專利名稱：恒河猴爆發(fā)性肝功能衰竭模型的建立的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種恒河猴爆發(fā)性肝功能衰竭模型的制備方法。
背景技術：
急性肝衰竭(fulminant hepatic failure, FHF)臨床常見，多由病毒感染、廣泛肝組織切除、急性藥物或毒物損傷等引起，其基本病理改變?yōu)楦螌嵸|細胞大片狀變性壞死。 病人預后兇險，死亡率非常高。除肝移植外，尚無更好的辦法對其進行治療。受限于供器官的嚴重短缺，細胞移植(成熟肝細胞或干細胞移植)、生物人工肝、組織工程肝等成為當前研究熱點，但其有效性多是在小動物(基本上都是大鼠)上獲得。促進肝細胞再生也是當前研究熱點，但遠未取得讓人滿意的進展，尚未找到能短期內顯著促進肝細胞再生的理想藥物。大動物，尤其是靈長類動物的實驗數據極為缺乏，制約了這些新的治療方案向臨床過度。建立最接近于人類的靈長類動物AHF模型(急性肝功能衰竭(acute hepatic failure, AHF))，用以評估這些新的治療方法的有效性和安全性，是將其最終應用于臨床治療的必經途徑。目前爆發(fā)性肝功能衰竭治療研究最常用模型動物是嚙齒類。由于嚙齒類在進化關系上與人類相距甚遠，以其為研究對象所獲得的實驗數據對臨床指導意義不大。所用到的大動物模型僅限于豬和犬，同樣與人存在巨大差異。恒河猴的解剖特點、各系統(tǒng)生理功能及對疾病和治療藥物的反應性與人類極為相近，是進行免疫學相關治療和干細胞移植、異種移植臨床前有效性和安全性評價的敏感動物。利用恒河猴FHF模型評價新型FHF治療藥物， 研究肝臟干細胞或肝細胞移植以及輔助性肝支持措施，如組織工程肝和生物人工肝的治療效果，是國際公認的臨床前實驗體系，對未來這些治療方案的臨床應用具有重要的指導意義。因此建立非人靈長類FHF模型成為FHF治療研究和臨床前藥物評價的迫切需要。建立大動物AHF的有以下基本原則(1)可逆性(Reversibility)給予有效治療措施可使動物存活；( 重現性(Iteproducibility):不給予治療，所有動物都將死亡； (3)肝衰竭的致死性(Death from liver failure)肝損傷最終將導致動物死亡；(4)治療窗(Therapeutic window)在動物死亡前有足夠時間給予治療并能評估其療效；(5)大動物模型(Large animal model):能連續(xù)取樣檢測、更接近人類特點；(6)對實驗者無害 (Minimal hazard to personnel)藥品須盡可能對實驗人員無害；(7)接近人的代謝和生理學(Appropriate metabolism/physiology)以便將實驗結果推廣至人類；(8)動物需有意識(Conscious animal model)用于觀察肝性腦??；(9)符合倫理(Compliance with ethical standards)必須保證實驗動物的福利和倫理規(guī)范。目前肝毒性藥物是建立FHF模型最常用手段。這些藥物包括醋氨酚 (Acetaminophen)、半乳糖野(D-Galactosamine)、硫代乙酷胺(Thioacetamide, TAA) 等。這些藥物誘導的FHF模型均存在各種缺陷，如醋氨酚，其重現性差，相同劑量下動物存活時間差異巨大；伴發(fā)高鐵血紅蛋白血癥、難治性貧血及其他器官損傷。半乳糖酐 (D-Galactosamine)重現性差(死亡率和至死亡的時間差異非常大)；費用高(l_2g/kg)，不適合在大動物中應用。硫代乙酰胺(ThioacetamideJAA)易導致嚴重低血壓、低血糖、低體溫以及腎衰竭，能直接導致神經損傷，與肝性腦病無法區(qū)分；對實驗人員有較大毒性。病毒也可誘導FHF發(fā)生，但其復制困難，生物安全性差。手術切除全部或大部分肝臟，或完全去血流化，也可建立!FH模型，但由于手術耗時、創(chuàng)傷大，血流動力學干擾大；除非原位肝移植，否則動物無法存活；肝臟本身并未受到損傷。這類模型適合研究肝移植及肝支持系統(tǒng)。鵝膏蕈堿是有毒蘑菇的主要毒性物質，為環(huán)肽類生物堿，通過抑制RNA聚合酶造成細胞損傷，其靶器官主要為肝臟和胃腸道。內毒素脂多糖為革蘭氏陰性細菌細胞壁主要成分，本身可引起肝細胞損傷。同時，通過激活肝臟內單核巨噬細胞，分泌大量炎性介質，弓丨起肝細胞凋亡。通過門靜脈系統(tǒng)直接給藥，可最大限度降低藥物對其他組織器官的損傷。目前尚未見以大型靈長類動物建立FHF動物模型的報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的技術方案是提供了一種鵝膏蕈堿聯(lián)合內毒素脂多糖在制備用于篩選治療爆發(fā)性肝功能衰竭藥物和方法的動物模型中的用途。本發(fā)明的另一技術方案是提供了恒河猴爆發(fā)性肝功能衰竭模型的建立。本發(fā)明提供了鵝膏蕈堿聯(lián)合內毒素脂多糖在制備用于篩選治療爆發(fā)性肝功能衰竭藥物、評價組織工程肝支持系統(tǒng)或肝細胞、干細胞移植治療效果的靈長類動物模型中的用途，其中鵝膏蕈堿的施用劑量為0. lmg/kg,內毒素施用劑量為1 μ g/kg。其中，鵝膏蕈堿與脂多糖內毒素同時施用，施用方法為單次腹腔滴注。本發(fā)明還提供了一種爆發(fā)性肝功能衰竭動物模型的制備方法，它是將鵝膏蕈堿和脂多糖內毒素施用于靈長類動物，鵝膏蕈堿的施用劑量為0. lmg/kg，脂多糖內毒素的施用劑量為ι μ g/kg。其中，所述靈長類動物為恒河猴。其中，所述的施用方法為單次腹腔滴注。本發(fā)明還提供了該方法制備得到的爆發(fā)性肝功能衰竭動物模型。本發(fā)明提供了所述的動物模型在篩選治療爆發(fā)性肝功能衰竭的藥物、評價組織工程肝支持系統(tǒng)或肝細胞、干細胞移植治療效果中的應用。一種評價組織工程肝支持系統(tǒng)或肝細胞、干細胞移植效果的方法，包括如下步驟a、它是將鵝膏蕈堿聯(lián)合脂多糖內毒素施用于靈長類動物，制備爆發(fā)性肝功能衰竭動物模型，鵝膏蕈堿的施用劑量為0. lmg/kg，脂多糖內毒素的施用劑量為1 μ g/kg ；b、采用細胞移植或器官移植于該動物模型；C、觀察移植后動物的肝功能影響情況，評價組織工程肝支持系統(tǒng)或肝細胞、干細胞移植效果。其中，a步驟所述靈長類動物為恒河猴。其中，所述的鵝膏蕈堿與脂多糖內毒素同時施用，施用方法為單次腹腔滴注。本發(fā)明采用鵝膏蕈堿聯(lián)合內毒素脂多糖，通過腹腔給藥，建立恒河猴爆發(fā)性肝功能衰竭模型，本發(fā)明動物模型可以用于嚙齒類動物模型無法完成的生物技術新藥的評價、以及組織工程肝、生物人工肝和肝細胞、干細胞移植治療技術的評價。以下通過具體實施方式
對本發(fā)明作進一步的詳細描述，但并不限制本發(fā)明，本領域技術人員可以根據本發(fā)明作出各種改變和變形，只要不脫離本發(fā)明的精神，均應屬于本發(fā)明所附權利要求的范圍。


圖1本發(fā)明動物模型給藥前后肝功能、腎功能、心肌酶譜、血淀粉酶、血糖指標的改變。圖IA為谷丙轉氨酶(ALT)和谷草轉氨酶(AST)的改變；圖IB為膽紅素(總膽紅素 TBIL，直接膽紅素DBIL，間接膽紅素IBIL)的改變；圖IC為PT和APTT改變。圖2本發(fā)明動物模型肝臟大體改變。圖2A為正常恒河猴肝臟；圖2B顯示尸檢病變肝臟呈黃色萎縮，肝包膜皺縮，肝邊緣銳利。圖3B為尸檢恒河猴肝臟剖面觀。圖3本發(fā)明動物模型肝組織切片油紅0染色及HE染色。圖3A為給藥后3 活檢油紅0染色，顯示肝細胞嚴重脂肪變；圖:3B為尸檢肝細胞呈大片狀壞死，圖4本發(fā)明動物模型肝臟超聲及超聲增強造影影像學改變。圖示給藥4 后肝臟回聲稍增強，特別是左內葉局部區(qū)域，超聲造影可觀察到該區(qū)域呈低灌注，門靜脈血流改變不明顯，肝動脈阻力指數增高。給藥60h后肝臟實質回聲稍增強，彩色多普勒顯示門靜脈流速降低，肝動脈阻力指數增高。圖5本發(fā)明動物模型肝臟、腦的MRI影像學改變。給藥后24h肝左葉信號稍增高， 提示細胞水腫。給藥后4 肝實質信號增高，不均勻。增強減弱區(qū)域增多。給藥后66h，肝實質信號不均勻區(qū)增多，廣泛，造影劑攝取不均勻區(qū)增多廣泛，肝膽期信號普遍減低。頭部 MRI提示給藥后4 無明顯異常，給藥后6 彌散圖像顯示出雙側顳葉、額葉片帶狀異常信號區(qū)，提示有超急性期缺血。
具體實施例方式實施例1本發(fā)明動物模型的制備1、材料與方法1.1實驗材料3-4歲雌性和雄性恒河猴3只，無B皰疹病毒、猴逆轉錄病毒、猴白血病病毒和免疫缺陷病毒感染；購自成都平安動物繁育基地。1. 2主要試劑鵝膏蕈堿(α-amanitin)，購自瑞士Alexis Biochemicals 公司；內毒素脂多糖(LPS)購自美國SigmaAldrich公司。其他藥品和耗材均購自華西醫(yī)院利康藥房。1. 3主要溶液的配制鵝膏蕈堿溶液的配制A液取原裝Img/支鵝膏蕈堿粉劑，加入5ml生理鹽水溶解，作為儲存液，4°C短期存放。B液根據猴體重，按照0. lmg/kg體重，吸取A液稀釋至50ml生理鹽水中，作為工作液。CN 102526034 A
內毒素脂多糖溶液的配制A液秤取脂多糖100 μ g，溶解于Iml生理鹽水，作為儲存液，4°C短期存放。B液根據猴體重，按照1 μ g/kg體重，吸取A液，稀釋至鵝膏蕈堿工作液中。工作液現用現配。1. 4主要儀器1)全自動生化分析儀2)CT :PHILIPS BRILLIANCE 64 排 /16 排3)磁共振SIEMENS TRIO 3T ；SIEMENS AVANTO 1. 5T(MR 對比齊[J :莫迪司 (Gd-BOPTA, multihance))4)超聲PHILIPS BRILLIANCE IU22(超聲對比劑聲諾維(SonoVue，注射用六氟化硫微泡))1. 5實驗方法1. 5. 1恒河猴肝功能、腎功能生化指標，心肌酶譜，血淀粉酶指標測定通過測定上述指標，了解肝、腎、心及胰腺是否存在預存病變，并獲得試驗前動物基礎值。1)動物禁食10_12h，不禁水；2)根據動物購入時體重，按15mg/kg肌肉注射氯氨酮(50mg/ml)；3)待動物麻醉后，準確稱量體重，并記錄；4)將恒河猴上下肢固定于手術臺上，下肢小腿后側備皮暴露大隱靜脈，碘氟消毒；5)20G留滯針穿刺大隱靜脈，自動采血器采集全血6ml (分別做肝功能、腎功能、血常規(guī)、心肌酶譜、血糖和胰淀粉酶測定，并標記為0分鐘數值)。1. 5. 2恒河猴顱、胸腔、腹腔主要臟器影像學參數通過CT、MRI及胸腹部超聲，了解腦、心、肺、肝、腎、胰腺等主要臟器是否有預存病變，并獲得試驗前動物基礎值。1)動物麻醉同上。2)腹部備皮。3)分別采用 PHILIPS BRILLIANCE 64 排 /16 排 CT、SIEMENS TRIO 3T 和 SIEMENS AVANTO 1.5T (增強磁共振采用MR對比劑為莫迪司G d-B0PTA, multihance)磁共振進行全
身掃描，獲取全身主要臟器影像學參數。4)采用PHILIPS BRILLIANCE IU22超聲，獲取心、肝、脾、腎、胰腺等主要臟器影像學參數(增強造影采用超聲對比劑聲諾維SonoVue)。5)圖像采集完畢，待動物完全蘇醒，送回籠內。1. 5. 3恒河猴肝臟穿刺活檢1)動物麻醉同上。2)上腹部以艾力克紗布對以進針點為中心向周圍至少15em皮膚無遺漏地涂擦。 待艾力克涂液自然干燥后，再用70%酒精棉球將艾力克擦去。鋪巾。3)于劍突下偏右側肋緣進針1. 5cm,扳動扳機，獲取肝組織兩條。4)妥善處理創(chuàng)口。
5)分別對獲取的肝組織進行冰凍切片及石蠟包埋切片。冰凍切片用于油紅0染色，觀察肝脂肪變情況。石蠟包埋切片用于HE染色，獲取組織學參數。6)活檢完畢，待動物完全蘇醒，送回籠內。1. 5. 4鵝膏蕈堿及內毒素脂多糖注入恒河猴1)動物麻醉同上。2)中上腹部以艾力克紗布對以進針點為中心向周圍至少15cm皮膚無遺漏地涂擦。待艾力克涂液自然干燥后，再用70%酒精棉球將艾力克擦去。3)將輸液針頭插入腹腔，將鵝膏蕈堿及脂多糖混合液50ml滴注到腹腔內。滴注過程中多次晃動腹部，使藥物均勻分布于腹腔。4)滴注完畢，拔出針頭，妥善處理創(chuàng)口。5)待動物完全蘇醒，送回籠內。給予正常飲食飲水。6)密切觀察動物生命體征。1.5.5恒河猴FHF過程的動態(tài)觀測1)采用上述方法，分別于給藥后每1 進行靜脈采血，檢測肝功能、腎功能、心肌酶譜、血糖、胰淀粉酶指標。2)采用上述方法，分別于給藥后每24h進行影像學(CT、MRI、超聲)檢查。3)采用上述方法，分別于給藥后每24h進行肝穿刺活檢，標本用于冰凍切片油紅0 染色和石蠟包埋切片用于HE染色。4)觀察恒河猴生命體征、行為異常表現。1.5.6恒河猴尸檢1)采用頸胸腹聯(lián)合切口，從下頌正中向下沿前正中線經臍的左側作一直線切開， 止于恥骨聯(lián)合。依次切開皮膚、皮下組織、肌肉，謹慎切開腹膜，切斷胸壁下緣的肌肉，暴露腹腔各臟器。再將胸壁的皮膚連皮下組織和胸大肌一起自胸部中線起剝離，以充分暴露肋骨，用軟骨刀切開肋骨與肋軟骨交界處至胸鎖關節(jié)處，用肋骨剪剪斷第1肋骨，暴露胸腔。2)檢查腹腔各臟器腹膜表面性狀，色澤，有無滲出物附著，粘連等。腹腔內有否積液及氣體，大網膜的位置與臟器有否粘連。各臟器的位置、大小是否正常。檢查腸系膜同時注意其淋巴結是否腫大。3)檢查胸腔各臟器檢查心、肺的位置，大小，彼此間的關系，以及縱膈內淋巴結的外觀，大小，硬度。胸膜的色澤，有無炎性滲出物附著及粘連，胸腔有無積液及氣體。沿心臟底部在心包壁作“人”字形剪開，檢查有無滲出物附著及粘連等。4)將頭部盡量向后仰，然后將軟骨刀在下頌角內側向上刺入，并沿骨之內緣逐漸向前割斷口底組織一直繞至對側該處，經下頌將舌牽出，沿脊柱前方將頸胸腹臟器聯(lián)合取出ο5)依次取下各臟器，逐一詳細檢查，稱量，測量體積，并檢查臟器切面有無異常。6)自一側乳突經顱頂向另一側乳突作一切線，切開皮膚后，剝離皮下軟組織及骨膜。切開顳肌后，用細齒鋸沿顱前后圓周切線鋸斷顱骨板全部及內板大部(但不要完全鋸斷，以免鋸入腦內)。再用鑿子、錘，輕輕擊破內板之相連部分，用丁字鑿掀起顱頂骨，將硬腦膜與骨分開。剪開上矢狀竇檢查其內有無血栓，再沿顱頂鋸緣，將硬腦膜之四周剪斷。于大腦縱裂深處，將大腦鐮前端附著處割開，并拉大腦鐮向后，露出兩側大腦半球全部表面，用左手托住腦頂部，右手指伸入腦額葉前端下方將之扶起，露出腦神經、垂體柄及小腦幕，逐一切斷腦神經、垂體柄及小腦幕。最后將刀深入脊管內，割斷頸髓及椎動脈，取出腦髓。然后用小刀將垂體周圍組織分離，取出垂體。7)觀察有無腦出血、腦水腫等改變。8)各臟器作適當切割后，即放于10%福爾馬林液內固定。2.實驗結果2. 1鵝膏蕈堿聯(lián)合脂多糖導致肝細胞大量壞死從而誘導FHF的發(fā)生恒河猴腹腔滴注鵝膏蕈堿和內毒素脂多糖溶液后12h即出現肝臟轉氨酶10倍以上的升高，肝臟活檢見肝細胞發(fā)生脂肪變。至Mh，轉氨酶升高達50倍左右，膽紅素水平上升，凝血酶原時間(PT)和APTT延長；影像學檢查示肝細胞水腫，其余改變不明顯。至給藥后36h，轉氨酶升高達到200-300倍，PT和APTT顯著延長，膽紅素水平顯著上升，肝細胞出現中央靜脈周圍及肝小葉中央區(qū)大片狀壞死，殘余肝細胞脂肪變明顯。至48h，轉氨酶水平下降，膽紅素持續(xù)升高，PT和APTT顯著延長，影像學顯示肝臟左內葉局部區(qū)域回聲增強，呈低灌注，門靜脈血流阻力升高。至60h，轉氨酶水平繼續(xù)下降，膽紅素水平繼續(xù)升高，PT和 APTT顯著延長，影像學顯示肝臟密度不均，門靜脈血流阻力升高。2. 2鵝膏蕈堿聯(lián)合脂多糖對肝外器官損傷輕微除肝臟出現顯著病變外，血淀粉酶及心肌酶譜及相應的影像學指標顯示腎臟、胰腺、心臟無明顯損傷。肌酐水平在給藥后4 顯著升高，但尿酸和尿素水平并無明顯改變。 給藥后3 起，血糖水平持續(xù)下降。2. 3鵝膏蕈堿聯(lián)合脂多糖導致FHF可表現出嚴重的肝性腦病給藥后4 有腦水腫表現，恒河猴表現為行為減少、進食減少、嗜睡；給藥后60h恒河猴出現昏睡至昏迷狀態(tài)，CT及MRI可見雙側顳葉、額葉片帶狀異常信號區(qū)，提示腦急性缺血。2. 4鵝膏蕈堿聯(lián)合脂多糖給藥后恒河猴均發(fā)生死亡3只恒河猴于給藥后66h_96h內死亡。2. 5尸檢及病理學顯示鵝膏蕈堿聯(lián)合脂多糖特異作用于肝細胞，導致肝細胞大量壞死，是最終引起動物死亡的主要原因尸檢顯示腹腔未見明顯積液。肝臟呈急性黃色萎縮，邊緣銳利，包膜皺縮。未見門靜脈血栓形成。肺門、腎門、腸系膜、胃大彎側淋巴結呈腫大，大小約綠豆至黃豆大，呈暗黑色。心、肺、腎、胰腺、胃、小腸、結腸、膀胱、輸尿管、子宮等未見肉眼可見異常。輕度腦水腫，腦溝變淺，腦回增寬。顱底、硬腦膜外、硬腦膜下及蛛網膜下未見出血，腦實質未見出血， 無腦疝形成。各主要臟器進行石蠟包埋，切片，HE染色后鏡下觀察并照相。肝肝小葉結構紊亂，肝竇擴張充血，肝細胞廣泛壞死，殘留少量肝細胞未見再生現象。小葉內和匯管區(qū)可見淋巴細胞浸潤。腎腎小球的毛細血管球擴張充血，腎小管上皮細胞水腫，管腔內可見蛋白管型， 間質血管擴張充血。肺肺泡間隔增寬，肺泡壁毛細血管血管擴張充血。淋巴結肺門、胃大彎側、腸系膜、腎門處淋巴結腫大，結內淋巴細胞大片減少伴出血，組織細胞增生，部分區(qū)域淋巴濾泡增生，增生的濾泡中央血管壁增厚玻變。腦腦膜下淺層腦組織疏松水腫。結腸灶性區(qū)域結腸粘膜上皮細胞壞死脫落。心臟心肌纖維波浪狀改變。按下表測定各指標，結果顯示，本發(fā)明動物模型滿足診斷指標要求，證明本發(fā)明造模成功。表1.人與恒河猴爆發(fā)性肝衰模型比較
人FHF診斷指標人 恒河猴模型病程(發(fā)病到死亡時間)_<10-14d__36-66h
Γ PTA (凝血酶原活性)<40%<10%---
TBIL (總膽紅素)>171umol/L>30倍給藥前對照值
__或>〗0倍正常值上限__
酶膽分離現象有有——本發(fā)明制備的恒河猴爆發(fā)性肝功能衰竭模型具有制作簡單、肝臟損傷的特異性、 肝外毒性小、各項生化指標、影像學指標以及疾病過程和轉歸高度類似人爆發(fā)性肝功能衰竭的相應改變。從給藥到動物死亡具有較長的治療時間窗，可用于篩選促肝細胞再生藥物， 評估肝移植、組織工程肝、生物人工肝支持系統(tǒng)、肝細胞移植以及干細胞移植的治療效果。實施例2利用本發(fā)明恒河猴爆發(fā)性肝功能衰竭動物模型評價組織工程肝支持系統(tǒng)或肝細胞、干細胞移植效果并建立相關的評價體系a、按實施例1的方法制備恒河猴爆發(fā)性肝功能衰竭模型，它是將鵝膏蕈堿聯(lián)合脂多糖內毒素施用于靈長類動物，鵝膏蕈堿的施用劑量為0. lmg/kg，脂多糖內毒素的施用劑量為 ι μ g/kg ；b、采用細胞移植或器官移植于該動物模型；C、觀察移植后動物的肝功能的量化指標影響情況，評價組織工程肝支持系統(tǒng)或肝細胞、干細胞移植效果。經過步驟c的評價，如果移植后的動物肝功能指標有明顯改善的，則可以證明采用細胞移植或器官肝移植、組織工程肝、生物人工肝方式治療爆發(fā)性肝功能衰竭的可行性。綜上所述，本發(fā)明制備的爆發(fā)性肝功能衰竭動物模型建模成功，可以用于嚙齒類動物模型無法完成的生物技術新藥的評價和肝移植、組織工程肝、生物人工肝支持系統(tǒng)、肝細胞移植以及干細胞移植的治療效果的評價。
權利要求
1.鵝膏蕈堿聯(lián)合內毒素脂多糖在制備用于篩選治療爆發(fā)性肝功能衰竭藥物、評價組織工程肝支持系統(tǒng)或肝細胞、干細胞移植治療效果的靈長類動物模型中的用途，其中鵝膏蕈堿的施用劑量為0. lmg/kg,內毒素施用劑量為1 μ g/kg。
2.根據權利要求1所述的用途，其特征在于鵝膏蕈堿與脂多糖內毒素同時施用，施用方法為單次腹腔滴注。
3.一種爆發(fā)性肝功能衰竭動物模型的制備方法，其特征在于它是將鵝膏蕈堿和脂多糖內毒素施用于靈長類動物，鵝膏蕈堿的施用劑量為0. lmg/kg，脂多糖內毒素的施用劑量為 ι μ g/kg。
4.根據權利要求3所述的爆發(fā)性肝功能衰竭動物模型的制備方法，其特征在于所述靈長類動物為恒河猴。
5.根據權利要求3或4所述的爆發(fā)性肝功能衰竭動物模型的制備方法，其特征在于 所述的施用方法為單次腹腔滴注。
6.權利要求3-5任一一項所述的方法制備得到的爆發(fā)性肝功能衰竭動物模型。
7.權利要求6所述的動物模型在評價組織工程肝支持系統(tǒng)或肝細胞、干細胞移植治療效果中的應用。
8.一種評價組織工程肝支持系統(tǒng)或肝細胞、干細胞移植效果的方法，包括如下步驟a、它是將鵝膏蕈堿聯(lián)合脂多糖內毒素施用于靈長類動物，制備爆發(fā)性肝功能衰竭動物模型，鵝膏蕈堿的施用劑量為0. lmg/kg，脂多糖內毒素的施用劑量為lyg/kg;b、采用細胞移植或器官移植于該動物模型；c、觀察移植后動物的肝功能影響情況，評價組織工程肝支持系統(tǒng)或肝細胞、干細胞移植效果。
9.根據權利要求8所述的篩選藥物的方法，其特征在于a步驟所述靈長類動物為恒河猴。
10.根據權利要求8或9所述的篩選藥物的方法，其特征在于所述的鵝膏蕈堿與脂多糖內毒素同時施用，施用方法為單次腹腔滴注。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種鵝膏蕈堿聯(lián)合內毒素脂多糖在制備用于篩選治療爆發(fā)性肝功能衰竭時促肝細胞再生藥物以及評價組織工程肝支持系統(tǒng)或肝細胞、干細胞移植治療效果的動物模型。其中鵝膏蕈堿的施用方法和劑量為單次腹腔滴注，0.1mg/kg，內毒素為1μg/kg。本發(fā)明還提供了一種制備恒河猴爆發(fā)性肝功能衰竭的方法，及該方法制備的爆發(fā)性肝功能衰竭動物模型。本發(fā)明動物模型可以用于嚙齒類動物模型無法完成的生物技術新藥的評價，還可以用于組織工程肝臟、生物人工肝、肝細胞及干細胞移植治療技術的評價。
文檔編號A61K31/739GK102526034SQ20101060444
公開日2012年7月4日 申請日期2010年12月24日 優(yōu)先權日2010年12月24日
發(fā)明者周萍, 夏杰, 張 杰, 李宏霞, 步宏, 王莉, 石毓君, 郭崗 申請人:四川大學華西醫(yī)院, 國家成都中藥安全性評價中心, 成都華西海圻醫(yī)藥科技有限公司