專利名稱：鐘花報春花總黃酮的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種鐘花報春花總黃酮的新用途，屬藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
心肌缺血，是指心臟的血液灌注減少，導(dǎo)致心臟的供氧減少，心肌能量代謝不正常，不能支持心臟正常工作的一種病理狀態(tài)。心肌缺血常見的原因是冠狀動脈粥樣硬化，其次還有炎癥(風(fēng)濕性、梅毒性、川崎病和血管閉塞性脈管炎等)、痙攣、栓塞、結(jié)締組織疾病、 創(chuàng)傷和先天性畸形等多種。研究發(fā)現(xiàn)，心肌缺血不僅有發(fā)生心肌梗塞和猝死的危險，而且， 更為嚴(yán)重的是，心肌缺血會給心肌細(xì)胞帶來損傷，可出現(xiàn)心肌細(xì)胞水腫、細(xì)胞膜和細(xì)胞器膜完整性破壞等，最終可能會導(dǎo)致正常心肌細(xì)胞凋亡，嚴(yán)重危害人體健康。當(dāng)前治療心肌缺血的藥物中，西藥主要有抗血小板藥物、β -受體阻斷劑、鈣離子拮抗劑、他汀類藥物、硝酸脂類藥物等，中藥主要有牡丹皮、人參、銀杏葉、油茶、四逆湯等。鐘花報春(Primula sikkmensis Hook)，屬于報春花科報春花屬植物，花黃色，鐘狀，聚生于花葶頂端，主產(chǎn)于西藏東部及南部、青海東南部、四川西部、云南西北部；生于海拔3750-4500米的林緣濕草地、水溝邊；分布于尼泊爾、錫金、不丹、緬甸。它是一種常見的藏藥材，藏族民間用全草作止瀉藥，其療效獨特顯著。具有清熱解毒，瀉肝膽火、止血等作用，還能用于心脈瘀阻、血脈不暢，療效確切，在治療小兒熱痢方面，有效率達(dá)到80%，同時， 由于鐘花報春資源十分豐富，使其在甘孜藏族地區(qū)廣泛被使用。當(dāng)前對鐘花報春的研究多集中在報春花的系統(tǒng)分類、地理分布及資源調(diào)查等方面，也有研究人員對鐘花報春花的總黃酮提取工藝進(jìn)行了初步研究，他們利用正交試驗研究了從鐘花報春的花中提取總黃酮的優(yōu)選工藝，并指出以60%乙醇，20倍溶媒用量，回流提取3次，每次1小時，提取得到的總黃酮含量較高，提取物中總黃酮含量可達(dá)到7%左右。 (邱建平，等，正交設(shè)計優(yōu)化鐘花報春花總黃酮提取工藝，成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2009年4卷4 期)。目前，還未見將鐘花報春花總黃酮用于治療心肌缺血、保護(hù)缺血心肌細(xì)胞的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供鐘花報春花總黃酮的新用途。本發(fā)明的另一目的是提供一種治療心肌缺血的藥物組合物。鐘花報春花總黃酮在制備預(yù)防或/和治療心肌缺血的保健品或/和藥物中的用途。進(jìn)一步地，所述保健品或/和藥物是預(yù)防或/和治療急性心肌缺血的保健品或/ 和藥物。進(jìn)一步地，所述保健品或/和藥物是保護(hù)缺血心肌細(xì)胞的保健品或/和藥物。其中，鐘花報春花總黃酮中，黃酮的含量以蘆丁計不得低于50% w/w。進(jìn)一步地，鐘花報春花總黃酮中，黃酮的含量以蘆丁計為50-60% w/w。
進(jìn)一步優(yōu)選地，鐘花報春花總黃酮中，黃酮的含量以蘆丁計為50-55% w/w。其中，所述的鐘花報春花總黃酮來源于報春花科報春花屬植物鐘花報春!Simula sikkimensis Hook的花的提取物。進(jìn)一步地，鐘花報春花總黃酮是通過如下方法制備的(1)取鐘花報春花，以50-95% V/V乙醇提取，合并提取液備用；(2)將步驟(1)中的提取液回收乙醇后，用正丁醇萃取，將正丁醇層回收正丁醇后，上大孔吸附樹脂，先用水洗脫至不發(fā)生三氯化鐵反應(yīng)和鹽酸鎂粉反應(yīng)，再用30% -95% 的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收溶劑后，干燥，即得鐘花報春總黃酮。更進(jìn)一步地，步驟(1)中采用50-70% V/V乙醇提??；步驟O)中選用30-40% V/ V乙醇進(jìn)行洗脫。進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟⑴中采用60% V/V乙醇提?。徊襟E⑵中選用30% V/V乙醇進(jìn)行洗脫。更進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟⑴中采用60% ν/ν乙醇提取3次。步驟⑵中選用30% V/V乙醇進(jìn)行洗脫，洗脫至不發(fā)生三氯化鐵反應(yīng)和鹽酸鎂粉反應(yīng)。本發(fā)明還提供了一種預(yù)防或/和治療心肌缺血的保健品或/和藥物組合物，它是由鐘花報春花總黃酮為活性成分，加上藥學(xué)上常用的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。鐘花報春花總黃酮可以降低心電ST段的偏移和血清LDH、CK含量，能夠有效預(yù)防或/和治療急性心肌缺血，保護(hù)缺血心肌細(xì)胞，其抗心肌缺血作用顯著，為臨床用藥提供了新的選擇。
具體實施例方式實施例1本發(fā)明鐘花報春花總黃酮的制備取干燥的鐘花報春花粗粉，加入20倍量60%乙醇浸泡后，加熱回流提取3次，每次 lh，趁熱抽濾，合并濾液，減壓回收至無醇味后，加入適量蒸餾水后，用正丁醇萃取，減壓回收正丁醇溶液至無正丁醇味后，加入適量蒸餾水溶解，過濾后，濾液上經(jīng)預(yù)處理的DlOl大孔吸附樹脂，先用蒸餾水洗脫至不發(fā)生三氯化鐵反應(yīng)和鹽酸鎂粉反應(yīng)，然后用30%乙醇洗脫，收集洗脫液，直至不發(fā)生三氯化鐵反應(yīng)和鹽酸鎂粉反應(yīng)，合并洗脫液，回收溶劑后，干燥即得鐘花報春花總黃酮，其中，黃酮以蘆丁計含量為52. 5%。本發(fā)明鐘花報春花總黃酮的制備方法不限于實施例中所述的方式，現(xiàn)有的黃酮提取方法均能用于對鐘花報春花總黃酮的提取，如堿水提取等；對總黃酮的精制也可采用其他型號的大孔吸附樹脂進(jìn)行精制，洗脫溶劑除采用乙醇以外，也可以采用弱堿溶液進(jìn)行洗脫，也可提高黃酮含量。實施例2鐘花報春花總黃酮制備方法的篩選1.總黃酮含量測定方法1.1對照品溶液的制備取蘆丁對照品0. 01006g，置于50ml容量瓶中，加60 %乙醇定容至刻度，制得濃度為0. 2012mg/ml的對照品溶液，備用。1.2樣品溶液的制備按照各制備方法制備得到的浸膏轉(zhuǎn)移至IOOml容量瓶中，并定容至刻度，從此溶液中精密移取IOml于IOOml容量瓶中，并用60%乙醇定容至刻度，即制得樣品溶液，備用。1.3測定波長的確定精密移取對照品溶液7ml和供試品溶液2ml，分別置于2支25ml容量瓶中，均加入 60 %乙醇稀釋至7ml，混勻，加5 %亞硝酸鈉溶液Iml，搖勻，放置6min，再加10 %硝酸鋁溶液 lml，搖勻，放置6min，加氫氧化鈉溶液10ml，再加60%乙醇至刻度，搖勻，放置15min，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外可見分光光度法(《藥典》05年版附錄VA)，在200-800nm進(jìn)行掃描， 測得對照品溶液和樣品溶液的最大吸收波長分別為506. 5Inm和498. 67nm。兩者的最大吸收波長接近，因此確定506nm為測定波長。1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液(0.2012mg/ml) 0. 0ml, 1. Oml，2. Oml，3. Oml，4. Oml，5. Oml，
6.Oml，7. Oml，分別置于25ml容量瓶中，各加60 %乙醇至7. Oml，加5 %亞硝酸鈉溶液 (0. 050g/ml) 1. 0ml，搖勻，放置 6min，再加 10%硝酸鋁溶液(0. 09972g/ml) 1. 0ml，搖勻，放置6min.加氫氧化鈉試液(0. 04308g/ml) 10ml，再加60%乙醇至刻度，搖勻，放置15min,以相應(yīng)試劑為空白，找紫外可見分光光度法(《藥典》05版附錄VA)，在506nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。求得的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y = 12. 785X-0. 001 R2 = 0. 9992。1.5樣品液的測定從供試品溶液中精密移取細(xì)1于1支25ml容量瓶中，然后用60%乙醇溶液稀釋至
7.0ml，然后按照對照品溶液的顯色方法顯色。精密量取60%乙醇細(xì)1，作為空白對照，后續(xù)顯色處理同上述對照品。在506nm處測定吸光度A，由標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計算總黃酮含量。2、鐘花報春花總黃酮提取方法考察2. 1單因素方法考察本實驗以不同乙醇濃度為考察因素，以鐘花報春花總黃酮得率為考察指標(biāo)，篩選鐘花報春花總黃酮的最佳提取工藝條件。2. 1. 1儀器與材料(1)儀器與試藥UV-2500 型紫外-可見分光光度計 PerkinElmer Lambda 35UV/VIS Spectrometer ；熱回流裝置，超聲儀，R-201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海申順生物科技有限公司)， DZF-6021型真空干燥箱(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)，瑞士 PAG-160A電子天平，F(xiàn)Al 104 電子天平(上海精天電子儀器廠)，電子恒溫不銹鋼水浴鍋(上海宏興機械儀器實業(yè)制造公司)，DGG-9140B電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海森信實驗儀器有限公司)，SHE-III循環(huán)水真空泵(上海亞榮生化儀器廠)，蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號為10080-200707)，95%乙醇，90%乙醇，80%乙醇，70%乙醇，60%乙醇，5%亞硝酸鈉溶液； 10%硝酸鋁溶液；4. 3%氫氧化鈉溶液以上試劑均為分析純。實驗用水系重蒸水。(2)實驗藥材鐘花報春花由重慶中藥研究所涂永勤博士鑒定為鐘花報春!Simula sikkimensis Hook 的干燥花。
將各自合并的濾液分別減壓濃縮(旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮是的水浴溫度為50°C )到一定程度，然后轉(zhuǎn)移至相應(yīng)的蒸發(fā)皿中，60°C水浴揮干，然后將含浸膏的蒸發(fā)皿置減壓干燥器中 60°C減壓干燥過夜。含浸膏的蒸發(fā)皿經(jīng)壓干燥后，精密稱定各含膏蒸發(fā)皿總重，結(jié)果如下表所示表權(quán)利要求
1.鐘花報春花總黃酮在制備預(yù)防或/和治療心肌缺血的保健品或/和藥物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于所述保健品或/和藥物是預(yù)防或/和治療急性心肌缺血的保健品或/和藥物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于所述保健品或/和藥物是保護(hù)缺血心肌細(xì)胞的保健品或/和藥物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項所述的用途，其特征在于鐘花報春花總黃酮中，黃酮的含量以蘆丁計不得低于50% w/w。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于鐘花報春花總黃酮中，黃酮的含量以蘆丁計為 50-60% w/w。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任意一項所述的用途，其特征在于所述的鐘花報春花總黃酮來源于報春花科報春花屬植物鐘花報春!Simula sikkimensis Hook的花的提取物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任意一項所述的用途，其特征在于鐘花報春花總黃酮是通過如下方法制備的(1)取鐘花報春花，以50-95%V/V乙醇提取，合并提取液備用；(2)將步驟(1)中的提取液回收乙醇后，用正丁醇萃取，將正丁醇層回收正丁醇后，上大孔吸附樹脂，先用水洗脫至不發(fā)生三氯化鐵反應(yīng)和鹽酸鎂粉反應(yīng)，再用30% -95%的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收溶劑后，干燥，即得鐘花報春總黃酮。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于步驟⑴中采用50-70%V/V乙醇提??； 步驟O)中選用30-40% V/V乙醇進(jìn)行洗脫。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于步驟⑴中采用60%V/V乙醇提取；步驟 ⑵中選用30% V/V乙醇進(jìn)行洗脫。
10.一種預(yù)防或/和治療心肌缺血的保健品或/和藥物組合物，其特征在于它是由鐘花報春花總黃酮為活性成分，加上藥學(xué)上常用的輔料或輔助性成分制備而成的制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了鐘花報春花總黃酮在制備治療心肌缺血的藥物中的用途。本發(fā)明還公開了一種治療心肌缺血的藥物組合物。鐘花報春花總黃酮可以降低心電ST段的偏移和血清LDH、CK含量，能夠有效預(yù)防或/和治療急性心肌缺血，保護(hù)缺血心肌細(xì)胞，其抗心肌缺血作用顯著，為臨床用藥提供了新的選擇。
文檔編號A61P9/10GK102423326SQ201110428899
公開日2012年4月25日 申請日期2011年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月20日
發(fā)明者彭騰, 李鴻翔, 賀鋼民, 鄧赟, 邱建平 申請人:成都中醫(yī)藥大學(xué)