專利名稱：：治療呼吸系統(tǒng)疾病的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于治療呼吸系統(tǒng)疾病的藥物組合物及其制備方法，具體為主要源于植物藥的具有治療和預(yù)防呼吸系統(tǒng)感染作用的藥物組合物及其可工業(yè)上應(yīng)用的制備方法。技術(shù)背景呼吸系統(tǒng)病毒感染的臨床表現(xiàn)主要為發(fā)熱，頭痛、身痛，咽喉腫痛、咳喘、肺部感染等上、中、下呼吸道炎癥，因而理想的治療呼吸系統(tǒng)病毒感染的藥物應(yīng)該同時(shí)具有解熱、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗菌和抗病毒的作用。已有抗呼吸道病毒作用的專利(申請(qǐng))中CN03100188.2沒有抗炎、鎮(zhèn)痛作用，其抗病毒譜較窄，只抗流感病毒甲、乙型；CN00100617.7沒有具體的抗病毒藥理實(shí)驗(yàn)依據(jù)，僅有幾例臨床治療病例，而且這些病例缺少支持，所治病例沒有病毒感染的診斷學(xué)依據(jù)，沒有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持，所治病例，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)處理；CN03118301.8中僅提出具有"抗病毒"作用，沒有公開具體抗哪些病毒；CN02128077.0的說(shuō)明書中僅有組方、制法，沒有公開抗病毒藥效學(xué)數(shù)據(jù)，"中藥不傳之秘在于量"，量的規(guī)律是組方的基本規(guī)律之一，在不同的量變規(guī)律指導(dǎo)下，幾百味常用中藥，可以演變出數(shù)千萬(wàn)首湯方，而該專利的申請(qǐng)說(shuō)明中恰恰沒有提到組方的計(jì)量問(wèn)題；CN03113857.8專利說(shuō)明書第4頁(yè)記載其"對(duì)流感病毒感染的小鼠肺病變與肺指數(shù)沒有表現(xiàn)出明顯的作用，體外對(duì)呼吸系統(tǒng)10株致病菌作用不明顯"；CN94115927.2主要用于風(fēng)寒感冒，未提到抗病毒的藥理作用；CN01129177.X僅具有解熱、抗炎作用CN96110520.8的說(shuō)明書第3頁(yè)僅提及"長(zhǎng)于抗流感病毒"，但未見具體的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持。橙皮苷(Hesperidin)，異名陳皮甙、桔皮甙。物化性質(zhì)白色或淺黃色粉末。幾乎不溶于水，微溶于甲醇，易溶于稀堿液和吡啶；6(TC時(shí)溶于甲酰胺和二甲基甲酰胺；微溶于甲醇、熱冰乙酸。橙皮苷可源于陳皮、蕓香科植物化州橘C/z^asre"c^ateBlanco及其栽培變種的干燥成熟果實(shí)]、青皮[蕓香科植物化州橘。'^7/sre"c^ateBlanco及其栽培變種的干燥幼果或未成熟果實(shí)的果皮]、枳實(shí)[蕓香科植物酸橙a"i"a/7"鵬L.及其栽培變種或甜橙0'tr^w'/7e/7^'s0sbeck的干燥幼果]、枳殼[蕓香科植物酸橙。'tnw犯/v3/2"咖L.及其栽培變種或甜橙si;e;7W、0sbeck的干燥果皮]、化橘紅[蕓香科植物化州柚"fi"〃s^ra/70^'Tomentosa'或柚。.加s^r朋必s(L.)0sbeck的未成熟或近成熟的干燥外層果，茜草科植物栗豬殃殃地上部分，蕓香科植物佛手果實(shí)、蕉柑果實(shí)、枸橘果實(shí)、檸檬果實(shí)、藜檬果皮、枸櫞成熟果實(shí)等藥材和植物中。橙皮苷是3-羥基-3-甲基戊二?；鵆oA(HMG-CoA)還原酶抑制劑，可以降低毛細(xì)血管的脆性及通透性，用于高血壓病及毛細(xì)血管出血性疾患的輔助治療。射干苷(Tectoridin)源于鳶尾科鳶尾屬植物鳶尾i^'s^c&r鵬Maxim.鳶尾科植物鳶尾的干燥莖根，射干[為鳶尾科植物射干"eJa/zcs"血C力/77MW^(L.)DC.的干燥根莖]中也含有射干苷。功能是清熱解毒、消痰利咽、消積，用于咽喉腫痛、痰咳氣喘等癥。川射干中總異黃酮較藥典其他射干品種高，射干苷是其中的一個(gè)主要活性成分。黃芩苷(Baicalin)源于黃芩。黃芩是唇形科植物黃芩5"c"eL^ris力a/^7朋WsGeorgi的干燥根。藥理作用具有抗病原微生物，增強(qiáng)機(jī)體免疫力、解熱、鎮(zhèn)靜、降壓、降血脂、保肝利膽及解痙、抗氧化等多種作用。用于濕溫、暑濕胸悶嘔惡、濕熱痞滿，瀉痢，黃疽，肺熱咳嗽，高熱煩渴，癰腫瘡毒，胎動(dòng)不安。葛根素(puerarin)源于野葛。野葛為豆科植物野葛尸"eran'a7otete(Willd.)0hwi的干燥根。葛根[豆科植物葛Puerarialobata(Willd.)Ohwi根]中也含有葛根素。葛根中含多種黃酮類成份，主要活性成份為大豆素(daidzein)、大豆甙(daidzin)、葛根素(puerarin)、葛根素-7-木糖甙(puerarin-7-xyloside)等。葛根素有心血管作用(擴(kuò)張血管)、受體阻斷效應(yīng)、抗心律失常、治療高血壓和心絞痛。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是篩選研究治療和預(yù)防呼吸道病毒感染的藥物組合物，具體為同時(shí)具有確切的抗病毒、抗菌、解熱、抗炎、鎮(zhèn)痛作用的主要源于植物藥的藥物組合物。本發(fā)明還要研究該藥物組合物適于工業(yè)化應(yīng)用的制備工藝。為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供技術(shù)方案如下一種治療呼吸系統(tǒng)感染的藥物組合物，該藥物組合物的藥效原料按重量計(jì)為橙皮苷1-4份、黃芩苷2-8份、葛根素l-4份、射干苷1-6份。優(yōu)選該藥物組合物的藥效原料按重量計(jì)為橙皮苷2-3份、黃芩苷3-4份、葛根素2-3份、射干苷2-3份。一種治療呼吸系統(tǒng)感染的藥物組合物，該藥物組合物的藥效原料按重量計(jì)為橙皮苷提取物l-4份、黃芩苷提取物2-8份、葛根素提取物l-4份、射干苷提取物I-6份；橙皮苷提取物中橙皮苷含量10-卯％,黃芩苷提取物中黃芩苷含量10-卯％，葛根素提取物中葛根素含量5-20%，射干苷提取物中射干苷含量10-90%。優(yōu)選該藥物組合物的藥效原料按重量計(jì)為橙皮苷提取物2-3份、黃芩苷提取物3-4份、葛根素提取物2-3份、射干苷提取物2-3份；橙皮苷提取物中橙皮苷含量50-65%，黃芩苷提取物中黃芩苷含量50-85%，葛根素提取物中葛根素含量10-15%,射干苷提取物中射干苷含量50-70%。一種治療呼吸系統(tǒng)感染的藥物組合物，該藥物組合物的藥效原料按重量計(jì)為含橙皮苷的植物l-4份、黃芩2-8份、含葛根素的植物l-4份、含射干苷的植物l-6份；優(yōu)選含橙皮苷的植物2-3份、黃芩3-4份、含葛根素的植物2-3份、含射干苷的植物2-3份；含橙皮苷的植物選自陳皮、青皮、枳實(shí)、枳殼、化橘紅、蕓香科植物佛手果實(shí)、蕉柑果實(shí)、枸橘果實(shí)、檸檬果實(shí)、藜檬果皮、枸櫞成熟果實(shí)、蘆柑皮和蘆柑皮渣中的一種或幾種混合物；含葛根素的植物選自野葛和/或葛根，含射干苷的植物選自鳶尾和/或射干。一種治療呼吸系統(tǒng)感染的藥物組合物的制備方法，包括如下步驟取藥效原料蘆柑皮或戸柑皮渣、鳶尾、黃芩、野葛；用水和/或乙醇作溶劑，加熱提取上述藥效原料，得提取液；將提取液濃縮后，得濃縮物，向該濃縮物中加入水，濾取沉淀物。所述藥物組合物的制備方法，包括用50-80%乙醇分別提取上述藥效原料，得提取液;分別濃縮提取液后，得到相應(yīng)濃縮物，分別向這些濃縮物中加水，分別濾取沉淀物，干燥沉淀物，得到粗制的橙皮苷提取物、黃芩苷提取物、葛根素提取物和射干苷提取物；該橙皮苷提取物中橙皮苷含量不低于10%，黃芩苷提取物中黃芩苷含量不低于10%，葛根素提取物中葛根素含量不低于5%，射干苷提取物中射干苷含量不低于10%。所述藥物組合物的制備方法，優(yōu)選用60-70%乙醇分別提取上述藥效原料；所述粗制的橙皮苷提取物、黃芩苷提取物和射干苷提取物可用常規(guī)加堿溶解、加酸沉淀方法精制；橙皮苷提取物中橙皮苷含量20-90%，黃芩苷提取物中黃芩苷含量20-90%，葛根素提取物中葛根素含量10-20%，射干苷提取物中射干苷含量20-90%;按重量計(jì)稱取橙皮苷提取物1-4份、黃芩苷提取物2-8份、葛根素提取物l-4份、射干苷提取物l-6份，與藥學(xué)上可接受輔料或載體混合。所述藥物組合物的制備方法中，橙皮苷提取物的精制方法是取粗制的橙皮苷提取物加入含2。/。NaOH的5(T/。乙醇溶解，過(guò)濾，將濾液加鹽酸調(diào)PH至7左右，靜置24h后，濾取沉淀，干燥；黃芩苷提取物的精制方法是取粗制的黃芩苷提取物加相當(dāng)于藥材3倍體積的水分散均勻，用40^NaOH調(diào)節(jié)PH7左右，用加入等體積的95%乙醇攪拌使溶解，靜置12h，濾過(guò)，濾液用鹽酸調(diào)節(jié)PH2左右，60'C保溫60min，靜置24h后，濾取沉淀，先用稀乙醇洗滌沉淀，再用水洗滌沉淀至中性，減壓干燥；射干苷提取物的精制方法是將60-70%乙醇提取液濃縮后，加入水，用鹽酸調(diào)PH到12，靜置10小時(shí)后，濾取沉淀；于酸水液加入2%NaOH液調(diào)到PH至8~9，繼續(xù)濃縮，濃縮到原體積的1/2，然后加鹽酸調(diào)PH到12，靜置10小時(shí)后，濾取沉淀；合并兩次沉淀物，然后用抽濾漏斗將沉淀抽干，得射干苷的粗提物，向射干苷粗提物中加入無(wú)水乙醇(藥材重量g:乙醇體積mH7:10)，攪拌均勻后，濾取沉淀物，干燥。所述藥物組合物的最優(yōu)選制備方法，其中按重量計(jì)稱取橙皮苷提取物2-3份、黃芩苷提取物3-4份、葛根素提取物2-3份、射干苷提取物2-3份:橙皮苷提取物中橙皮苷含量50-65%，黃苳苷提取物中黃芩苷含量50-85%，葛根素提取物中葛根素含量10-15%，射干苷提取物中射干苷含量50-70%，與口服制劑輔料混合，制成膠囊劑、分散片、普通片、顆粒劑、口服液。一種治療呼吸系統(tǒng)感染的藥物組合物，該藥物組合物的藥效原料按重量計(jì)為含橙皮苷的原料l-4份、含黃芩苷的原料2-8份、含葛根素的原料l-4份、含射干苷的原料l-6份;含橙皮苷的原料中橙皮苷含量不低于10%,含黃芩苷的原料中黃芩苷含量不低于10%,含葛根素的原料中葛根素含量不低于5%，含射干苷的原料中射干苷含量不低于10%。優(yōu)選含橙皮苷的原料中橙皮苷含量10-90%，含黃芩苷的原料中黃芩苷含量10-90%,含葛根素的原料中葛根素含量5-20%，含射干苷的原料中射干苷含量10-90%。更優(yōu)選該藥物組合物的藥效原料按重量計(jì)為含橙皮苷的原料2-3份、含黃芩苷的原料3-4份、含葛根素的原料2-3份、含射干苷的原料2-3份；含橙皮苷的原料中橙皮苷含量50-65%，含黃芩苷的原料中黃芩苷含量50-85%,含葛根素的原料中葛根素含量10-15%，含射干苷的原料中射干苷含量50-70%。所述原料選自①含相應(yīng)有效成分的植物，或者②有效成分(單體化合物)，或者③含有效成分的提取物(植物的有效部位)。即含橙皮苷的原料包括含橙皮苷的植物、橙皮苷提取物或橙皮苷；含橙皮苷的植物選自蘆柑皮(包括蘆柑皮渣)、陳皮、青皮、枳實(shí)、枳殼、化橘紅、蕓香科植物佛手果實(shí)、蕉柑果實(shí)、枸橘果實(shí)、檸檬果實(shí)、藜檬果皮和枸櫞成熟果實(shí)中的一種或幾種混合物；含黃芩苷的原料包括黃芩、黃芩提取物和黃芩苷；含葛根素的原料包括野葛或葛根、葛根素提取物和葛根素；含射干苷的原料包括鳶尾或射干、射干苷提取物和射干苷。本發(fā)明藥物組合物包括①橙皮苷、黃芩、葛根素和射干苷組成的混合物；②橙皮苷提取物、黃芩苷提取物、葛根素提取物和射干苷提取物組成的混合物(即四個(gè)提取物的混合物，簡(jiǎn)稱"CYHG藥物"，"提取物"即"有效部位"或簡(jiǎn)稱"部位")；③含橙皮苷的植物、黃芩、含葛根素的植物和含射干苷的植物組成的混合物以及④本發(fā)明所述提取物與原料藥粉末和/或有效成分組成的混合物，例如可用橙皮苷提取物與黃芩苷、射干苷及葛根粉末組成的藥物組合物。所述含橙皮苷的植物有蘆柑皮(包括蘆柑皮渣)、陳皮、青皮、枳實(shí)、枳殼、化橘紅、蕓香科植物佛手果實(shí)、蕉柑果實(shí)、枸橘果實(shí)、檸檬果實(shí)、藜檬果皮和枸櫞成熟果實(shí)；含葛根素的植物是葛根和野葛；含射干苷的植物有鳶尾和射干；含黃芩苷的植物有黃芩。優(yōu)選蘆柑皮、黃芩、野葛和鳶尾組成的混合物。更優(yōu)選蘆柑皮中的橙皮苷提取物、黃芩中的黃芩苷提取物、野葛中葛根素提取物和鳶尾中射干苷提取物組成的藥物組合物。本發(fā)明藥物組合物的抗病毒譜和藥效作用強(qiáng)度優(yōu)于目前市場(chǎng)具有抗病毒優(yōu)勢(shì)的的雙黃連口服液。本發(fā)明包括研究該藥物組合物組方中起到核心和關(guān)鍵作用的"CYHG藥物"。CYHG藥物是組方藥材中相應(yīng)的活性部位提取物的組合物，相對(duì)于目前的抗呼吸道病毒感染的藥物有以下特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)用量小、抗病毒譜廣、藥效作用強(qiáng)(強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照藥雙黃連口服液)、低毒等特點(diǎn)。含橙皮苷的中藥傳統(tǒng)用于理氣化痰，現(xiàn)代研究表明^f心腦血管疾病有輔助治療作用，而本發(fā)明發(fā)現(xiàn)用橙皮苷、含橙皮苷的部位以及含橙皮苷的植物(尤其是蘆柑皮或蘆柑皮渣)可有效地治療病毒性感染的呼吸系統(tǒng)疾病。CYHG藥物中，優(yōu)選蘆柑皮、盧柑皮渣作為原料提取橙皮苷提取物。蘆柑皮屬于可循環(huán)再生資源(每年收獲蘆柑果實(shí)，必然可以回收到蘆柑皮，不破壞資源、不耗費(fèi)資源、該資源可以循環(huán)再生，以蘆柑皮為原料開發(fā)的產(chǎn)品，有可持續(xù)發(fā)展性)。蘆柑(全果，連皮)榨汁之后產(chǎn)生的蘆柑皮渣，原本是農(nóng)副產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程中的廢料。本發(fā)明用蘆柑皮(可循環(huán)再生資源)、蘆柑皮搾(廢物利用)作為提取橙皮苷有效部位的原料，屬于開發(fā)可循環(huán)再生資源和廢物利用。本發(fā)明用蘆柑皮、蘆柑皮渣作原料開發(fā)出來(lái)的新藥產(chǎn)品，顯著降低了生產(chǎn)成本，有可持續(xù)發(fā)展性。本發(fā)明提取有效部位的全部工藝中，不用柱層析分離，不用正丁醇萃取，完全用水和/乙醇作溶劑提取，通過(guò)調(diào)節(jié)酸堿性，得到富集有效成分的有效部位。工藝簡(jiǎn)單，安全，成本較低，利于工業(yè)化生產(chǎn)。具體實(shí)施方式第一部分一組方篩選研究實(shí)驗(yàn)l.組方研究的因素水平的確定我們選擇橙皮苷部位、射干苷部位、葛根素部位、黃芩苷部位(是四個(gè)部位的混合物。橙皮苷部位、射干苷部位、黃芩苷部位、葛根素部位各分別按實(shí)施例一l、2、3、4制備。見實(shí)施例一'制法1)。本發(fā)明進(jìn)行了二輪組方篩選研究正交實(shí)驗(yàn)。第一輪初步確定較好組方范圍，第二輪確定了最優(yōu)組方。下面列出最優(yōu)組方篩選實(shí)驗(yàn)的具體步驟與實(shí)驗(yàn)結(jié)果。表h各組方篩選的因素水平表<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>2.組方篩選研究的1-9組L9(34)正交工作安排表表2:組方篩選1-9組L9(34)正交工作安排表<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>3.組方篩選研究的實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果(1).l-9組的組方藥物的制備按表2的規(guī)定的量，稱取由橙皮苷部位、射干苷部位、葛根素部位、黃芩苷部位4個(gè)部位組成的1-9組的組方藥物；分別配制成濃度為10mg/ml的水溶液。(2).小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性抗炎實(shí)驗(yàn)取2024g健康雄性小鼠110只隨機(jī)分為11組，分別給予1-9組的組方藥物，給藥的劑量均為0.20g/kg(每20g小鼠給藥0.4ml);陽(yáng)性對(duì)照組雙黃連口服液7.5ml/kg(相當(dāng)于11.25g生藥/kg);空白對(duì)照組給予等容量生理鹽水；連續(xù)給藥6d,ig給藥。在末次給藥lh后，各鼠均靜注0.5%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液0.1ml/10g，隨即腹腔注射0.6%醋酸0.20ml/只，20min后頸椎脫位處死小鼠，用6ml生理鹽水分三次洗滌腹腔，吸出洗滌^^，合并后用入生理鹽水定容至10ml。定容液于3000轉(zhuǎn)離心15min，取上清液，于5卯nm處比色測(cè)定光密度，結(jié)果填入表l。(3).實(shí)驗(yàn)結(jié)果將各組實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值代入表2，進(jìn)行極差分析。二輪組方篩選研究表明優(yōu)選組方是按重量計(jì)橙皮苷部位l-4份、黃芩苷部位2-8份、葛根素部位l-4份、射干苷部位l-6份；最優(yōu)組方是按重量計(jì)橙皮苷部位2份、射干苷部位3份、黃芩苷部位4份、葛根素部位2份。.二.最佳組方與藥材組方、純品組方、單一的橙皮苷部位、射干苷部位、葛根素部位、黃芩苷部位比較實(shí)驗(yàn)1.實(shí)驗(yàn)樣品藥液的制備最佳組合即為CYHG藥物(見實(shí)施例一制法制備CYHG藥物，再制備成10mg/ml的水溶液，即為CYHG藥物組樣品液)；藥材組方組[分別取蘆柑皮2份、鳶尾3份、黃芩4份、野葛2份，加入藥物重量10倍量、8倍量、8倍量的水(w/v)，分別直火煎煮l小時(shí)、40分鐘、30分鐘，分別得到三次煎煮液，合并，減壓濃縮至小體積，以水定容為0.5g/ml的水溶液，即為藥材組方組樣品液];純品組方組即為CYHG純品-混合物(見實(shí)施例二制備CYHG純品-混合物，再制備成10mg/ml的水溶液，即為CYHG純品-混合物組樣品液)；橙皮苷部位(實(shí)施例一1制備橙皮苷部位，再制備成10mg/ml的水溶液，即為橙皮苷部位組樣品液)；射干苷部位(實(shí)施例一2制備射干苷部位，再制備成10mg/ml的水溶液，即為射干苷部位組樣品液)；葛根素部位(實(shí)施例一3制備葛根素部位，再制備成10mg/ml的水溶液，即為葛根素部位組樣品液)；黃芩苷部位(實(shí)施例一4制備黃芩苷部位，再制備成10mg/ml的水溶液，即為黃芩苷部位組樣品液)。2.小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性抗炎實(shí)驗(yàn)取2024g健康雄性小鼠90只隨機(jī)分為.9組，分別給予l-9組的組方藥物，給藥的劑量均為0.20g/kg(每20g小鼠給藥0.4ml);陽(yáng)性對(duì)照組雙黃連口服液7.5ml/kg(相當(dāng)于II.25g生藥/kg);空白對(duì)照組給予等容量生理鹽水；連續(xù)給藥6d,ig給藥。具體方法見組方篩選研究實(shí)驗(yàn)的3.2項(xiàng)下。3.小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性抗炎實(shí)驗(yàn)結(jié)果具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。表2.各組藥物對(duì)腹腔注射醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的比較研究(X土SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注各用藥組與空白對(duì)照組比較*P<0.05**P<0.014.結(jié)論CYHG藥物、藥材組方組、純品組方組、橙皮苷部位、射干苷部位、黃芩苷部位、陽(yáng)性對(duì)照組與空白對(duì)照組比較均具有抗炎的顯著作用(*P<0.05**P<0.01);其中CYHG藥物作用最強(qiáng)，明顯優(yōu)于單獨(dú)的各個(gè)部位。第二部分-藥效學(xué)及毒性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)材料l.試藥.(1).CYHG藥物(是四個(gè)部位的混合物。橙皮苷部位、射干苷部位、黃芩苷部位、葛根素部位各分別按實(shí)施例一l、2、3、4制備。見實(shí)施例一"制法l)。(2).CYHG膠囊(見實(shí)施例一.制法2)。(3).CYHG純品-混合物(分別稱取橙皮苷2g、射干苷3g、黃芩苷4g、葛根素2g，混合均勻后，即為CYHG純品-混合物。其中葛根素(含量90%-95%,陜西天潤(rùn)植物化工有限公司提供)；射干苷(按本發(fā)明提取分離方法，反復(fù)精制純化，用HPLC測(cè)定，用中國(guó)藥品生物制品檢定所的標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，用歸一劃法計(jì)算純度達(dá)95%)，黃芩苷(含量90%,惠州東方植物保健科技有限公司提供)；橙皮苷(購(gòu)于南京青澤醫(yī)藥科技開發(fā)有限公司)。見實(shí)施例二。(4).CYHG純品-膠囊(見實(shí)施例三)。2.陽(yáng)性對(duì)照藥雙黃連口服液來(lái)源河南太龍藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)06051201規(guī)格10mlxl0支/盒；功能主治清熱解毒，祛痰止咳。用于上呼吸道感染。用法用量口服，一次2支，一日3次。3.實(shí)驗(yàn)試劑(1)冰醋酸來(lái)源南京市化工試劑廠批號(hào)020821規(guī)格500ml/瓶。(2)酵母來(lái)源湖北安琪酵母股份有限公司，批號(hào)0607042規(guī)格100g/瓶。4.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(1)昆明種小鼠體重1826g,雌雄兼用，SPF級(jí)，來(lái)源于南通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,合格證號(hào)SCXK(蘇)2003—0002。(2)SD雄性大鼠，體重200~240g，SPF級(jí)，來(lái)源于南通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,合格證號(hào)—SCXK(蘇)2003—0002。5.儀器722分光光度計(jì)，離心機(jī)，大鼠肛溫計(jì)，秒表，精密電子天平。(一)抗炎試驗(yàn)小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性實(shí)驗(yàn)取2024g健康雄性小鼠50只隨機(jī)分為5組，分別是CYHG藥物高劑量組0.25g/kg(相當(dāng)于生藥3.7088g/kg)，(此處0.25g是CYHG藥物，是四個(gè)部位混合物，按實(shí)施例一項(xiàng)下制法1制備)。CYHG藥物中劑量組0.20g/kg(相當(dāng)于生藥2.967g/kg)，CYHG藥物低劑量組0.15g/kg(相當(dāng)于生藥2.225g/kg),陽(yáng)性對(duì)照組雙黃連口服液7.5ml/kg(相當(dāng)于11.25g生藥/kg)，空白對(duì)照組給予等容量生理鹽水，連續(xù)給藥6d，ig給藥。在末次給藥lh后，各鼠均靜注0.5%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液0.1ml/1Og，隨即腹腔注射0.6%醋酸0.20ml/只，20min后頸椎脫位處死小鼠，用6ml生理鹽水分三次洗滌腹腔，吸出洗滌液，合并后用入生理鹽水定容至10ml。定容液于3000轉(zhuǎn)離心15min,取上清液，于590mn處比色測(cè)定光密度，以平均光密度值做t檢驗(yàn)。結(jié)果見表4。表4.對(duì)腹腔注射醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響(X士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注各用藥組與空白對(duì)照組比較*P<0.05**P<0.01實(shí)驗(yàn)結(jié)果CYHG藥物各劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組與空白對(duì)照組組間t檢驗(yàn)，CYHG藥物各劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組與空白對(duì)照組組間差異有顯著意義，檢驗(yàn)結(jié)果分別為P〈0.05，P〈0.01?？寡讓?shí)驗(yàn)結(jié)論與雙黃連口服液對(duì)照組比較，CYHG藥物組給藥劑量小、抗炎用強(qiáng)。(二)止痛試驗(yàn)小鼠醋酸扭體法取2024g健康雄性小鼠50只隨機(jī)分為5組，分別是CYHG藥物高劑量組0.25g/kg(相當(dāng)于生藥3.7088g/kg)，(此處0.25g是CYHG藥物，是四個(gè)部位混合物，按實(shí)施例一項(xiàng)下制法1制備)。CYHG藥物中劑量組0.20g/kg(相當(dāng)于生藥2.967g/kg)，CYHG藥物低劑量組0.15g/kg(相當(dāng)于生藥2.225g/kg),陽(yáng)性對(duì)照組雙黃連口服液7.5ml/kg(相當(dāng)于11.25g生藥/kg，空白對(duì)照組給予等容量生理鹽水，連續(xù)給藥6d，ig給藥。末次給藥0.5h后腹腔注射0.6%醋酸0.21111/只。觀察20min內(nèi)各鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)次數(shù)，結(jié)果見表5。表5.CYHG藥物、雙黃連口服液對(duì)小鼠醋酸反應(yīng)次數(shù)的影響(X±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注各用藥組與空白對(duì)照組比較*P<0.05**P<0.01實(shí)驗(yàn)結(jié)果CYHG藥物各劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組與空白對(duì)照組組間用t檢驗(yàn)，CYHG藥物各劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組與空白對(duì)照組組間差異有顯著意義，結(jié)果分別為P〈0.05，P<0.01。鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)結(jié)論與雙黃連口服液對(duì)照組比較，CYHG藥物組給藥劑量小、鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)。(三)解熱試驗(yàn)酵母法取體重150200g，雌雄各半大鼠，用體溫計(jì)間隔lh測(cè)直腸體溫兩次，以平均值作為基礎(chǔ)體溫。選取體溫變化不超過(guò)0.3'C者50只，將其隨機(jī)分為5組，每組10只。即CYHG藥物高劑量組0.20g/kg(相當(dāng)于生藥2.967g/kg)，CYHG藥物中劑量組0.15g/kg(相當(dāng)于生藥2.22528&8),CYHG藥物低劑量組0.1g/kg(相當(dāng)于生藥1.4835g/kg)，陽(yáng)性對(duì)照組雙黃連口服液12ml/kg，空白對(duì)照組給予等容量生理鹽水。采用灌胃給藥，連續(xù)7d。末次給藥0.5h后各小鼠于背部皮下注射20%酵母混懸液10ml/kg，于第0.5、1、2、4、6、8、10及12h各測(cè)大鼠體溫l次。結(jié)果見表6。求出A'C值，并進(jìn)行T檢驗(yàn)。表6.CYHG藥物、雙黃連口服液對(duì)酵母致大鼠發(fā)熱的影響實(shí)驗(yàn)(X±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>注各用藥組ZVC與空白對(duì)照組厶'C比較*P<0.05**P<0.01實(shí)驗(yàn)結(jié)果CYHG藥物各劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組與空白對(duì)照組組間t檢驗(yàn)顯示，CYHG藥物高、中劑量組與空白對(duì)照組比較從致熱lh開始直到12h結(jié)束，有顯著的降溫作用,P〈0.05,P<0.01;低劑量組與空白對(duì)照組比較從致熱lh開始直到8h結(jié)束，有顯著的降溫作用P〈0.05，P<0.01。陽(yáng)性對(duì)照組從4h到8h都有降溫作用,P〈0.01,P〈0.05。解熱實(shí)驗(yàn)結(jié)論與雙黃連口服液對(duì)照組比較，CYHG藥物組給藥劑量小、起效快、持續(xù)藥效時(shí)間長(zhǎng)、解熱作用強(qiáng)。參考文獻(xiàn)《新藥審批辦法》國(guó)家藥品監(jiān)督局2002.12;《藥理實(shí)驗(yàn)方法》人民衛(wèi)生出版社，徐淑云2002，《中藥藥理研究方法學(xué)》人民衛(wèi)生出版社，陳奇1994，《新藥西藥臨床前指導(dǎo)原則》衛(wèi)生部藥監(jiān)局1993。(四)體外抑菌實(shí)驗(yàn)1.材料(1)藥物CYHG藥物(是四個(gè)部位混合物，按實(shí)施例一項(xiàng)下制法l制備)。(2)菌種試驗(yàn)所采用的菌株均為臨床分離株，由江蘇省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科和南京市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科提供并鑒定。(3)培養(yǎng)基MH培養(yǎng)基由北京三藥科技開發(fā)公司生產(chǎn)，肺炎鏈球菌采用血培養(yǎng)基，即在MH培養(yǎng)基中加入5%脫纖維羊血制成。2.方法(1)藥物配制準(zhǔn)確稱取一定量的CYHG藥物，加入到20ml滅菌生理鹽水中，攪拌20min使其溶解，配制成終濃度為10mg/ml的藥物溶液。用滅菌生理鹽水倍比稀釋上述藥物溶液，配制成下列濃度梯度，即10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125和0.15625mg/ml。(2)含藥物平板制備吸取1.5ml稀釋好的不同濃度的藥物置無(wú)菌平皿中，分別于每個(gè)平皿中加入恒溫于45"左右的滅菌MH培養(yǎng)基，混勻冷卻制成一系列藥物濃度梯度的藥物平板，即1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625mg/ml和0(空白對(duì)照)mg/ml。(3)菌懸液制備將冷凍保藏的菌株(甘油管)接種于新鮮瓊脂斜面培養(yǎng)基，37'C恒溫培養(yǎng)24小時(shí)，再分別接種于lml肉湯中，37'C恒溫培養(yǎng)12小時(shí)。肺炎鏈球菌的肉湯培養(yǎng)中含5%脫纖維羊血清。上述細(xì)菌培養(yǎng)液濃度約為108~109CFU/ml，分別用滅菌生理鹽水稀釋至107CFU/ml左右。采用多點(diǎn)接種儀將上述稀釋的菌懸液接種至不同濃度的藥物平板，接種量約為104105CFU/點(diǎn)。試驗(yàn)菌于37'C恒溫倒置培養(yǎng)16~18小時(shí)，觀察結(jié)果，并記錄MIC值。CYHG藥物對(duì)臨床致病菌的MIC值如表6所示。試驗(yàn)結(jié)果表明，CYHG藥物對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、綠膿桿菌、金黃色葡，球菌(ATCC25923)、大腸埃希菌(ATCC25922)、綠膿桿菌(ATCC27853)等具有一定的抑制作用。表7.CYHG膠囊內(nèi)容物對(duì)臨床致病菌的MIC值<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>抗菌實(shí)驗(yàn)結(jié)論CYHG藥物對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌(ATCC25923)、大腸埃希菌(ATCC25922)、綠膿桿菌(ATCC27853)等具有抑制作用。(五)體外抗病毒實(shí)驗(yàn)藥物CYHG藥物(是四個(gè)部位混合物，按實(shí)施例一項(xiàng)下"制法1"制備)。14.835g生藥/lg制劑，以蒸餾水配制成lg生藥/ml(67.4mg/ml)，隔水煮沸20分鐘滅菌用于體外抗病毒和抑菌試驗(yàn)。對(duì)照藥雙黃連口服液，1.5g生藥/ml(河南太龍藥業(yè)股份有限公司批號(hào)06051201),以蒸餾水配制成lg生藥/ml，隔水煮沸20分鐘滅菌，用于體外抗病毒和抑菌試驗(yàn)。病毒流感病毒甲3型(A3)、副流感病毒1型(HVJ)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒3型(ADV3)、腺病毒7型(ADV7)、單純皰疹病毒1型(HSV-1)，用于體外試驗(yàn)；流感病毒鼠肺適應(yīng)株FM1，用于體內(nèi)試驗(yàn)。均購(gòu)自中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒學(xué)研究所，本實(shí)驗(yàn)室傳代后保存于-6(TC冰箱備用。細(xì)胞人喉癌傳代細(xì)胞Hep-2株，購(gòu)自國(guó)家藥品生物制品檢定所。細(xì)胞培養(yǎng)液含10%小牛血清、0.29mg谷氨酰胺/ml、100u/ml青、鏈霉素的Eagle'sMEM(日本日水制藥株式會(huì)社出品)。.細(xì)胞維持液除所含小牛血清為2%外，其他含量均同培養(yǎng)液。細(xì)菌培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，批號(hào)060114，營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，批號(hào)060112，均由中國(guó)藥品生物制品檢定所監(jiān)制。儀器C02培養(yǎng)箱，日本Yamato科學(xué)株式會(huì)社生產(chǎn)。倒置顯微鏡，OLYMPUS牌。1、對(duì)Hep-2培養(yǎng)細(xì)胞的毒性試驗(yàn)試驗(yàn)方法按常規(guī)試驗(yàn)操作，將瓶中Hep-2細(xì)胞消化下來(lái)，接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，置37'C5XC02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天，長(zhǎng)成單層細(xì)胞后,進(jìn)行試驗(yàn)將培養(yǎng)板中的培養(yǎng)液傾去，將試藥以維持液連續(xù)2倍稀釋11個(gè)濃度，加入板中200p1/孔，每稀釋度加4孔，第12列不加藥液作正常細(xì)胞對(duì)照。將培養(yǎng)板置37°C5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天，每日用倒置顯微鏡觀察藥液對(duì)細(xì)胞的影響。若毒性為"1"及其以下"一"，則視為陰性，可認(rèn)為此濃度藥樣對(duì)細(xì)胞無(wú)中毒現(xiàn)象，其余的"2"及其以上各級(jí)，均視為陽(yáng)性，即所試藥樣在此濃度對(duì)細(xì)胞有中毒作用。利用Reed-Muench法計(jì)算50%毒性濃度(TC50)。按上述方法取得試驗(yàn)結(jié)果利用Reed-Muench法計(jì)算50%毒性濃度(TC50)如下CYHG藥物的TC50=6.80mg生藥/ml，TC0=1.74生藥mg/ml，雙黃連口服液的TC50二5.24mg生藥/ml，TC0=1.36mg生藥/ml。選擇對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)影響的最大無(wú)毒濃度TC0及其以下濃度作抗病毒試驗(yàn)。2、對(duì)病毒致細(xì)胞病變作用的影響實(shí)驗(yàn)方法取已長(zhǎng)成單層細(xì)胞的培養(yǎng)板，倒掉培養(yǎng)液，接種100TCID50的不同病毒液100ul于細(xì)胞孔，每一塊細(xì)胞板接種二種病毒(各加6列)，留第8行不接種病毒作正常細(xì)胞對(duì)照。置37'C5e/。C02培養(yǎng)箱中吸附2小時(shí)，倒掉病毒液，用不含小牛血清的Eagle's維持液洗細(xì)胞面l次后，加入從最大無(wú)毒濃度TC0起倍比稀釋5個(gè)濃度的藥液(15行)200u1/孔，各濃度加3孔。第6行加l/4TC50(0.714/4=0.197mg/ml)Ribavirin，第7行不加藥液作病毒對(duì)照，第8行為未感染未加藥的正常細(xì)胞對(duì)照。置37'C5^C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天，每日在倒置顯微鏡下鏡檢CPE進(jìn)展。根據(jù)以上細(xì)胞病變五級(jí)標(biāo)準(zhǔn)判斷，利用Reed-Muench法計(jì)算50°/。有效濃度(EC50),并求出治療指數(shù)(TI=TC50/EC50)，TI值越高，表明藥效作用越強(qiáng)。<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>注表中EC50單位為mg生藥/ml;EC50為50%有效濃度；TI為治療指數(shù)TI=TC50/EC50。第1次、第2次分別指第1次實(shí)驗(yàn)結(jié)果和第2次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的意思。實(shí)驗(yàn)結(jié)果按上述方法通過(guò)兩次試驗(yàn)結(jié)果表明，CYHG藥物對(duì)流感病毒甲3型(A3)、副流感病毒l型(HVJ)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒3型(ADV3)均顯示具有抑制作用，其中CYHG藥物對(duì)副流感病毒抑制作用較強(qiáng)。抗病毒實(shí)驗(yàn)結(jié)論CYHG藥物與對(duì)照藥雙黃連口服液對(duì)流感病毒甲3型(A3)、副流感病毒1型(HVJ〉、呼吸道合胞病毒(RSV)均顯示具有抑制作用；與對(duì)照藥雙黃連口服液比較，CYHG藥物對(duì)上述三種病毒的抑制作用強(qiáng)，治療指數(shù)(TI);對(duì)照藥雙黃連口服液對(duì)腺病毒3型(ADV3)沒有抑制作用，而CYHG藥物對(duì)腺病毒3型(ADV3)具有較強(qiáng)的抑制作用?？共《緦?shí)驗(yàn)結(jié)論CYHG藥物比對(duì)照藥雙黃連口服液的抗病毒譜寬、抑制病毒的治療指數(shù)高；尤其是對(duì)呼吸道重要的致病病毒腺病毒3型(ADV3)CYHG藥物具有獨(dú)特的藥效?？偟乃幮?shí)驗(yàn)結(jié)論CYHG膠囊具有抗呼吸系統(tǒng)流感病毒甲3型(A3)、副流感病毒l型(HVJ)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒3型(ADV3)作用，具有抗菌、消炎、解熱作用。其藥理作用優(yōu)于對(duì)照藥雙黃連口服液。(六)CYHG藥物的急性毒性實(shí)驗(yàn)(最大耐受量實(shí)驗(yàn))以CYHG藥物(按實(shí)施例一項(xiàng)下"制法1"制備)30%濃度，一日內(nèi)一次灌胃給藥，每次0.8ml/20g，劑量為12g/kg，沒有測(cè)出LD5。。故進(jìn)行最大耐受量實(shí)驗(yàn)以30%濃度的CYHG藥物，一日內(nèi)2次，灌胃給藥，每次0.8ml/20g,給藥后，觀察7日，記錄結(jié)果。最大給藥量為24gCYHG藥物/kg(相當(dāng)于356.04g組方生藥/kg),相當(dāng)于臨床人最高劑量(0.05g/kg)的480倍時(shí)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物未出現(xiàn)毒性反應(yīng)。目的觀察CYHG藥物一日內(nèi)2次灌胃給藥，所可能產(chǎn)生的毒性反應(yīng)，為臨床安全用藥提供參考依據(jù)。實(shí)驗(yàn)方法取體重19-21g昆明種小鼠20只，雌雄各10只。飼養(yǎng)2曰，實(shí)驗(yàn)前禁食8小時(shí)，不禁水，67。/。CYHG藥物，一日內(nèi)兩次灌胃給藥，每次0.8ml/20g，給予各鼠灌胃，藥后正常給水喂養(yǎng)，觀察7日內(nèi)小鼠死亡數(shù)目及各鼠有無(wú)行為活動(dòng)異常，皮毛、二便、飲食狀態(tài)等不佳表現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以CYHG藥物的最大體積(0.8ml/20g)、最高濃度(30%)，一日內(nèi)2次灌胃給藥，給藥后觀察7日，20只小鼠均狀態(tài)'良好，未出現(xiàn)任何不適現(xiàn)象，皮毛光亮、活動(dòng)正常、攝食正常、無(wú)腹瀉發(fā)生，測(cè)定結(jié)果，最大給藥量為24gCYHG藥物/kg(相當(dāng)于356.04g組方生藥/kg),相當(dāng)于臨床人最高劑量(0.05g/kg)的480倍(計(jì)算公式如下)。實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明藥物組合物即CYHG藥物毒性低微。最大給藥量倍數(shù)=(每只小鼠給藥量/小鼠平均體重)X(成人平均體重/成人每日用量)=(0.3X0.8X2/20)X(60000/3)=480(倍)第三部分實(shí)施例一處方:橙皮苷部位86.58g、射干苷部位129.87g、黃芩苷部位173.16g、葛根素部位86.58g。制法1:分別稱取上述處方量藥物部位(藥物部位的制備方法見本實(shí)施例下述1、2、3、4.)，混合均勻后，即為CYHG藥物。制法2:分別稱取上述處方量藥物部位(藥物部位的制備方法見本實(shí)施例下述l、2、3、4.)與淀粉適量，混合均勻后，常規(guī)濕法制粒，干燥，裝制成1000粒0號(hào)硬膠囊。制成CYHG膠囊。用法用量口服，一次l-2粒，一日3次。規(guī)格0.5g/粒。'1、橙皮苷部位(即橙皮苷提取物，全文同)提取工藝流程及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)橙皮苷部位提取工藝取蘆柑皮(或蘆柑皮渣)[蕓香科柑橘屬植物蘆柑Crtruschinensis(L.)0sbeck的成熟干燥外層果皮]適當(dāng)粉碎，用10倍量(70%的乙醇為水和乙醇v/v混合，全文同)，先浸泡lh后，于85'C水浴條件下回流連續(xù)提取藥材4次，每次l小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓回收乙醇至無(wú)醇味，并將提取物用適量蒸餾水(藥材總體積=1§:2ral)轉(zhuǎn)移至燒杯中，靜置過(guò)夜，抽濾，干燥(65°C、0.08Mpa)，得粗提物(母液反復(fù)3次沉淀粗提物，每次沉淀時(shí)都要將體積濃縮為原體積的1/2)。取粗提物加入含2%NaOH的50°/。乙醇溶解[粗提物與2%NaOH的50%乙醇比例關(guān)系為1:10(w/v)]，過(guò)濾，將濾液加鹽酸調(diào)PH至7，靜置24h待析出沉淀后抽濾，得純化物，65'C減壓真空干燥48h。研磨成粉，得純化物。橙皮苷部位質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)參照中國(guó)藥典2005版相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。HPLC色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)填充劑十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動(dòng)相甲醇-醋酸-水(35:4:61);檢測(cè)波長(zhǎng)283nm，柱溫30'C。對(duì)照品溶液精密稱取橙皮苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液。供試品溶液取純化物精密稱重3mg，置于10ml容量瓶中，以甲醇溶解并定容至刻度,得供試液樣品測(cè)定方法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20ul，注入液相色譜儀，測(cè)定。純化物中橙皮苷含量(w/w)為65%以上。橙皮苷部位的提取率得到橙皮苷部位5.5g/100g藥材?？捎藐惼?、青皮、枳實(shí)、枳殼、化橘紅、'蕓香科植物佛手果實(shí)、蕉柑果實(shí)、枸橘果實(shí)、擰檬果實(shí)、藜檬果皮或枸櫞成熟果實(shí)作原料，參照本發(fā)明上述方法提取橙皮苷部位，亦可參見其它文獻(xiàn)方法，如"微波法提取陳皮中橙皮苷"，孫秀利等；中藥材,2007年06期；"正交試驗(yàn)優(yōu)選枳實(shí)中橙皮苷提取工藝"，楊志學(xué)等；懷化醫(yī)專學(xué)報(bào)2007年01期。2、射干苷部位(即射干苷提取物，全文同)提取工藝流程及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)射干苷部位提取工藝取鳶尾(鳶尾科鳶尾屬植物鳶尾ir^te"or咖Maxim.的干燥莖根，)粗顆粒，加入70%醇提取了3次，每次2小時(shí)，每次分別加入IO、8、8倍量乙醇，85'C水浴回流提取，提取液用8層紗布自然過(guò)濾，合并三次提取液，水浴減壓濃縮至無(wú)醇味體(濃縮過(guò)程中可加入少量堿)，并將提取物用適量蒸餾水(藥材總體積-lg:2ml)轉(zhuǎn)移至燒杯中，用鹽酸調(diào)PH到12，靜置10小時(shí)，待沉淀完全后，分離得沉淀于酸水液加入2e/。NaOH液調(diào)到PI^89,繼續(xù)濃縮，濃縮到原體積的1/2，然后加鹽酸調(diào)PH到12,靜置10小時(shí)，待沉淀完全后，分離得沉淀；于酸水液加入2。/。NaOH液調(diào)至PH^9，繼續(xù)濃縮至原體積的1/2,然后加鹽酸調(diào)PH到1~2，靜置IO小時(shí)，待沉淀完全后，分離沉淀物，合并3次沉淀物，然后用抽濾漏斗將沉淀抽干，得射干苷的粗提物。將射干苷粗提物置于容器中，加入無(wú)水乙醇(藥材重量g:乙醇體積mH7:10),攪拌均勻后抽濾，取沉淀物，干燥，即得射干苷部位。射干苷部位質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID)測(cè)定。色譜條件色譜柱KromasilC18柱，150mmX4.6mm，5wn;流動(dòng)相流動(dòng)相水甲醇=80:20(Onin)-40:60(10nin)-20:80(30nin);流速lml/min;柱溫3(TC;檢測(cè)波長(zhǎng)266nm;按射干苷色譜峰計(jì)算，理論塔板數(shù)不低于2500。對(duì)照品溶液配制精密稱取射干苷標(biāo)準(zhǔn)品1.124mg至10ml容量瓶中，甲醇溶解后定容至刻度，為射千苷對(duì)照品溶液(0.1124mg/ml)。對(duì)照藥材溶液制備(按藥典)取鳶尾粉末過(guò)50目篩0.4992g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70M乙醇25ml,密塞超聲處理(50HZ)1小時(shí)，過(guò)濾后不經(jīng)過(guò)旋干直接定容到100ml容量瓶中，再?gòu)闹杏靡埔汗苻D(zhuǎn)移出2ml到10ml容量瓶中(1:500)，超聲，待測(cè)。供試品溶液的制備稱取0.75倍量無(wú)水乙醇洗得到的沉淀物干燥后，稱取27.4mg定容于25ml容量瓶中，超聲10分鐘，用移液管出2ml定容于10ml容量瓶中，超聲，微孔濾膜過(guò)濾后進(jìn)HPLC測(cè)定含量。測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20ul注入液相色譜儀,測(cè)定,即得。射干苷提取物中射干苷的含量(w/w)為70%。射干苷部位的提取率得到射干苷部位4g/100g藥材。3、黃芩苷部位(即黃芩苷提取物，全文同)提取工藝流程及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)黃芩苷部位提取工藝取黃芩(唇形科植物黃芩5b"te7Jaria6aicW朋s/sGeorgi的干燥根)分別加入I2倍、10倍、8倍60%乙醇提取3次，每次1.5小時(shí)。提取液減壓濃縮至藥材體積4g:5ml后，鹽酸調(diào)節(jié)PH2，8(TC保溫30min(可提高黃芩苷的含度)，取出，放置24h。抽濾，抽濾后所得沉淀，加相當(dāng)于藥材3倍體積的水分散均勻，用40%NaOH調(diào)節(jié)PH二7，用加入等體積的95%乙醇攪拌使溶解，靜置12h，濾過(guò)，濾液用鹽酸調(diào)節(jié)PH=2，6(TC保溫60min(可提高黃芩苷的含度，黃芩苷可以在這個(gè)溫度條件下析出沉淀，而雜質(zhì)在此溫度條件下保留在溶液中，而達(dá)到分離雜質(zhì)的目的)，靜置24h，抽濾，沉淀先用稀乙醇洗，再用水洗至中性，50'C減壓干燥，即得。所得黃芩提取物的含量平均百分率為87.81%,轉(zhuǎn)移率為72.77%。黃苳苷部位質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID)測(cè)定。色譜條件色譜柱KromasilC18柱，150mmX4.6mm，5um;流動(dòng)相甲醇水(0.4%磷酸)=47:53;流速lml/min;柱溫33°C;檢測(cè)波長(zhǎng)280nm;按黃芩苷色譜峰計(jì)算，理論塔板數(shù)不低于2500。樣品溶液制備，對(duì)照品及標(biāo)準(zhǔn)曲線制備精密稱取黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品3.3mg至50ml容量瓶中，甲醇溶解后定容至刻度，為黃芩苷對(duì)照品溶液(66ug/ml)。供試樣品溶液制備水煎煮精密稱取樣品9.3mg至25ml容量瓶中，用甲醇溶解后，定容至刻度，再?gòu)闹芯芪?ml至25ml容量瓶中，甲醇定容，從中吸取4ml至5ml量瓶中，甲醇定容，搖勻，0.45um微孔濾膜過(guò)濾后待測(cè)。進(jìn)樣20ul。乙醇提取精密稱取樣品9.3mg至25ml量瓶中，甲醇溶解后，定容至刻度，再?gòu)闹芯芪?ml至25ml容量瓶中，甲醇定容，搖勻，0.45mn微孔濾膜過(guò)濾后待測(cè)。進(jìn)樣20ul。樣品中黃芩苷的含量(w/w)為85%。黃芩苷部位的提取率得到黃芩苷部位8g/100g藥材。4、葛根素部位(即葛根素提取物，全文同)提取工藝流程及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)葛根素部位提取工藝將葛根(野葛，豆科植物野葛A/eraria7otete(Willd.)Ohwi的干燥根)適當(dāng)粉碎，分別用8倍量70%乙醇回流提取3次，每次1.5小時(shí)。將乙醇提取液減壓回收乙醇(607(TC，-0.08Mpa)，將提取濃縮液置減壓干燥器中，調(diào)節(jié)干燥溫度為60±5'C，真空度為-0.08MPa，干燥后，取出干燥物觀察其性狀，并粉碎成細(xì)粉，備用。葛根素部位質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用HPLC法對(duì)葛根提取物中的葛根素進(jìn)行含量測(cè)定。色譜條件以十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；以甲醇一水(25:75)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)250nm;理論板數(shù)按葛根素峰計(jì)算不得低于4000。供試品溶液的制備稱取葛根提取物約30mg，精密稱定，置50ml量瓶中，以30%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，過(guò)微孔濾膜，備用。對(duì)照品溶液的制備稱取葛根素對(duì)照品約2mg，精密稱定，置25ml量瓶中，以30%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；再精密吸取5ml置10ml量瓶中，以30%乙醇稀釋至刻度，搖勻，備用。測(cè)定法分別精密吸取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液各20ul注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。含量限量本品含葛根素(C21H2()09)不得少于10%(w/w)。葛根素部位的提取率得到葛根素部位4g/100g藥材。實(shí)施例二CYHG純品-混合物的制備處方橙皮苷2g、射干苷3g、黃芩苷4g、葛根素2g所用原料均為市購(gòu)，植物中提取的或化學(xué)合成的原料藥均可使用，含量不低于卯％;如果需要可按常規(guī)方法純化到90%以上，比如95%，制法分別稱取上述處方量藥物，混合均勾后，即為CYHG純品-混合物。實(shí)施例三CYHG純品-膠囊的制備處方橙皮苷86.58g、射干苷129.87g、黃芩苷173.16g、葛根素86.58g。制法分別稱取上述處方量藥物(組方藥物均系市場(chǎng)購(gòu)買)與淀粉適量，混合均勻后,常規(guī)濕法制粒，干燥，裝制成1000粒0號(hào)硬膠囊。制成CYHG純品-膠囊。用法用量口服，一次l-2粒，一日3次。規(guī)格0.5g/粒。實(shí)施例四處方橙皮苷部位20g、射干苷部位40g、黃芩苷部位40g、葛根素部位20g。制法分別稱取上述處方量藥物部位(藥物部位的制備方法參見實(shí)施例一下述1、2、3、4.)與淀粉適量，混合均勻后，常規(guī)濕法制粒，干燥，裝制成1000粒0號(hào)硬膠囊。實(shí)施例五處方橙皮苷部位30g、射干苷部位30g、黃芩苷部位40g、葛根素部位30g。制法分別稱取上述處方量藥物部位(藥物部位的制備方法參見實(shí)施例一下述1、2、3、4.)與淀粉適量，混合均勻后，常規(guī)濕法制粒，干燥，裝制成1000粒0號(hào)硬膠囊。實(shí)施例六處方橙皮苷部位20g、射干苷部位30g、黃芩苷部位40g、葛根素部位20g。橙皮苷提取物中橙皮苷含量70%,黃芩苷提取物中黃芩苷含量90%，葛根素提取物中葛根素含量20%，射干苷提取物中射干苷含量50%。制法分別稱取上述處方量藥物部位(藥物部位的制備方法參見實(shí)施例一下述1、2、3、4.)與淀粉適量，混合均勻后，常規(guī)濕法制粒，干燥，裝制成1000粒0號(hào)硬膠囊。實(shí)施例七處方橙皮苷部位40g、射干苷部位60g、黃芩苷部位80g、葛根素部位40g。橙皮苷提取物中橙皮苷含量65%,黃芩苷提取物中黃芩苷含量85%，葛根素提取物中葛根素含量10%，射干苷提取物中射干苷含量70%。制法分別稱取上述處方量藥物部位(藥物部位的制備方法參見實(shí)施例一下述1、2、3、4.)與淀粉適量，混合均勻后，常規(guī)濕法制粒，干燥，裝制成1000粒0號(hào)硬膠囊。實(shí)施例八處方橙皮苷部位10g、射干苷部位10g、黃芩苷部位20g、葛根素部位10g。橙皮苷提取物中橙皮苷含量50%，黃芩苷提取物中黃芩苷含量50%，葛根素提取物中葛根素含量10%，射干苷提取物中射干苷含量70%。制法分別稱取上述處方量藥物部位(藥物部位的制備方法參見實(shí)施例一下述1、2、3、4.)與淀粉適量，混合均勻后，常規(guī)濕法制粒，干燥，裝制成1000粒0號(hào)硬膠囊。實(shí)施例九處方橙皮苷部位20g、射干苷部位30g、黃芩苷30g、野葛30g。橙皮苷提取物中橙皮苷含量50%，黃芩苷含量測(cè)定為卯％，野葛(粉末)中葛根素含量5%,射干苷提取物中射干苷含量70%。制法分別稱取上述處方量藥物部位(藥物部位的制備方法參見實(shí)施例一下述1、2、3、4.)混合均勻后，裝制成1000粒0號(hào)硬膠囊。權(quán)利要求1、一種治療呼吸系統(tǒng)感染的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的藥效原料按重量計(jì)為橙皮苷1-4份、黃芩苷2-8份、葛根素1-4份、射干苷1-6份。2、權(quán)利要求l的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的藥效原料按重量計(jì)為橙皮苷2-3份、黃芩苷3-4份、葛根素2-3份、射干苷2-3份。3、一種治療呼吸系統(tǒng)感染的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的藥效原料按重量計(jì)為橙皮苷提取物1-4份、黃芩苷提取物2-8份、葛根素提取物1-4份、射干苷提取物1-6份；橙皮苷提取物中橙皮苷含量10-90%，黃芩苷提取物中黃芩苷含量10-90%，葛根素提取物中葛根素含量5-20%，射干苷提取物中射干苷含量10-90%。4、權(quán)利要求3的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的藥效原料按重量計(jì)為橙皮苷提取物2-3份、黃芩苷提取物3-4份、葛根素提取物2-3份、射干苷提取物2-3份；橙皮苷提取物中橙皮苷含量50-65%，黃芩苷提取物中黃芩苷含量50-85%，葛根素提取物中葛根素含量10-15%，射干苷提取物中射干苷含量50-70%。5、一種治療呼吸系統(tǒng)感染的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的藥效原料按重量計(jì)為含橙皮苷的植物l-4份、黃芩2-8份、含葛根素的植物l-4份、含射干苷的植物l-6份；含橙皮苷的植物選自陳皮、青皮、枳實(shí)、枳殼、化橘紅、蕓香科植物佛手果實(shí)、蕉柑果實(shí)、枸橘果實(shí)、檸檬果實(shí)、藜檬果皮、枸櫞成熟果實(shí)、蘆柑皮和蘆柑皮渣中的一種或幾種混合物；含葛根素的植物選自野葛和/或葛根，含射干苷的植物選自鳶尾和/或射干。6、一種治療呼吸系統(tǒng)感染的藥物組合物的制備方法，包括如下步驟取藥效原料蘆柑皮或蘆柑皮渣、鳶尾、黃芩、野葛；用水和/或乙醇作溶劑，加熱提取上述藥效原料，得提取液；將提取液^^縮后，得濃縮物，向該濃縮物中加入水，濾取沉淀物。7、權(quán)利要求6藥物組合物的制備方法，其特征在于用50-80%乙醇分別提取上述藥效原料，得提取液；分別濃縮提取液后，得到相應(yīng)濃縮物，分別向這些濃縮物中加水，分別濾取沉淀物，干燥沉淀物，得到粗制的橙皮苷提取物、黃芩苷提取物、葛根素提取物和射干苷提取物；該橙皮苷提取物中橙皮苷含量不低于10%,黃芩苷提取物中黃芩苷含量不低于10%，葛根素提取物中葛根素含量不低于5%，射干苷提取物中射干苷含量不低于10%。8、權(quán)利要求7藥物組合物的制備方法，其特征在于用60-70%乙醇分另"提取上述藥效原料；所述粗制的橙皮苷提取物、黃芩苷提取物和射干苷提取物可用常規(guī)加堿溶解、加酸沉淀方法精制；橙皮苷提取物中橙皮苷含量20-90%,黃芩苷提取物中黃芩苷含量20-90%，葛根素提取物中葛根素含量10-20%，射干苷提取物中射干苷含量20-90%;按重量計(jì)稱取橙皮苷提取物l-4份、黃芩苷提取物2-8份、葛根素提取物l-4份、射干苷提取物l-6份，與藥學(xué)上可接受輔料或載體混合。9、權(quán)利要求8藥物組合物的制備方法，所述橙皮苷提取物的精制方法是:取粗制的橙皮苷提取物加入含2n/。NaOH的50°/。乙醇溶解，過(guò)濾，將濾液加鹽酸調(diào)PH至7左右，靜置24h后，濾取沉淀，干燥；黃芩苷提取物的精制方法是取粗制的黃芩苷提取物加相當(dāng)于藥材3f咅體積的水分散均勻，用40XNaOH調(diào)節(jié)PH7左右，用加入等體積的95%乙醇攪拌使溶解，靜置12h，濾過(guò)，濾液用鹽酸調(diào)節(jié)PH2左右，60'C保溫60min，靜置24h后，濾取沉淀，先用稀乙醇洗漆沉淀，再用水洗滌沉淀至中性，減壓干燥；射干苷提取物的精制方法是將60-70%乙醇提取液濃縮后，加入水，用鹽酸調(diào)PH到12，靜置10小時(shí)后，濾取沉淀；于酸水液加入2。/。NaOH液調(diào)到PH至89,繼續(xù)濃縮，濃縮到原體積的1/2，然后加鹽酸調(diào)PH至U12,靜置10小時(shí)后，濾取沉淀；合并兩次沉淀物，然后用抽濾漏斗將沉淀抽干，得射干苷的粗提物，向射干苷粗提物中加入無(wú)水乙醇(藥材重量g:乙醇體積ml-7:10)，攪拌均勻后，濾取沉淀物，干燥。10、權(quán)利要求8藥物組合物的制備方法，其中按重量計(jì)稱取橙皮苷提取物2-3份、黃苳苷提取物3-4份、葛根素提取物2-3份、射干苷提取物2-3份；橙皮苷提取物中橙皮苷含量50-65%，黃芩苷提取物中黃芩苷含量50-85%,葛根素提取物中葛根素含量10-15%，射干苷提取物中射干苷含量50-70%,與口服制劑輔料混合，制成膠囊劑、分散片、普通片、顆粒劑、口服液。11、一種治療呼吸系統(tǒng)感染的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的藥效原料按重量計(jì)為含橙皮苷的原料l-4份、含黃芩苷的原料2-8份、含葛根素的原料l-4份、含射干苷的原料1-6份；含橙皮苷的原料中橙皮苷含量不低于10%，含黃芩苷的原料中黃零苷含量不低于10%,含葛根素的原料中葛根素含量不低于5%，含射干苷的原料中射干苷含量不低于10%;所述含橙皮苷的原料包括含橙皮苷的植物、橙皮苷提取物或橙皮苷；含橙皮苷的植物選自陳皮、青皮、枳實(shí)、枳殼、化橘紅、蕓香科植物佛手果實(shí)、蕉柑果實(shí)、枸橘果實(shí)、檸檬果實(shí)、藜檬果皮、枸櫞成熟果實(shí)、戸柑皮和盧柑皮渣中的一種或幾種混合物；含黃苳苷的原料包括黃芩、黃芩提取物和黃芩苷；含葛根素的原料包括野葛或葛根、葛根素提取物和葛根素；含射干苷的原料包括鳶尾或射干、射干苷提取物和射干苷。全文摘要一種治療呼吸系統(tǒng)感染的含橙皮苷提取物、黃芩苷提取物、葛根素提取物和射干苷提取物的藥物組合物及其制備方法，該藥物組合物具有解熱、鎮(zhèn)痛、消炎、抗菌和抗病毒的作用，尤其適宜防治上呼吸道感染。文檔編號(hào)A61K31/7042GK101152202SQ200710132670公開日2008年4月2日申請(qǐng)日期2007年9月29日優(yōu)先權(quán)日2007年9月29日發(fā)明者楊中林申請(qǐng)人:中國(guó)藥科大學(xué)