素的使用量為3.5mg，核酸藥物(siRNA，與實(shí)施例1中相同)的使用量為0.1mg0按照與實(shí)施例1相同的測(cè)量方法，利用激光粒度儀測(cè)得本對(duì)比例得到的納米粒子藥物組合物的粒徑為300nm ;測(cè)得每克的本對(duì)比例得到的納米粒子藥物組合物中阿霉素的含量為0.3g，紫杉醇的含量為0g，siRNA的含量為0.09mg。對(duì)比例6本對(duì)比例按照與對(duì)比例2相同的方法制備納米粒子藥物組合物，所不同的是，不使用親水性小分子藥物的水溶液，并且第二溶液中紫杉醇的使用量為2mg。按照與實(shí)施例1相同的測(cè)量方法，利用激光粒度儀測(cè)得本對(duì)比例得到的納米粒子藥物組合物的粒徑為300nm ;測(cè)得每克的本對(duì)比例得到的納米粒子藥物組合物中阿霉素的含量為0g，紫杉醇的含量為0.15g。測(cè)試實(shí)施例1本測(cè)試實(shí)施例中，將實(shí)施例1制得載有多種藥物的納米粒子組合物作為實(shí)驗(yàn)藥物；將對(duì)比例5得到的納米粒子藥物組合物和對(duì)比例6得到的納米粒子藥物等量混合，得到阿霉素的含量為15重量％，紫杉醇的含量為7.5重量％的納米粒子藥物組合物混合物。將該納米粒子藥物組合物混合物作為對(duì)照藥物。將黑色素瘤細(xì)胞(B16細(xì)胞系，購自ATCC，編號(hào)B16-F10)以每35mm內(nèi)徑的培養(yǎng)皿IO3個(gè)的密度分別接種于含有2ml的DMEM培養(yǎng)基(購自Gibco，牌號(hào)sh30022.01B,且含10體積％的胎牛血清)的兩個(gè)培養(yǎng)皿中，在37°C和5體積％的CO2濃度下培養(yǎng)24小時(shí)后，吸出培養(yǎng)基，將2ml溶有實(shí)驗(yàn)藥物的培 養(yǎng)基(以阿霉素計(jì)，藥物濃度為0.17ymol/ml)加入其中一只培養(yǎng)皿中，將2ml溶有對(duì)照藥物的培養(yǎng)基(以阿霉素計(jì)，藥物濃度為0.17ymol/ml)加入另一只培養(yǎng)皿中，將上述2只培養(yǎng)皿在37°C和5%的CO2濃度下孵育24小時(shí)后，按照文獻(xiàn)(Qinghua Miao,等，生物材料(Biomaterials), 2010, 31 (28):7364-75)中所述的CCK-8法檢測(cè)不同時(shí)間段細(xì)胞凋亡水平?？梢园l(fā)現(xiàn)，使用實(shí)驗(yàn)藥物的培養(yǎng)皿中，細(xì)胞活性為 90.2±1.2(4h)，31.88±2% (8h)，16.3±3.2% (12h)，6.1±0.05% (24h);使用對(duì)照藥物的培養(yǎng)皿中，細(xì)胞活性為 96.2 ±2.1 % (4h)，53.63±1.3% (8h)，42.5±3.4% (12h)，34.43±1.5(24h)。上述結(jié)果說明實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)黑色素瘤細(xì)胞具有更強(qiáng)的促凋亡效果。使用黑色素瘤細(xì)胞(B16細(xì)胞系，購自ATCC，編號(hào)B16-F10)和C57小鼠(C57系，購自北京維通利華公司)，按照文獻(xiàn)(Fariyal Ahmed,等.分子藥物學(xué)(MolecularPharmaceutics), 3, 340-350)中的方法制備荷瘤裸鼠，待腫瘤長(zhǎng)至0.5cm2大小時(shí)，將荷瘤裸鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組荷瘤裸鼠和對(duì)照組荷瘤裸鼠，按照文獻(xiàn)(同上)中的方法，經(jīng)尾靜脈，將溶有實(shí)驗(yàn)藥物的磷酸鹽緩沖液(以阿霉素計(jì)，給藥量為3mg/kg體重)給藥至實(shí)驗(yàn)組荷瘤裸鼠；將溶有對(duì)照藥物的磷酸鹽緩沖液(以阿霉素計(jì)，給藥量為3mg/kg體重)給藥至對(duì)照組荷瘤裸鼠。一周后，按照文獻(xiàn)(Fariyal Ahmed,等.分子藥物學(xué)(MolecularPharmaceutics)，3，340-350)中的方法測(cè)定腫瘤的大小，其中，實(shí)驗(yàn)組荷瘤裸鼠的腫瘤大小平均為452mm3，對(duì)照組荷瘤裸鼠的腫瘤大小平均為8462mm3。上述結(jié)果說明說明實(shí)驗(yàn)藥物對(duì)黑色素瘤具有更強(qiáng)的抑制效果。以上結(jié)合附圖詳細(xì)描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，但是，本發(fā)明并不限于上述實(shí)施方式中的具體細(xì)節(jié)，在本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思范圍內(nèi)，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行多種簡(jiǎn)單變型，這些簡(jiǎn)單變型均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍?！?br> 權(quán)利要求
1.一種納米粒子藥物組合物的制備方法，所述納米粒子藥物組合物含有兩親性聚合物、陽離子聚合物、疏水性藥物、親水性小分子藥物和核酸藥物，該方法包括以下步驟: (1)在超聲波輻射條件下，使第一溶液與親水性小分子藥物的水溶液混合并乳化，得到第一乳液； 所述第一溶液含有所述兩親性聚合物和第一有機(jī)溶劑；所述第一有機(jī)溶劑為能夠溶解所述兩親性聚合物，但不溶于水的有機(jī)溶劑； (2)將所述第一乳液與第一表面活性劑水溶液混合，并將所得混合后的物料與第二溶液和陽離子聚合物的水溶液混合并乳化，得到第二乳液； 所述第二溶液含有所述疏水性藥物和第二有機(jī)溶劑；所述第二有機(jī)溶劑為能夠溶解所述疏水性藥物，但不溶于水的有機(jī)溶劑； (3)將所述第二乳液與第二表面活性劑水溶液混合，并除去所述第一有機(jī)溶劑和所述第二有機(jī)溶劑，而后離心并分離得到沉淀物； (4)將所述沉淀物用水溶液溶解后與核酸藥物混合，離心分離得到納米粒子藥物組合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟(I)中，所述第一溶液與所述親水性小分子藥物的水溶液的體積比為1: 1-1: 10 ;所述第一溶液中，相對(duì)于每毫升的第一有機(jī)溶劑，所述兩親性聚合物的含量為5-100毫克；所述親水性小分子藥物的水溶液中，相對(duì)于每毫升的水，所述未水性小分子藥物的含量為1-100暈克。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，步驟(I)中，所述兩親性聚合物為聚乙二醇單甲醚-聚乳酸-乙醇酸、聚 環(huán)氧乙烷-聚環(huán)氧丙烷和聚乙二醇與聚L-乳酸中的一種或多種；所述親水性小分子藥物為阿霉素、米托蒽醌、柔紅霉素和表柔比星中的一種或多種；所述第一有機(jī)溶劑為二氯甲烷、二甲基亞砜、四氫呋喃、丙酮、甲基丁酮、二氯苯和甲基異丙酮中的一種或多種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟(I)中，所述乳化的條件包括:超聲波輻射的頻率為20-25kHz，相對(duì)于每毫升接受超聲波輻射的物料，功率為10-190W ;乳化的溫度為1-99°C，乳化的時(shí)間為1-30分鐘。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟(2)中，相對(duì)于I體積的第一乳液，所述第一表面活性劑水溶液的用量為0.5-2體積，所述第二溶液的用量為0.1-1體積，所述陽離子聚合物的水溶液的用量為0.1-1體積；所述第一表面活性劑水溶液中，所述第一表面活性劑的含量為0.6-6重量％ ;所述第二溶液中，相對(duì)于每毫升的第二有機(jī)溶劑，所述疏水性藥物的含量為0.1毫克至所述疏水性藥物在所述第二有機(jī)溶劑中達(dá)到飽和濃度的含量；所述陽離子聚合物的水溶液中，相對(duì)于每毫升的水，所述陽離子聚合物的含量為I毫克至所述陽離子聚合物在所水溶液中達(dá)到飽和濃度的含量。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的方法，其中，步驟(2)中，所述第一表面活性劑為聚乙烯醇、土溫80、司盤和十二烷基磺酸鈉中的一種或多種；所述疏水性藥物為紫杉醇、喜樹堿、三尖杉酯堿和長(zhǎng)春瑞賓中的一種或多種；所述陽離子聚合物為多聚賴氨酸、殼聚糖、聚醚酰亞胺和聚酰胺-胺型樹枝狀高分子中一種或多種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的方法，其中，步驟(2)中，所述乳化的條件包括:超聲波輻射的頻率為20-25kHz，相對(duì)于每毫升接受超聲波輻射的物料，功率為10-190W ;乳化的溫度為1_99°C，乳化的時(shí)間為1-30分鐘。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟(3)中，相對(duì)于I體積的所述第二乳液，所述第二表面活性劑水溶液的用量為2-20體積；所述第二表面活性劑水溶液中，所述第二表面活性劑的含量為0.3-3重量％ ； 所述第二表面活性劑為聚乙烯醇、土溫80、司盤和十二烷基磺酸鈉中的一種或多種。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，步驟(4)中，相對(duì)于I重量份的所述沉淀物，水的用量為1-1000重量份，所述核酸藥物的用量為0.001-1重量份。
10.一種納米粒子藥物組合物，該納米粒子藥物組合物由權(quán)利要求1-9中任意一項(xiàng)所述的方法制備得到，其中，所述疏水性藥物為紫杉醇，所述親水性小分子藥物為阿霉素，所述核酸藥物為SiRNA,所述兩親性聚合物為聚乙二醇單甲醚-聚乳酸-乙醇酸共聚物，所述陽離子聚合物為ε -多聚賴氨酸，所述納米粒子藥物組合物中，所述疏水性藥物和所述親水性小分子藥物的重量比為1 : 10000-10000: I。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種納米粒子藥物組合物的制備方法，該方法包括(1)使第一溶液與親水性小分子藥物的水溶液混合乳化得到第一乳液；所述第一溶液含有所述兩親性聚合物和第一有機(jī)溶劑；(2)將所述第一乳液與第一表面活性劑水溶液混合，并將所得混合后的物料與第二溶液和陽離子聚合物的水溶液混合并乳化，得到第二乳液；所述第二溶液含有所述疏水性藥物和第二有機(jī)溶劑；(3)將所述第二乳液與第二表面活性劑水溶液混合，離心分離得到沉淀物；(4)將所述沉淀物用水溶解后與核酸藥物混合，分離得到納米粒子組合物。本發(fā)明還提供了由上述方法制備得到的納米粒子藥物組合物。
文檔編號(hào)A61K31/337GK103142482SQ201110402420
公開日2013年6月12日 申請(qǐng)日期2011年12月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月6日
發(fā)明者聶廣軍, 王海, 吳雁 申請(qǐng)人:國(guó)家納米科學(xué)中心