專利名稱：：一種丹參酮ⅱa脂質(zhì)復(fù)合物及其注射用膠束組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，涉及一種丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物的制備及其注射用膠束組合物。
背景技術(shù)：
：丹參酮IIA(TanshinoneIIA)，CASNO.:568-72-9，分子式C19H1803分子量294.33，結(jié)構(gòu)式為TheStructureofTanshinonII/TheStructureofSodiumTanshinonllASilate為唇形科植物丹參(SalviamiltiorrhizaBge)的干燥根及根莖的提取物。結(jié)晶粉末為紅色熔點(diǎn)為209'C21(TC，易溶于乙醇，丙酮，乙醚等有機(jī)溶劑，微溶于水。本品能增加冠脈流量，改善缺血區(qū)心肌的側(cè)枝循環(huán)及局部供血，改善缺氧心肌的代謝紊亂，提高心肌耐缺氧能力，抑制血小板聚集及抗血栓形成，縮小實(shí)驗(yàn)動(dòng)物缺血心肌梗死面積，在一定劑量下亦能增強(qiáng)心肌收縮力。適應(yīng)癥可用于冠心病、心絞痛、心肌梗死，也可用于室性早博。本品對(duì)各種類型的心絞痛有療效，擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加冠狀動(dòng)脈血流量，減慢心率，增加心肌收縮，抑制凝血，促進(jìn)組織細(xì)胞修復(fù)，降低血脂，保護(hù)紅細(xì)胞生長(zhǎng)。適用于冠心病心絞痛和心肌梗賽、腦動(dòng)脈和視網(wǎng)膜及外周靜脈血栓抑制劑，可以治療白塞氏綜合癥，結(jié)節(jié)性紅斑。本品的衍生物丹參酮IIA磺酸鈉可用于肌注、靜注或靜滴每日1次4080mg。推注用25%葡萄溏液20m1稀釋。靜滴用5%葡萄糖液250500m1稀釋。丹參酮IIA的親水/親脂指數(shù)為74/401=0.197，要將其直接制成水溶液十分困難，因此限制其臨床使用。丹參酮IIA磺酸鈉雖然增加了丹參酮IIA的水溶性，但使丹參酮IIA的脂溶性減弱，致使其不易進(jìn)入組織，尤其不易透過(guò)血腦屏障進(jìn)入腦組織，使其作用范圍變窄。由于其在血液中的半衰期短，因此靜滴時(shí)需用較大劑量?；撬徕c鹽為離子型化合物，較難透過(guò)以脂質(zhì)及蛋白為基礎(chǔ)的生物膜結(jié)構(gòu)系統(tǒng)。對(duì)結(jié)核桿菌的抑菌活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，丹參酮nA的MIC為0.31ug/ml，而丹參酮IIA磺酸鈉的MIC為5ug/ml(《中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)》1998,4:258)。同時(shí)因?yàn)樾枰獙?duì)丹參酮IIA進(jìn)行磺化反應(yīng)，增加了不必要的步驟。
發(fā)明內(nèi)容膽固醇是一種中性脂質(zhì)，亦屬于雙親分子，其結(jié)構(gòu)與膽酸相似，但親油性強(qiáng)于親水性，經(jīng)衍生化后的膽固醇酰硫酸鈉親水性增強(qiáng)。與膽鹽相比親脂性比親水性強(qiáng)得多，因此對(duì)親脂性藥物的包容性更強(qiáng)。由于其與硫酸是以酯鍵形式結(jié)合，因此，進(jìn)入體內(nèi)后可以快速水解成膽固醇，而成為體的固有成分之一，毒性極小。膽固醇酰硫酸鈉可以通過(guò)親脂性部分的疏水力以及可能也通過(guò)親水性部分的極性親和力與丹參酮IIA形成按照一定分子摩爾數(shù)比的多分子復(fù)合物。這種復(fù)合物也可以和磷脂的親水頭部和兩個(gè)疏水的尾部產(chǎn)生交連作用，增加復(fù)合物的物理化學(xué)穩(wěn)定性。這種脂質(zhì)復(fù)合物在水或以緩沖液為水化介的溶劑中可自發(fā)形成膠束。將丹參酮IIA、磷脂和膽固醇硫酸鈉溶解在有機(jī)相中，再將此有機(jī)相注入到緩沖液中時(shí)，有機(jī)相便開始在緩沖液中擴(kuò)散，有機(jī)相濃度降低，藥物、磷脂和膽固醇硫酸鈉在有機(jī)相中的溶解度下降，不能溶解的藥物和磷脂、膽固醇硫酸鈉相互結(jié)合形成一種分子復(fù)4物以膠體的形式分散在緩沖液中，隨有機(jī)相濃度的繼續(xù)降低，剩下的丹參酮IIA和磷脂、膽固醇硫酸鈉同樣結(jié)合在一起以膠體形式分散在緩沖液中，如此反復(fù)，至全部的藥物和磷脂、膽固醇硫酸鈉形成復(fù)合物而分散。所制藥物脂質(zhì)復(fù)合物屬于一種膠體分散體系，由于其粒徑在lOOrnn以下，所以丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物的滅菌采用過(guò)濾過(guò)0.22Mm濾膜滅菌法。從而解決了脂質(zhì)體、乳劑等微粒制劑因無(wú)法滅菌或滅菌后粒徑增大、藥物降解等問(wèn)題，為工業(yè)化生產(chǎn)鋪平了道路本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是采用藥劑手段，將丹參酮IIA制成適合注射給藥的劑型，既能保留丹參酮IU可順利通過(guò)細(xì)胞膜的特性。又能分散在水性介質(zhì)中，形成膠束，便于臨床肌注射或靜滴給藥。加入長(zhǎng)循環(huán)輔料還可避免體內(nèi)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬，延長(zhǎng)藥物有效時(shí)間。本發(fā)明的又一個(gè)目的是提供一種制備本發(fā)明的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物及其注射用膠束組合物的方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物及其注射用膠束組合物，由治療有效量的丹參酮IIA、磷脂、膽固醇硫酸鹽或類似膽固醇衍生物、附加劑、長(zhǎng)循環(huán)輔料和注射用水組成。120wt%0.000120wt%0.000120wt%015wt%015wt%余量。在上述技術(shù)方案中，本發(fā)明提供的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物及其注射用膠束組合物含有以下成分丹參酮IIA磷脂膽固醇硫酸鹽或類似膽固醇衍生物長(zhǎng)循環(huán)輔料附加劑注射用水磷脂包括天然來(lái)源的磷脂與合成來(lái)源的磷脂，所述天然來(lái)源的磷脂為從植物或動(dòng)物中通過(guò)物理加工方法提取出來(lái)的磷脂，如大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、腦磷脂、磷脂酰肌醇、神經(jīng)鞘磷脂、絲氨酸磷脂等；所述合成來(lái)源的磷脂為通過(guò)半合成或合成方法制得的磷脂，如氫化磷脂、多烯磷脂酰膽堿、DMPC、DPPC、DMPG、DPPG、DPPE、DSPE、DPPA、DSPA及其結(jié)構(gòu)修飾物如PEG化衍生物DSPE-PEG2000等。優(yōu)選的是，該磷脂為大豆卵磷脂。膽固醇硫酸鹽或/和類似膽固醇衍生物包括膽固醇硫酸鈉、膽固醇硫酸鉀、膽固醇磷酸鈉、膽固醇磷酸鉀、膽固醇磺酸鈉、膽固醇磺酸鉀和其它方式修飾的上述膽固醇衍生物及其任意組合。優(yōu)選的是該膽固醇硫酸鹽為膽固醇硫酸鈉。長(zhǎng)循環(huán)輔料為PEG分子量為PEG分子量為100010000的硬脂酸酯、PEG分子量為100010000維生素E琥珀酸酯、PEG硬脂酸酯與分子量為20010000的PEG的混合物、Myrj類、Brij類、PEG—二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、PEG—二棕櫚酰磷脂酰膽堿、PEG—二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、神經(jīng)節(jié)苷脂、聚丙烯酰胺、殼聚糖、聚乙二醇聚十六烷基腈基丙酸酯、分子量為20010000的PEG、PVP或PVA及其任意組合。優(yōu)選的是神經(jīng)節(jié)苷脂、PEG—二硬脂?；字Ｒ掖及贰EG—二棕櫚酰磷脂酰膽堿及其任意組合。本發(fā)明提供的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物進(jìn)一步包括015w"/。的附加劑，優(yōu)選包括05wtX的附加劑。所述附加劑可起到增加制劑穩(wěn)定性、調(diào)節(jié)滲透壓、抗氧化等作用，選自滲透壓調(diào)節(jié)劑，如丙三醇、丙二醇、甘露醇等；界面膜穩(wěn)定劑，如油酸、油酸鈉等；金屬離子絡(luò)合劑，如EDTA、乙二按四乙酸二鈉鹽、鈣鹽等；防腐劑，如苯扎溴胺、苯扎氯胺、對(duì)羥基苯甲酸酯類、山梨酸等；抗氧劑，如維生素C、維生素E等；分子量為20010000的PEG、PVP或PVA及其任意組合。優(yōu)選的是，該附加劑為丙三醇、甘露醇、油酸鈉、EDTA、維生素C、維生素E、PEG及其任意組合。本發(fā)明還提供了一種本發(fā)明的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物及其注射用膠束組合物的制備方法，該方法包括以下步驟(1)將處方量的丹參酮IIA、磷脂、膽固醇硫酸鹽或類似膽固醇衍生物或、長(zhǎng)循環(huán)輔料、附加劑分散于有機(jī)溶劑中，以構(gòu)成有機(jī)相；(2)將長(zhǎng)循環(huán)輔料、附加劑溶于注射用水中，以構(gòu)成水相；(3)在060'C的溫度下，在攪拌或/和高剪切條件下將所述有機(jī)相和水相混合，再采用減壓蒸發(fā)等方法除去有機(jī)溶劑，從而制得丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物。(4)將所得丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物用0.22iim的濾膜濾過(guò)除菌，分裝，置于4t!下密封保存，即得注射液，其粒徑在20-200nm之間。(5)將上述所得膠束加入凍干保護(hù)劑進(jìn)行凍干處理，即得粉針劑，加溶媒再分散后，其粒徑在20-200mn之間。其中，對(duì)所得到的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物進(jìn)行凍干處理的工藝可為將140wt9&(重量比)的凍干保護(hù)劑溶于本發(fā)明的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物的水分散體中，該凍干保護(hù)劑選自海藻糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、氯化鈉、乳糖、山梨醇、右旋糖苷、甘油或甘氨酸及其任意組合，然后分裝于西林瓶中，并置于冷凍干燥機(jī)中-45-C預(yù)凍3h，然后以5°C/h升溫至-50°C，維持10h，再以5°C/h升溫至0°C，維持8h，最后升溫至10'C保溫10小時(shí)后出箱，加塞密封即可。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1取丹參酮IIA500mg，蛋黃卵磷脂2.0g,膽固醇硫酸鈉德g，維生素E10mg，溶解于3(TC的甲醇中作為有機(jī)相；將PEG4000.5g溶于90ml注射用水中，加熱至3(TC作為水相，在3(TC攪拌下將有機(jī)相注入水相，持續(xù)攪拌5min，再減壓旋轉(zhuǎn)蒸去甲醇，得帶藍(lán)色乳光的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物，測(cè)其平均粒徑為82士17nm。加注射用水補(bǔ)至總體積為100ml，用0.22um的微孔濾膜濾過(guò)除菌，分裝2ml/支，12rC滅菌30min，即得注射液。在制得的脂質(zhì)復(fù)合物加入海藻糖5g,注射用水至100ml，用0.22um的微孔濾膜濾過(guò)除菌，分裝2ml/支，無(wú)菌操作下冷凍干燥，即得。將凍干后的制劑用生理鹽水稀釋，測(cè)其平均粒徑為93士20nm。實(shí)施例2取丹參酮IIA1.0g，大豆卵磷脂3.0g，膽固醇硫酸鈉500mg，溶解于35'C的無(wú)水乙醇中作為有機(jī)相；將PEG200l.Og溶于90ml注射用水中，加熱至35。C作為水相，在35。C攪拌下將有機(jī)相注入水相，持續(xù)攪拌10min，再減壓旋轉(zhuǎn)蒸去乙醇，得帶藍(lán)色乳光的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物，測(cè)其平均粒徑為72土12nm。加注射用水補(bǔ)至總體積為100ml，用0.22um的微孔濾膜濾過(guò)除菌，分裝2ml/支，12rC滅菌30min，即得注射液。在制得的脂質(zhì)復(fù)合物加入海藻糖5g，注射用水至100ml，用0.22um的微孔濾膜濾過(guò)除菌，分裝4ml/支，無(wú)菌操作下冷凍干燥，即得。將凍干后的制劑用生理鹽水稀釋，測(cè)其平均粒徑為82土17nm。實(shí)施例3取丹參酮IIA2.0mg，大豆卵磷脂10g，膽固醇磺酸鈉5g，溶解于35。C的四氫呋喃中作為有機(jī)相；將poloxamer1885g溶于950ml注射用水中，加熱至35"C作為水相，在35'C攪拌下將有機(jī)相注入水相，持續(xù)攪拌lOmin，再減壓旋轉(zhuǎn)蒸去四氫呋喃，得帶藍(lán)色乳光的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物，測(cè)其平均粒徑為65土23nm加注射用水補(bǔ)至總體積為100ml，用0.22um的微孔濾膜濾過(guò)除菌，分裝2ml/支，12rC滅菌30min，即得注射液。在制得的脂質(zhì)復(fù)合物加入海藻糖5g，注射用水至100ml，用0.22um的微孔濾膜濾過(guò)除菌，分裝4ml/支，無(wú)菌操作下冷凍干燥，即得。將凍干后的制劑用生理鹽水稀釋，測(cè)其平均粒徑為70士18nm。實(shí)施例4表1列舉了幾種丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物及其注射用膠束組合物的處方及凍干針劑和注射劑的規(guī)格，但所用處方組成、各輔料配比及制劑規(guī)格不限于下表所列濃度。制備方法與工藝同實(shí)施例1-3。表1丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物處方<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>實(shí)施例5(1)刺激性試驗(yàn)取健康家兔6只分別固定于兔箱內(nèi)，隨機(jī)分成2組，每組3只家兔，左右耳緣靜脈分別滴注生理鹽水和丹參酮IIA注射液、丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物注射液。即左耳給生理鹽水，右耳給丹參酮IIA注射液或丹參酮nA脂質(zhì)復(fù)合物注射液(用0.9%的氯化鈉注射液稀釋)。丹參酮IIA注射液和丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物注射液給藥劑量相同，均為10mg/只，溶液總體積均為12ml/只/次。左耳耳緣靜脈滴注生理鹽水，滴注量及滴注速度同檢品組。每日各滴注1次，連續(xù)3天，觀察兔耳緣靜脈刺激反應(yīng)。于末次給藥24h后將兔子放血處死，取下兩耳進(jìn)行組織切片檢查(切片位置距進(jìn)針位置2.6cm),根據(jù)病變程度，記為"-"，"+"，"++"，"+++","++++"。切片病理學(xué)檢査結(jié)果表明1)左耳陰性對(duì)照(氯化鈉注射液)的各取材點(diǎn)耳緣靜脈管壁完整，血管無(wú)明顯擴(kuò)張。內(nèi)皮細(xì)胞清晰、無(wú)腫脹、壞死，管壁及管周無(wú)明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，管壁內(nèi)未見血栓形成等病變。2)右耳陽(yáng)性對(duì)照(丹參酮IIA注射液)組的各取材點(diǎn)血管明顯擴(kuò)張為"++"，內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、壞死為"++"，見血栓形成為"++"，管壁及管周見出血及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)為"+++"。3)右耳丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物注射液組的各取材點(diǎn)耳緣靜脈管壁完整，血管無(wú)明顯擴(kuò)張。管腔內(nèi)未見血栓形成等病變。丹參酮IU脂質(zhì)復(fù)合物組形態(tài)學(xué)明顯好于市售丹參酮IIA注射液組，無(wú)明顯刺激性。試驗(yàn)結(jié)果表明，丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物注射液對(duì)家兔耳靜脈血管未見明顯刺激作用。(2)溶血性試驗(yàn)取家兔血10mL，置于涂有肝素的離心試管中，4000rPm離心5min,棄去上層血漿，將血細(xì)胞用生理鹽水10mL沖洗多次，每次沖洗后離心除去上清液，直至上清液不呈紅色為止，然后吸取一定量紅細(xì)胞，按體積比稀釋制備2%的紅細(xì)胞混懸液，4r冰箱中冷藏備用。記錄方式"一一"凝集不溶血，但出現(xiàn)紅細(xì)胞凝聚成團(tuán)，搖晃后能重新分開。"一"不溶血紅細(xì)胞全部下沉，上層為淡黃色略微混濁的溶液。"+"部分溶血溶液呈淡黃色或淺紅色，試管底部有少量紅細(xì)胞殘留。"++"溶血溶液呈紅色，試管底部無(wú)紅細(xì)胞殘留。表2溶血性試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>結(jié)果顯示，所制的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物溶液未引起紅細(xì)胞的溶血反應(yīng)，符合靜脈注射的標(biāo)準(zhǔn)。權(quán)利要求1、一種丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物，由治療有效量的丹參酮IIA、磷脂、膽固醇硫酸鹽或/和類似膽固醇衍生物組成。2、一種由權(quán)利要求1所述的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物組成的注射用膠束組合物，其含有以下成分丹參酮IIA0.00000120wt%磷脂0.000120wt%膽固醇硫酸鹽或/和類似膽固醇衍生物0.000120wt%附加劑015wt%注射用水余量。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物，其特征在于丹參酮IU脂質(zhì)復(fù)合物顆粒懸浮于水性介質(zhì)中粒徑在20-200mn之間。4、根據(jù)權(quán)利要求12任一項(xiàng)所述的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物，其特征在于其中所述磷脂選自所有天然來(lái)源和合成來(lái)源的磷脂及其任意組合。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物，其特征在于所述天然來(lái)源的磷脂為從植物或動(dòng)物中通過(guò)各種加工方法提取出來(lái)的磷脂，如大豆磷脂、蛋黃磷脂、腦磷脂、磷脂酰肌醇、神經(jīng)鞘磷脂、絲氨酸磷脂；所述合成來(lái)源的磷脂為通過(guò)半合成或合成方法制得的磷脂，如氫化磷脂、多烯磷脂酰膽堿、DMPC、DPPC、DMPG、DPPG、DPPE、DSPE、DPPA、DSPA及其結(jié)構(gòu)修飾物如PEG化衍生物DSPE-PEG2000。6、根據(jù)權(quán)利要求12任一項(xiàng)所述的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物，其特征在于其中所述膽固醇硫酸鹽或/和類似膽固醇衍生物包括膽固醇硫酸鈉、膽固醇硫酸鉀、膽固醇磷酸鈉、膽固醇磷酸鉀、膽固醇磺酸鈉、膽固醇磺酸鉀和其它方式修飾的上述膽固醇衍生物及其任意組合；所述附加劑選自滲透壓調(diào)節(jié)劑、界面膜穩(wěn)定劑、金屬離子絡(luò)合劑、防腐劑、抗氧劑、分子量為20010000的PEG、PVP或PVA及其任意組合。7、一種制備權(quán)利要求16所述的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟-(1)將處方量的丹參酮IIA、磷脂、膽固醇硫酸鹽或類似膽固醇衍生物或、長(zhǎng)循環(huán)輔料、附加劑分散于有機(jī)溶劑中，以構(gòu)成有機(jī)相；(2)將長(zhǎng)循環(huán)輔料、附加劑溶于注射用水中，以構(gòu)成水相；(3)在060"C的溫度下，在攪拌或/和高剪切條件下將所述有機(jī)相和水相混合，再采用減壓蒸發(fā)等方法除去有機(jī)溶劑，從而制得丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物。(4)將所得丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物用0.22um的濾膜濾過(guò)除菌，分裝即注射液，粒徑為20-200nm。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物的方法，其特征在于所述有機(jī)溶劑選自二氯甲烷、氯仿、丙酮、甲醇、乙醇、乙醚、四氫呋喃或異丙醇及其任意組合。9、根據(jù)權(quán)利要求7所述制備丹參酮IU脂質(zhì)復(fù)合物的方法，其特征在于向所述制得的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物進(jìn)一步加入凍干保護(hù)劑以制成凍干制劑，臨用前加無(wú)菌注射用水或生理鹽水重建后靜脈注射或肌注給藥，粒徑為20-200nm。10、根據(jù)權(quán)利要求7或9所述的制備丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物的方法，其特征在于所述凍干保護(hù)劑選自海藻糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖、氯化鈉、乳糖、山梨醇、右旋糖苷、甘氨酸及其任意組合。全文摘要本發(fā)明提供了一種丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物及其注射膠束用組合物。該丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物由治療量的丹參酮IIA、磷脂、膽固醇硫酸鹽或/和類似膽固醇衍生物、附加劑與注射用水組成。通過(guò)將丹參酮IIA脂質(zhì)化，從而解決了丹參酮IIA水中不溶，無(wú)法直接將其制成注射劑的問(wèn)題。本發(fā)明提供的丹參酮IIA脂質(zhì)復(fù)合物注射劑具有副作用小，血管刺激性低，載藥量高，粒徑分布窄、可濾過(guò)除菌，藥物穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)。文檔編號(hào)A61K9/00GK101439034SQ200710158459公開日2009年5月27日申請(qǐng)日期2007年11月22日優(yōu)先權(quán)日2007年11月22日發(fā)明者張曉君,颯徐,德瑞克·王申請(qǐng)人:沈陽(yáng)沃森藥物研究所