專利名稱：可載藥殼聚糖微球的制備的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及可載藥殼聚糖微球的制備
背景技術(shù)：
甲殼素是地球上儲量僅次于纖維素的天然的可再生資源，殼聚糖是其N-乙酰基脫去55%以上而得到的一種堿性多糖。由于殼聚糖具有良好的生物相容性、生物可降解性、 抗菌性、防腐性以及止血和促進傷口愈合等諸多特性，因此殼聚糖在傷口敷料、藥物控釋系統(tǒng)和組織工程等方面有著良好的應(yīng)用前景。殼聚糖微球由高分子材料形成的外殼和水或油狀內(nèi)核構(gòu)成，而藥物通常就被聚合物膜包封在此內(nèi)核層。理想的微球載體可生物降解并且無毒，所具有的特異靶向性使藥物被定向釋放出來，載體則被生物降解，避免轉(zhuǎn)運過程中藥物在其它組織釋放而產(chǎn)生副作用或過早被滅活。由于殼聚糖具有可被體內(nèi)多種酶生物降解，降解產(chǎn)物無毒且能被生物體完全吸收等優(yōu)良特性，是藥物緩釋的理想載體，因此其作為藥物載體材料的研究受到了極大的重視。制備殼聚糖微球的方法主要有乳化交聯(lián)法、離子凝膠化法、分子自組裝法等。有文獻報道以殼聚糖為載體，戊二醛為交聯(lián)劑，以Span-80為乳化劑，環(huán)己烷為油相，通過乳化交聯(lián)法制備出分散性及圓整度良好的5-氟尿嘧啶殼聚糖微球。還有文獻采取離子交聯(lián)法利用殼聚糖的游離氨基與多聚磷酸鈉陰離子發(fā)生分子間或分子內(nèi)交聯(lián)反應(yīng)，制備平均直徑為100納米左右的殼聚糖球狀凝膠。乳化交聯(lián)法制備的納米粒子粒徑較小、球形度好，用作藥物載體藥物釋放周期較長，但此方法常用戊二醛作交聯(lián)劑，戊二醛具有抗基因毒性，而且蛋白質(zhì)或多肽也與戊二醛反應(yīng)，因此這種制備方法對于蛋白類和肽類藥物方面的應(yīng)用很受限制。離子交聯(lián)法的機理主要是殼聚糖與帶負電荷的聚陰離子電解質(zhì)通過聚電解質(zhì)大分子的分子內(nèi)和分子間的靜電相互作用而交聯(lián)形成納米粒子，這種反應(yīng)條件溫和，易于得到均一粒徑的納米粒且粒徑的范圍可調(diào)整，但由于較弱的離子鍵作用，使得形成的粒子骨架密度低，用作藥物載體的藥物主要分布在粒子的表面，藥物突釋效應(yīng)嚴(yán)重。分子自組裝是指在一定條件下，通過非化學(xué)鍵的相互作用，分子間自發(fā)組合，形成一類具有明確、穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的且有某種特定性能的分子聚集體。分子自組裝法在制備過程中不需要添加乳化劑、表面活性劑等有機溶劑，可減少載體的毒性；此外該方法工藝簡單、成本低，是環(huán)境友好型的綠色方法，具有很好的產(chǎn)品開發(fā)前景。

發(fā)明內(nèi)容
針對離子交聯(lián)法和乳化交聯(lián)法的限制，本發(fā)明的目的在于用自組裝法制備可載藥殼聚糖微球本發(fā)明的原理及方法本發(fā)明以殼聚糖為基體，向殼聚糖鏈引入疏水性基團，加上殼聚糖鏈本身具有親水基團，采用自組裝法制備殼聚糖微球。
制備本發(fā)明所述的殼聚糖微球的方法包括如下步驟(1)稱取一定量的10-溴癸酸甲酯，羥甲香豆素和碳酸鉀，將其溶于丙酮中，40 70°C下攪拌反應(yīng)5 IOh。(2)將步驟(1)中所得產(chǎn)物與5% NaOH反應(yīng)，再用HCl酸化，反復(fù)用水洗。(3)稱取一定量的上述產(chǎn)物，溶于乙醇中，加入EDC和NHS活化羧基0. 池后， 慢慢滴加至溶于2%乙酸的殼聚糖水溶液中，CS EDC NHS = I 1. 2 1.2 1 2 2， 室溫下避光反應(yīng)。(4)用lmol/L的NaOH溶液調(diào)反應(yīng)體系的pH值為7 9，于丙酮中沉淀出產(chǎn)品。(5)取20 30mg的產(chǎn)品溶于50mLpH為6 9的PBS緩沖液中，將所得溶液用探針式超聲均化儀均化，然后通過過濾膜過濾掉沉淀物質(zhì)，將所得樣品進行凍干，反復(fù)透析一凍干純化后，得到較為純凈的殼聚糖微球。本發(fā)明的優(yōu)點1.本發(fā)明提供的制備方法中，不需要加任何交聯(lián)劑，避免了交聯(lián)劑潛在的細胞毒性。2.本發(fā)明提供的制備方法工藝簡單，成本較低。


圖1為可載藥殼聚糖微球的掃描電鏡圖
具體實施例方式實施例1稱取1.5g的10-溴癸酸甲酯，Ig羥甲香豆素，和0.8g碳酸鉀于25mL丙酮中，40°C 下攪拌反應(yīng)證。抽濾，旋蒸出產(chǎn)品，再將產(chǎn)品與5% NaOH反應(yīng)，用HCl酸化至體系pH值為
3.5，反復(fù)用水洗。稱取上述產(chǎn)物0. 33g，溶于乙醇中，加入0. 18gEDC和0. llgNHS，磁力攪拌 0.證，活化羧基。稱取殼聚糖0. 13g溶于2%的乙酸溶液，將活化好的溶液滴到殼聚糖溶液中。室溫下避光反應(yīng)Mh。用lmol/L的NaOH溶液調(diào)反應(yīng)體系的pH值為7，于丙酮中沉淀出產(chǎn)品。取20mg的產(chǎn)品溶于50mLpH為6的PBS緩沖液中，將所得溶液用探針式超聲均化儀均化，然后通過過濾膜過濾掉沉淀物質(zhì)，將所得樣品進行凍干，反復(fù)透析一凍干純化后， 得到較為純凈的殼聚糖微球。實施例2稱取1.5g的10-溴癸酸甲酯，Ig羥甲香豆素，和0.8g碳酸鉀于25mL丙酮中，40°C 下攪拌反應(yīng)10h。抽濾，旋蒸出產(chǎn)品，再將產(chǎn)品與5% NaOH反應(yīng)，用HCl酸化至體系pH值為
4.5，反復(fù)用水洗。稱取上述產(chǎn)物0. 66g，溶于乙醇中，加入0. 3gEDC和0. 18gNHS,磁力攪拌池，活化羧基。稱取殼聚糖0. 13g溶于2%的乙酸溶液，將活化好的溶液滴到殼聚糖溶液中。 室溫下避光反應(yīng)48h。用lmol/L的NaOH溶液調(diào)反應(yīng)體系的PH值為7，于丙酮中沉淀出產(chǎn)品。取20mg的產(chǎn)品溶于50mLpH為6的PBS緩沖液中，將所得溶液用探針式超聲均化儀均化，然后通過過濾膜過濾掉沉淀物質(zhì)，將所得樣品進行凍干，反復(fù)透析一凍干純化后，得到較為純凈的殼聚糖微球。實施例3稱取1.5g的10-溴癸酸甲酯，Ig羥甲香豆素，和0.8g碳酸鉀于25mL丙酮中，40°C下攪拌反應(yīng)證。抽濾，旋蒸出產(chǎn)品，再將產(chǎn)品與5% NaOH反應(yīng)，用HCl酸化至體系pH值為
3.5，反復(fù)用水洗。稱取上述產(chǎn)物0. 33g，溶于乙醇中，加入0. 18gEDC和0. llgNHS，磁力攪拌 0.證，活化羧基。稱取殼聚糖0. 13g溶于的乙酸溶液，將活化好的溶液滴到殼聚糖溶液中。室溫下避光反應(yīng)Mh。用lmol/L的NaOH溶液調(diào)反應(yīng)體系的PH值為9，于丙酮中沉淀出產(chǎn)品。取30mg的產(chǎn)品溶于50mLpH為9的PBS緩沖液中，將所得溶液用探針式超聲均化儀均化，然后通過過濾膜過濾掉沉淀物質(zhì)，將所得樣品進行凍干，反復(fù)透析一凍干純化后， 得到較為純凈的殼聚糖微球。實施例4稱取1.5g的10-溴癸酸甲酯，Ig羥甲香豆素，和0.8g碳酸鉀于25mL丙酮中，50°C 下攪拌反應(yīng)5h。抽濾，旋蒸出產(chǎn)品，再將產(chǎn)品與5% NaOH反應(yīng)，用HCl酸化至體系pH值為4， 反復(fù)用水洗。稱取上述產(chǎn)物0. 33g，溶于乙醇中，加入0. 3gEDC和0. 18gNHS，磁力攪拌0. 5h， 活化羧基。稱取殼聚糖0. 13g溶于2%的乙酸溶液，將活化好的溶液滴到殼聚糖溶液中。室溫下避光反應(yīng)Mh。用lmol/L的NaOH溶液調(diào)反應(yīng)體系的PH值為7，于丙酮中沉淀出產(chǎn)品。 取20mg的產(chǎn)品溶于50mLpH為8的PBS緩沖液中，將所得溶液用探針式超聲均化儀均化，然后通過過濾膜過濾掉沉淀物質(zhì)，將所得樣品進行凍干，反復(fù)透析一凍干純化后，得到較為純凈的殼聚糖微球。實施例5稱取1.5g的10-溴癸酸甲酯，Ig羥甲香豆素，和0.8g碳酸鉀于25mL丙酮中，50°C 下攪拌反應(yīng)5h。抽濾，旋蒸出產(chǎn)品，再將產(chǎn)品與5% NaOH反應(yīng)，用HCl酸化至體系pH值為4， 反復(fù)用水洗。稱取上述產(chǎn)物0. 33g，溶于乙醇中，加入0. 3gEDC和0. 18gNHS，磁力攪拌0. 5h， 活化羧基。稱取殼聚糖0. 13g溶于2%的乙酸溶液，將活化好的溶液滴到殼聚糖溶液中。室溫下避光反應(yīng)Mh。用lmol/L的NaOH溶液調(diào)反應(yīng)體系的pH值為7，于丙酮中沉淀出產(chǎn)品。 取20mg的產(chǎn)品溶于50mLpH為9的PBS緩沖液中，將所得溶液用探針式超聲均化儀均化，然后通過過濾膜過濾掉沉淀物質(zhì)，將所得樣品進行凍干，反復(fù)透析一凍干純化后，得到較為純凈的殼聚糖微球。實施例6稱取1.5g的10-溴癸酸甲酯，Ig羥甲香豆素，和0.8g碳酸鉀于25mL丙酮中，50°C 下攪拌反應(yīng)5h。抽濾，旋蒸出產(chǎn)品，再將產(chǎn)品與5% NaOH反應(yīng)，用HCl酸化至體系pH值為4， 反復(fù)用水洗。稱取上述產(chǎn)物0. 33g，溶于乙醇中，加入0. 3gEDC和0. 18gNHS，磁力攪拌0. 5h， 活化羧基。稱取殼聚糖0. 13g溶于2%的乙酸溶液，將活化好的溶液滴到殼聚糖溶液中。室溫下避光反應(yīng)Mh。用lmol/L的NaOH溶液調(diào)反應(yīng)體系的pH值為7，于丙酮中沉淀出產(chǎn)品。 取30mg的產(chǎn)品溶于50mLpH為9的PBS緩沖液中，將所得溶液用探針式超聲均化儀均化，然后通過過濾膜過濾掉沉淀物質(zhì)，將所得樣品進行凍干，反復(fù)透析一凍干純化后，得到較為純凈的殼聚糖微球。實施例7稱取1.5g的10-溴癸酸甲酯，Ig羥甲香豆素，和0.8g碳酸鉀于25mL丙酮中，60°C 下攪拌反應(yīng)證。抽濾，旋蒸出產(chǎn)品，再將產(chǎn)品與5% NaOH反應(yīng)，用HCl酸化至體系pH值為
4.5，反復(fù)用水洗。稱取上述產(chǎn)物0. 33g，溶于乙醇中，加入0. 3gEDC和0. 18gNHS,磁力攪拌 Ih,活化羧基。稱取殼聚糖0. 13g溶于1 %的乙酸溶液，將活化好的溶液滴到殼聚糖溶液中。室溫下避光反應(yīng)48h。用lmol/L的NaOH溶液調(diào)反應(yīng)體系的pH值為7，于丙酮中沉淀出產(chǎn)品。取30mg的產(chǎn)品溶于50mLpH為9的PBS緩沖液中，將所得溶液用探針式超聲均化儀均化，然后通過過濾膜過濾掉沉淀物質(zhì)，將所得樣品進行凍干，反復(fù)透析一凍干純化后，得到較為純凈的殼聚糖微球。實施例8稱取1.5g的10-溴癸酸甲酯，Ig羥甲香豆素，和0.8g碳酸鉀于25mL丙酮中，60°C 下攪拌反應(yīng)他。抽濾，旋蒸出產(chǎn)品，再將產(chǎn)品與5% NaOH反應(yīng)，用HCl酸化至體系pH值為 4，反復(fù)用水洗。稱取上述產(chǎn)物0. 33g，溶于乙醇中，加入0. 3gEDC和0. 18gNHS，磁力攪拌lh， 活化羧基。稱取殼聚糖0. 13g溶于的乙酸溶液，將活化好的溶液滴到殼聚糖溶液中。室溫下避光反應(yīng)48h。用lmol/L的NaOH溶液調(diào)反應(yīng)體系的pH值為7，于丙酮中沉淀出產(chǎn)品。 取30mg的產(chǎn)品溶于50mLpH為9的PBS緩沖液中，將所得溶液用探針式超聲均化儀均化，然后通過過濾膜過濾掉沉淀物質(zhì)，將所得樣品進行凍干，反復(fù)透析一凍干純化后，得到較為純凈的殼聚糖微球。實施例9稱取1.5g的10-溴癸酸甲酯，Ig羥甲香豆素，和0.8g碳酸鉀于25mL丙酮中，60°C 下攪拌反應(yīng)8h。抽濾，旋蒸出產(chǎn)品，再將產(chǎn)品與5% NaOH反應(yīng)，用HCl酸化至體系pH值為4， 反復(fù)用水洗。稱取上述產(chǎn)物0. 33g，溶于乙醇中，加入0. 3gEDC和0. 18gNHS，磁力攪拌lh，活化羧基。稱取殼聚糖0.13g溶于的乙酸溶液，將活化好的溶液滴到殼聚糖溶液中。室溫下避光反應(yīng)48h。用lmol/L的NaOH溶液調(diào)反應(yīng)體系的pH值為8，于丙酮中沉淀出產(chǎn)品。 取30mg的產(chǎn)品溶于50mLpH為7的PBS緩沖液中，將所得溶液用探針式超聲均化儀均化，然后通過過濾膜過濾掉沉淀物質(zhì)，將所得樣品進行凍干，反復(fù)透析一凍干純化后，得到較為純凈的殼聚糖微球。實施例10稱取1.5g的10-溴癸酸甲酯，Ig羥甲香豆素，和0.8g碳酸鉀于25mL丙酮中，70°C 下攪拌反應(yīng)9h。抽濾，旋蒸出產(chǎn)品，再將產(chǎn)品與5% NaOH反應(yīng)，用HCl酸化至體系pH值為4， 反復(fù)用水洗。稱取上述產(chǎn)物0.66g，溶于乙醇中，加入0. 18gEDC和0. llgNHS，磁力攪拌池， 活化羧基。稱取殼聚糖0. 13g溶于2%的乙酸溶液，將活化好的溶液滴到殼聚糖溶液中。室溫下避光反應(yīng)48h。用lmol/L的NaOH溶液調(diào)反應(yīng)體系的pH值為8，于丙酮中沉淀出產(chǎn)品。 取20mg的產(chǎn)品溶于50mLpH為6的PBS緩沖液中，將所得溶液用探針式超聲均化儀均化，然后通過過濾膜過濾掉沉淀物質(zhì)，將所得樣品進行凍干，反復(fù)透析一凍干純化后，得到較為純凈的殼聚糖微球。實施例11稱取1.5g的10-溴癸酸甲酯，Ig羥甲香豆素，和0.8g碳酸鉀于25mL丙酮中，70°C下攪拌反應(yīng)9h。抽濾，旋蒸出產(chǎn)品，再將產(chǎn)品與5% NaOH反應(yīng)，用HCl酸化至體系pH值為4，反復(fù)用水洗。稱取上述產(chǎn)物0. 66g，溶于乙醇中，加入0. 18gEDC和0. 1 IgNHS，磁力攪拌2h，活化羧基。 稱取殼聚糖0. 13g溶于2%的乙酸溶液，將活化好的溶液滴到殼聚糖溶液中。室溫下避光反應(yīng) 48h。用lmol/L的NaOH溶液調(diào)反應(yīng)體系的pH值為8，于丙酮中沉淀出產(chǎn)品。取25mg的產(chǎn)品溶于50mLpH為8的PBS緩沖液中，將所得溶液用探針式超聲均化儀均化，然后通過過濾膜過濾掉沉淀物質(zhì)，將所得樣品進行凍干，反復(fù)透析一凍干純化后，得到較為純凈的殼聚糖微球。
權(quán)利要求
1.可載藥殼聚糖微球的制備，其特征在于包括以下步驟(1)按摩爾比為1 1 1稱取一定量的10-溴癸酸甲酯，羥甲香豆素和碳酸鉀，將其溶于25mL丙酮中，40 70°C下攪拌反應(yīng)5 10h。(2)將步驟(1)中所得產(chǎn)物與5%NaOH反應(yīng)，再用HCl酸化至pH為3. 5 4. 5，反復(fù)用水洗。(3)按摩爾比為1 1 1 2稱取一定量的殼聚糖和上述產(chǎn)物，將產(chǎn)物溶于乙醇中， 加入EDC和NHS活化羧基0. 5h 池后，慢慢滴加至1^-2% (w/v)乙酸的殼聚糖水溶液中，室溫下避光反應(yīng)1 2天。(4)用lmol/L的NaOH溶液調(diào)反應(yīng)體系的pH值為7 9，于丙酮中沉淀出產(chǎn)品。(5)取20 30mg的產(chǎn)品溶于50mLpH為6 9的PBS緩沖液中，將所得溶液用探針式超聲均化儀均化，然后通過過濾膜過濾掉沉淀物質(zhì)，將所得樣品進行凍干，反復(fù)透析一凍干純化后，得到較為純凈的殼聚糖微球。
2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟⑴中的10-溴癸酸甲酯，羥甲香豆素和碳酸鉀的摩爾比為1 1 1。
3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(1)中，反應(yīng)溫度為40 70°C。
4.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(2)中HCl酸化至pH為3.5 4. 5。
5.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(3)中，殼聚糖與改性后羥甲香豆素的摩爾比為1 1 1 2。
6.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(3)中殼聚糖與EDC、NHS的摩爾比為 1 1. 2 1. 2 1 2 2。
7.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟中調(diào)反應(yīng)體系的PH值為7 9。
8.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(5)中產(chǎn)品的質(zhì)量為20 30mg。
9.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟(5)中PBS緩沖液的pH值為6 9。
全文摘要
本發(fā)明涉及可用作藥物載體的殼聚糖微球的制備。本發(fā)明采用自組裝法制備殼聚糖微球。首先用10-溴癸酸甲酯對羥甲香豆素進行改性，制備含有羧基的羥甲香豆素，接著將其加入殼聚糖的乙酸溶液進行反應(yīng)，用NaOH調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的pH為7～9，在丙酮中沉淀出產(chǎn)品。取20～30mg的產(chǎn)品溶于50mL的pH為6～9的PBS緩沖液中，用探針式超聲均化儀均化，過濾膜過濾，將所得樣品進行凍干，反復(fù)透析一凍干純化后，得到較為純凈的殼聚糖微球。本方法制備工藝簡單，成本較低，且制備的納米粒子無細胞毒性，可用作藥物載體。
文檔編號A61K9/16GK102350278SQ20111016881
公開日2012年2月15日 申請日期2011年6月17日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月17日
發(fā)明者徐娟, 朱曉丹, 聶俊, 馬貴平 申請人:北京化工大學(xué)常州先進材料研究院