專利名稱：治療和預(yù)防全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的藥物組成和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抑制引起全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的免疫反應(yīng)的方法，涉及預(yù)防全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的方法，涉及治療全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的方法以及這些方法使用的藥物組合物。
背景技術(shù)：
細(xì)菌感染和其它可能的刺激因素引起的免疫反應(yīng)能導(dǎo)致全身炎性反應(yīng)，或全身炎性反應(yīng)綜合癥(SIRS)BurnellR，1994，循環(huán)休克43137(BurnellR.，1994，Circ.Shock 43137)；Bahrani S等，1995，臨床生物研究進(jìn)展392197(Bahrani S，et al.，1995，Prog.Clin.Biol.Res.392197)；收錄在此作為參考文獻(xiàn)。嚴(yán)重的全身炎性反應(yīng)綜合癥會(huì)導(dǎo)致“多臟器功能損傷綜合征”(MODS)，包括不同程度的發(fā)熱，低血毒癥，呼吸急促，心動(dòng)過速，內(nèi)皮發(fā)炎，心肌功能不全，高灌注，精神狀態(tài)改變，血管衰竭和最終的器官損傷如急性呼吸困難綜合癥，凝血病，心臟衰竭，腎衰竭，休克，和/或昏迷美國胸科醫(yī)師大學(xué)/危重病學(xué)會(huì)共同會(huì)議，危重病，1992，20864(American Collegeof Chest Physicians/Society of Critical Care Medicine Consensus Conference，Crit.Care Med.，1992，20864)；和Bone，1995，美國醫(yī)學(xué)會(huì)雜志，273155(Bone，1995，JAMA 273155)，收錄在此作為參考文獻(xiàn)。
當(dāng)全身炎性反應(yīng)綜合癥是由感染引起時(shí)，它被稱為敗血癥。敗血癥能發(fā)展成嚴(yán)重?cái)⊙Y臨床階段和最終的敗血癥休克臨床階段。臨床敗血癥被廣泛定義為與感染的臨床表現(xiàn)相關(guān)的微生物原侵入的狀況。全身炎性反應(yīng)綜合癥和敗血癥的臨床癥狀包括但不限于(1)體溫＞38℃或＜36℃； (2)心跳速率＞90跳每分鐘；(3)呼吸速度＞20次吸氣每分鐘或PaCO2＜32mm Hg；(4)白細(xì)胞計(jì)數(shù)＞12000/cu mm，＜4000/cu mm，或＞10％不成熟(帶狀)形式；(5)器官功能障礙，高灌注或高血壓Bone等，1992，胸1011644(Bone et al.，1992，Chest 1011644)，收錄在此作為參考文獻(xiàn)。敗血癥休克具有不充分的組織灌注的特性，導(dǎo)致組織供氧不足，低血壓。
但感染發(fā)生時(shí)，感染部位的巨噬細(xì)胞活化分泌TNF-α和IL-1，導(dǎo)致增加的血漿蛋白釋放到組織中，增加的吞噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞移動(dòng)進(jìn)入組織，增加的血小板貼附到血管壁上。這樣，局部的血管堵塞并且病原體被局限在感染位點(diǎn)。然而，在敗血癥中，感染變?yōu)槿硇缘牟⑶襎NF-α引起的血管堵塞變?yōu)闉?zāi)難性的。TNF-α的全身性釋放造成血管舒張和由于血管滲透性增加而引起的血漿體積減少，導(dǎo)致休克。在敗血癥休克中，TNF-α進(jìn)一步引發(fā)散布性的血管內(nèi)凝集(血液凝結(jié))導(dǎo)致在小血管中血塊的產(chǎn)生和凝集蛋白的巨大消耗。由于病人凝血能力的喪失，重要的器官如腎、肝、心臟和肺都會(huì)由于正常灌注的無法進(jìn)行而受到損傷。敗血癥性休克的致死率高達(dá)81％。
大腸桿菌是許多例敗血癥中的感染病原體，而其它革蘭氏陰性菌，如克雷伯菌屬-腸桿菌屬-沙雷菌屬的細(xì)菌和假單胞桿菌也能引起敗血癥。在一些少量的病例中，革蘭氏陽性菌如金黃葡萄球菌和全身性病毒和真菌感染也能引起敗血癥。泌尿生殖器系統(tǒng)，腸胃系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)是最普通的感染導(dǎo)致敗血癥的位點(diǎn)。其它敗血癥相關(guān)的感染位點(diǎn)包括創(chuàng)傷，燒傷和骨盆感染，和感染的靜脈血管。
在患對血流擴(kuò)張敏感的疾病或狀況的住院病人或燒傷、創(chuàng)傷或外科手術(shù)病人中發(fā)生敗血癥是很平常的。使病人對血流擴(kuò)張敏感的因素包括一個(gè)通常衰弱的免疫系統(tǒng)，比如新生兒和老年人中可見的，和導(dǎo)致對感染增加的局部敏感性的狀況或疾病，比如循環(huán)損傷，糖尿病，尿毒癥和艾滋病。最后，具有過大的免疫反應(yīng)傾向的個(gè)體，比如可能由于某種IL-1基因的等位基因的存在而發(fā)生的個(gè)體，也有很高的風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生敗血癥(美國專利No.6,251,598，收錄在此作為參考文獻(xiàn))。
既然敗血癥病人的病癥診斷不根據(jù)感染的嚴(yán)重程度，而是根據(jù)病人的全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥反應(yīng)的嚴(yán)重程度pilz等，1991，Krankenpflege雜志，29483(pilz et al.，1991，Krankenpflege-journal 29483)，收錄在此作為參考文獻(xiàn)，許多診斷測定都集中在免疫反應(yīng)方面。Centocor公司的TNF-α免疫測定法(WO 90/06314，收錄在此作為參考文獻(xiàn))使用了兩個(gè)抗體檢測病人血液中這個(gè)炎性調(diào)節(jié)子的水平。美國國家航空和宇宙航行局(NASA)建立的通過提取的天青蛋白檢測病人血液中假單胞桿菌測定法，并用一個(gè)單克隆抗體對它進(jìn)行檢測(美國專利No.5,210,019，收錄在此作為參考文獻(xiàn))。Bio Whittaker的敗血癥測定法和Seikagaku Kyoto公司(東京，日本)的美洲鱟鱟試劑測定法？檢測病人血液中E.Coli內(nèi)毒素的水平。其它敗血癥診斷測定法檢測敗血癥反應(yīng)期間白細(xì)胞產(chǎn)生的氧化劑的存在(美國專利No.5,804,370，收錄在此作為參考文獻(xiàn))，敗血癥標(biāo)志肽降鈣素原(美國專利No.5,639,617，收錄在此作為參考文獻(xiàn))，白細(xì)胞高親和性Fc受體(CD64)表達(dá)Davis等，1995，血液學(xué)試驗(yàn)13(Davis et al.，Laboratory Hematology 13)，收錄在此作為參考文獻(xiàn)；血清C-活化蛋白(CRP)Drews等，1995，紐約學(xué)術(shù)科學(xué)年鑒762398(Drews et al.，1995，Ann.NY Acad.Sci.762398)；Kawamura和Nishida，1995，兒科學(xué)8410(Kawamura and Nishida，1995，ActaPaediatr.8410)，均收錄在此作為參考文獻(xiàn)；中性粒細(xì)胞表面CD11b水平(美國專利No.6,077,665，收錄在此作為參考文獻(xiàn))和選擇的未飽和自由脂肪酸與飽和自由脂肪酸的比例(美國專利No.5,780,237，收錄在此作為參考文獻(xiàn))。
HIV附屬基因vpr編碼病毒蛋白R(Vpr)參與了許多(宿主)細(xì)胞事件包括擴(kuò)增，分化，凋亡，細(xì)胞因子產(chǎn)生和NF-B調(diào)節(jié)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)Levy等，1993，細(xì)胞72541-550(Levy et al.，1993，cell 72541-550)；Ayyavoo等，1997，自然藥物31117-1123(Ayyavoo et al.，1997，Nature Medicine 31117-1123)；Stewart等，1997，病毒學(xué)雜志715579-5592(Stewart et al.，J.Virol.715579-5592)。NF-B的活化對特異擴(kuò)大抗原特異免疫反應(yīng)的一些細(xì)胞因子和趨化因子的誘導(dǎo)作用是很重要的。NF-B的活化在通過CD28共刺激途徑引發(fā)的前炎性細(xì)胞因子，特別是TNFα的誘導(dǎo)中也扮演重要角色，Moriuchi等，1997，免疫學(xué)雜志1583483-3491(Moriuchi et al.，1997，J.Immunol.1583483-3491)；Fraser等，1992，分子細(xì)胞生物學(xué)124357-4363(Fraser et al.，1992，Mol.Cell Biol.124357-4363)。細(xì)胞因子表達(dá)的形式影響炎癥反應(yīng)的本性和持久性。比如，IFN和TNF的產(chǎn)生對增強(qiáng)細(xì)胞免疫的誘導(dǎo)是很適合的，而IL-4和IL-10與幫助B細(xì)胞發(fā)展為抗體產(chǎn)生細(xì)胞有關(guān)Paul等，1994，細(xì)胞76241-251(Paul et al.，1994，cell 76241-251)。用突變的NF-B結(jié)合位點(diǎn)和Ika競爭物進(jìn)行的研究表明包括NF-B和SP-1的轉(zhuǎn)錄因子對RANTES(活化調(diào)節(jié)，正常T表達(dá)和分泌的)基因表達(dá)是重要的Moriuchi等，1997，免疫學(xué)雜志1583483-3491(Moriuchi et al.，1997，J Immunol.1583483-3491)。
CD8+T細(xì)胞被認(rèn)為在控制HIV通過CTL誘導(dǎo)的感染中扮演重要的角色。此外，CD8+T細(xì)胞也參與包括β-趨化因子RANTES，MIP-1α，MIP-1β和MDC一些因子的分泌Brinchman等，1990，免疫學(xué)雜志1142961-2966(Brinchman et al.，1990，J Immunol.1142961-2966)；Cocchi等，1996，科學(xué)2701811-1815(Cocchi et al.，1996，Science2701811-1815)；Pal等，1997，科學(xué)278695-698(Pal et al.，1997，Science 278695-698)。CD8+CTL是對病毒感染的一種重要的免疫防御。
趨化因子對感染和免疫活化中淋巴細(xì)胞補(bǔ)充的調(diào)節(jié)是很重要的Schall等，1994，免疫學(xué)新觀點(diǎn)6865-873(Schall et al.，1994，Curr.Opin.Immunol.6865-873)。T細(xì)胞的活化導(dǎo)致對抗原特異T幫助細(xì)胞和細(xì)胞毒性效應(yīng)細(xì)胞的擴(kuò)張是必須的某種趨化因子/化學(xué)因子的合成Weiss等，1994，細(xì)胞76263-274(Weiss et al.，1994，Cell 76263-274)。除了在T細(xì)胞交換和免疫活化中扮演角色外，β-趨化因子能在確定的巨噬細(xì)胞系也包括原代淋巴細(xì)胞中通過干擾病毒進(jìn)入所需的病毒共受體來抑制HIV-1感染Feng等，1996，科學(xué)272872-877(Feng et al.，1996，Science 272872-877)；Dornaz等，1996，細(xì)胞851149-1158(Dornaz et al.，1996，cell 851149-1158)。例如，在T細(xì)胞受體(TCR)和CD28/CTLA-4共連接反應(yīng)之后，趨化因子可由T細(xì)胞的一些亞群產(chǎn)生Taub等，1996，免疫學(xué)雜志1562095-2103(Taub et al.，1996，J.Immunol.1562095-2103)；Herold等，1997，免疫學(xué)雜志1594150-4153(Herold et al.，1997，J.Immunol.1594150-4153)。
T細(xì)胞擴(kuò)增的誘導(dǎo)，CTL誘導(dǎo)和細(xì)胞因子分泌，每個(gè)都需要TCR復(fù)合物的銜接和CD28/CTLA-4共刺激分子與它們在抗原呈遞細(xì)胞(APCs)上的配基CD80或CD86的相互作用，或通過CD40/CD40配基提供需要的二級信號以誘導(dǎo)T細(xì)胞活化Fraser等，1994，今日免疫學(xué)14357-362(Fraser et al.，1994，Immunol.Today 14357-362)；Crabtree等，1989，科學(xué)243355-361(Crabtreeet al.，1989，Science 243355-361)Linsley等，1993，免疫學(xué)綜述年鑒11191-212(Linsley et al.，1993，Annu.Rev.Immunol.11191-212)；June等，今日免疫學(xué)15321-331(June et al.，Immunol.Today 15321-331)。研究表明通過CD28的T細(xì)胞活化增強(qiáng)β-趨化因子的產(chǎn)生，獲得抗病毒效應(yīng)Carroll等，1997，科學(xué)276273-276(Carroll et al.，1997，Science 276273-276)；Levine等，1996，科學(xué)2721939-1943(Levine et al.，1996，Science 2721939-1943)；Bisset等，1997，AIDS 11485-491(Bisset et al.，1997，AIDS 11485-491)。感染部位的CD8+細(xì)胞的補(bǔ)充和活化增加了特異CTL前體細(xì)胞的頻率Stevenson等，1997，歐洲免疫學(xué)雜志273259-3268(Stevenson et al.，1997，Eur.J.Immunol.273259-3268)；Doherty等，1997，免疫學(xué)綜述159105-117(Doherty et al.，1997，Immunol.Reviews 159105-117)。封閉趨化因子的合成可緩解依賴趨化因子來補(bǔ)充免疫反應(yīng)所負(fù)責(zé)的細(xì)胞的炎癥的癥狀。
細(xì)胞免疫，特別是MHC限制性CTL反應(yīng)被認(rèn)為在大量病毒感染的保護(hù)和清除方面扮演實(shí)質(zhì)性的角色。在HIV-1感染個(gè)體中CD8+T細(xì)胞數(shù)量的減少與免疫系統(tǒng)惡化并行的抗病毒水平的降低和病情發(fā)展是相關(guān)聯(lián)的Mackewiez等，1991，臨床調(diào)查雜志871462-1466(Mackewiez et al.，1991，J.Clin.Invest.871462-1466)；Pantaleo等，1997，美國科學(xué)院院報(bào)949848-9853(Pantaleo et al.1997，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 949848-9853)。從對HIV-1感染長期未惡化者，HIV-1感染母親所生的未感染的嬰兒和反復(fù)接觸但未感染的血清反應(yīng)陰性的個(gè)體的研究的信息支持了CTL反應(yīng)在控制病毒進(jìn)入和可能甚至限制疾病發(fā)展中扮演角色Borrow等，1994，病毒雜志686103-6110(Borrow et al.，1994，J.Virol.686103-6110)；Rowland-Jones等，1995，自然藥物159-94(Rowland-Jones et al.，1995，Nature Medicine 159-94)。
對治療全身性炎癥，如全身炎性反應(yīng)綜合癥，和更特異的敗血癥和敗血癥休克的方法和藥物組成的需要是仍然存在的。特別需要能預(yù)防有風(fēng)險(xiǎn)發(fā)展的病人患全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥和有效治療診斷為全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的病人的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及治療已診斷患全身炎性反應(yīng)綜合癥或敗血癥的病人的方法，該方法包括的步驟為給上述病人施用一治療有效劑量的免疫調(diào)節(jié)藥物組合物，該藥物組合物包括一個(gè)或幾種下列成分Vpr蛋白；Vpr蛋白的一個(gè)功能性片段；一個(gè)可操作的連接于調(diào)節(jié)成分的編碼Vpr蛋白的核酸；一個(gè)可操作的連接于調(diào)節(jié)成分的編碼Vpr蛋白功能性片段的核酸。優(yōu)選的，施用免疫調(diào)節(jié)藥物組合物的步驟重復(fù)至少一次，更優(yōu)選的為每天1-6次。在其它的優(yōu)選實(shí)例中，施用免疫調(diào)節(jié)藥物組合物的步驟包含持續(xù)施用。
在一些治療被診斷患全身炎性反應(yīng)綜合癥或敗血癥個(gè)體的方法的具體實(shí)例中，個(gè)體被施用可操作的與調(diào)節(jié)成分連接的編碼Vpr蛋白或其功能性片段的核酸。核酸優(yōu)選按1-500μg核酸，25-250μg核酸，或約100μg核酸每劑量給藥?？刹僮鞯倪B接于調(diào)節(jié)成分的編碼Vpr或其功能性片段的核酸優(yōu)選包含在一個(gè)質(zhì)?；虿《据d體中。病毒載體優(yōu)選反轉(zhuǎn)錄病毒載體和腺病毒載體。
在一些治療被診斷患全身炎性反應(yīng)綜合癥或敗血癥個(gè)體的方法的具體實(shí)例中，個(gè)體被施用Vpr蛋白或其功能性片段。優(yōu)選的Vpr蛋白或其功能性片段的給藥量為0.1-100mg/kg體重每天，0.5-50mg/kg體重每天或1.0-10mg/kg體重每天。
在其它具體實(shí)例中，前面所述的治療已被診斷患全身炎性反應(yīng)綜合癥或敗血癥的病人的方法另外還包括至少一步給上述個(gè)體施用治療有效劑量的一個(gè)抗感染藥劑的步驟。這個(gè)抗感染藥劑優(yōu)選阿米卡星、妥布霉素、奈替霉素、慶大霉素、頭孢菌素、頭孢他啶、拉氧頭孢、碳青霉烯、亞胺培南、噻肟單酰胺菌素、氨芐青霉素、青霉素、酰脲青霉素、奧格門汀、兩性霉素、法昔洛韋或阿昔洛韋?？垢腥舅巹┑慕o藥步驟優(yōu)選與免疫調(diào)節(jié)藥物制備物的給藥步驟同時(shí)進(jìn)行。
在其它具體實(shí)例中，前面所述的治療已被診斷患全身炎性反應(yīng)綜合癥或敗血癥的病人的方法另外還包括的步驟有監(jiān)控個(gè)體血漿中前炎性細(xì)胞因子和敗血癥標(biāo)志蛋白/狀況的濃度，決定是否需要施加額外劑量的免疫調(diào)節(jié)藥物組合物，和施用額外劑量的免疫調(diào)節(jié)藥物組合物的步驟。優(yōu)選的，監(jiān)控TNFα的血漿水平并根據(jù)TNFα的血漿水平高于25pg/ml來決定是否需要施加額外劑量的免疫調(diào)節(jié)藥物組合物。
本發(fā)明的另一方面是一個(gè)預(yù)防已認(rèn)定高風(fēng)險(xiǎn)患全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的個(gè)體患該病的方法，該方法包括的步驟為給上述病人施用治療有效劑量的一個(gè)免疫調(diào)節(jié)藥物組合物，該藥物組合物包括一個(gè)或多個(gè)以下成分Vpr蛋白；Vpr蛋白的一個(gè)功能性片段；一個(gè)可操作的連接于調(diào)節(jié)成分的編碼Vpr蛋白的核酸；和一個(gè)可操作的連接于調(diào)節(jié)成分的編碼Vpr功能性片段的核酸。優(yōu)選的，施用免疫調(diào)節(jié)藥物組合物的步驟重復(fù)至少一次，更優(yōu)選的為每天1-6次。優(yōu)選的，施用免疫調(diào)節(jié)藥物組合物的步驟包含持續(xù)施用。
在一些預(yù)防已認(rèn)定有很高的風(fēng)險(xiǎn)患全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的個(gè)體患病的方法的具體實(shí)例中，個(gè)體被施用可操作的連接于調(diào)節(jié)成分的編碼Vpr蛋白或其功能性片段的核酸。核酸優(yōu)選按1-500μg核酸，25-250μg核酸，或約100μg核酸每劑量施用。可操作的連接于調(diào)節(jié)成分的編碼Vpr蛋白或其功能性片段的核酸優(yōu)選包含在一個(gè)質(zhì)?；虿《据d體中。病毒載體優(yōu)選反轉(zhuǎn)錄病毒載體和腺病毒載體。
在一些預(yù)防已認(rèn)定有很高的風(fēng)險(xiǎn)患全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的個(gè)體患病的方法的具體實(shí)例中，個(gè)體被施用Vpr蛋白或其功能性片段。優(yōu)選的Vpr蛋白或其功能性片段的給藥量為0.1-100mg/kg體重每天，0.5-50mg/kg體重每天或1.0-10mg/kg體重每天。
在其它具體實(shí)例中，前面所述的預(yù)防已認(rèn)定有很高的風(fēng)險(xiǎn)患全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的個(gè)體患病的方法另外還包括至少一步給上述個(gè)體施用治療有效劑量的一個(gè)抗感染藥劑的步驟。這個(gè)抗感染藥劑優(yōu)選阿米卡星、妥布霉素、奈替霉素、慶大霉素、頭孢菌素、頭孢他啶、拉氧頭孢、碳青霉烯、亞胺培南、噻肟單酰胺菌素、氨芐青霉素、青霉素、酰脲青霉素、奧格門汀、兩性霉素、法昔洛韋或阿昔洛韋?？垢腥舅巹┑慕o藥步驟優(yōu)選與免疫調(diào)節(jié)藥物制備物的給藥步驟同時(shí)進(jìn)行。
在其它具體實(shí)例中，前面所述的預(yù)防已認(rèn)定有很高的風(fēng)險(xiǎn)患全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的個(gè)體患病的方法另外包括的步驟有，監(jiān)控個(gè)體血漿中前炎性細(xì)胞因子和敗血癥標(biāo)志蛋白/狀況的濃度，決定是否需要額外劑量的免疫調(diào)節(jié)藥物組合物，和施用額外劑量的免疫調(diào)節(jié)藥物組合物的步驟。優(yōu)選的，監(jiān)控TNFα的血漿水平并根據(jù)TNFα的血漿水平高于約25pg/ml來決定是否需要施加額外劑量的免疫調(diào)節(jié)藥物組合物。
本發(fā)明的另一個(gè)方面是用于預(yù)防和治療敗血癥的藥物組合物，它包括一個(gè)抗感染藥劑和一個(gè)或多個(gè)從下列小組中選擇的成分，該小組包括Vpr蛋白，Vpr蛋白的一個(gè)功能性片段；一個(gè)可操作的連接于調(diào)節(jié)成分的編碼Vpr蛋白的核酸；和一個(gè)可操作的連接于調(diào)節(jié)成分的編碼Vpr蛋白功能性片段的核酸。優(yōu)選的抗感染藥劑從包含阿米卡星、妥布霉素、奈替霉素、慶大霉素、頭孢菌素、頭孢他啶、拉氧頭孢、碳青霉烯、亞胺培南、噻肟單酰胺菌素、氨芐青霉素、青霉素、酰脲青霉素、奧格門汀、兩性霉素、法昔洛韋和阿昔洛韋的小組中選擇。在全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的治療中，優(yōu)選的藥物組合物另外包括至少一個(gè)佐劑。
本發(fā)明的另一個(gè)方面是用于預(yù)防或治療敗血癥的藥物組合物，它包括一預(yù)防或治療有效劑量的一個(gè)或多個(gè)從下列小組中選擇的成分，該小組包括Vpr蛋白，Vpr蛋白的一個(gè)功能性片段；一個(gè)可操作的連接于調(diào)節(jié)成分的編碼Vpr蛋白的核酸；和一個(gè)可操作的連接于調(diào)節(jié)成分的編碼Vpr蛋白功能性片段的核酸。在一些具體實(shí)例中，藥物組合物按持續(xù)注入的方式制成制劑。在一些具體實(shí)例中，藥物組合物按單次注射的方式制成制劑。
具體實(shí)施例方式
I.定義本文中，術(shù)語“蛋白”和“多肽”可交換使用，都是指包括蛋白，多肽和肽的蛋白質(zhì)成分。
本文中，術(shù)語“個(gè)體”是指定向于本發(fā)明使用的的脊椎動(dòng)物。本發(fā)明所計(jì)劃的可舉例的“個(gè)體”包括但不限于人、高等靈長類，犬，貓，牛，馬，羊，豬，鳥和其它哺乳動(dòng)物。
本文中，術(shù)語“給藥”是指向個(gè)體中遞送多肽?！敖o藥”也指遞送編碼多肽的核酸。該術(shù)語包括但不限于的遞送方式包括口服、肌內(nèi)的、靜脈內(nèi)的、鼻下的、腹膜內(nèi)的、真皮內(nèi)的、胸內(nèi)的、心室內(nèi)的、皮下的、透皮的、局部的、或通過灌洗。本發(fā)明所計(jì)劃的施用模式包括但不限于使用一個(gè)注射器，靜脈內(nèi)管、透皮貼片或無針式注射器。
本文中，Vpr功能性片段是指具削弱個(gè)體或細(xì)胞培養(yǎng)物免疫反應(yīng)能力的Vpr的片段。Vpr的一個(gè)功能性片段能由檢測Vpr片段對人巨噬細(xì)胞和原代淋巴細(xì)胞中β-趨化因子比如MIP-1α、MIP-1β和RANETS產(chǎn)生的影響的分析試驗(yàn)來鑒定Muthumani K等，2000，白細(xì)胞生物學(xué)雜志68366-372(Muthumani K et al.，2000，J.Leukoc.Biol.68366-372)，收錄在此作為參考文獻(xiàn)。能減少人巨噬細(xì)胞或原代淋巴細(xì)胞中β-趨化因子產(chǎn)生的Vpr片段被認(rèn)為是與本發(fā)明相關(guān)的Vpr功能性片段。或者，功能性片段可根據(jù)對Vpr核定位和細(xì)胞周期停滯必須的功能區(qū)域的存在來決定Mahalingam S等，1997，病毒學(xué)雜志，716339-6347(Mahalingam S et al.，1997，J.Virol.716339-6347)；Macreadie，I.G.等，1995，美國科學(xué)院院報(bào)，922770-2774(MacreadieI.G.et al.，1995，Proc.Natl.Acad.Sci.922770-2774)；均收錄在此作為參考文獻(xiàn)。一般來說，功能性片段包含Vpr中的一定長度的氨基酸序列，該長度超過5個(gè)氨基酸，優(yōu)選的長度超過10個(gè)氨基酸，最優(yōu)選的長度超過20個(gè)氨基酸。在一些具體實(shí)例中，功能性片段包含Vpr氨基端30個(gè)最氨基端殘基的一個(gè)5-30個(gè)殘基的片段。在一些具體實(shí)例中，功能性片段包含Vpr羧基端30個(gè)最羧基端殘基的一個(gè)5-30個(gè)殘基的片段。
本文中，全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的治療是指減少、緩解或消除與全身炎性反應(yīng)綜合癥和敗血癥的相關(guān)臨床癥狀，和與MODS相關(guān)的那些狀況，比如不同程度發(fā)熱、低血毒癥，呼吸急促，心動(dòng)過速，內(nèi)皮發(fā)炎，心肌功能不全，高灌注，精神狀態(tài)改變，血管衰竭，和最終的器官損傷如急性呼吸困難綜合癥，凝血病，心臟衰竭，腎衰竭，休克，和/或昏迷。
II.本發(fā)明優(yōu)選實(shí)例描述本發(fā)明提供預(yù)防有病情發(fā)展風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體患全身炎性反應(yīng)綜合癥(SIRS)的改進(jìn)方法，和治療已患全身炎性反應(yīng)綜合癥個(gè)體的方法。全身炎性反應(yīng)綜合癥預(yù)防和治療方法使用HIV病毒用來躲避和破壞被感染個(gè)體的免疫系統(tǒng)的武器之一Vpr蛋白和/或編碼它的核酸分子。在HIV衍化的武器的武裝下，通過減少個(gè)體免疫反應(yīng)的過度刺激這個(gè)全身炎性反應(yīng)綜合癥發(fā)生的直接原因，敗血癥預(yù)防和治療更加有效。此外，本發(fā)明使用HIV Vpr蛋白和/或編碼它的核酸分子來治療患敗血癥或有風(fēng)險(xiǎn)發(fā)展為敗血癥的個(gè)體。
本發(fā)明來源于Vpr多肽的遞送可抑制包括與全身炎性反應(yīng)綜合癥和敗血癥相關(guān)的那些細(xì)胞免疫反應(yīng)這個(gè)驚人的發(fā)現(xiàn)。盡管沒有限制本發(fā)明到任何一個(gè)機(jī)制，Vpr抑制包括TNFα的原型Th1型細(xì)胞因子的合成，并轉(zhuǎn)換抗體反應(yīng)偏向Th2型。此外，Vpr抑制CC趨化因子和和解CD8+細(xì)胞效應(yīng)功能。數(shù)據(jù)支持Vpr干擾參與免疫活化的共刺激分子結(jié)論。因此，當(dāng)遞送給患全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥或有風(fēng)險(xiǎn)發(fā)展為全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的個(gè)體時(shí)，Vpr減少導(dǎo)致全身性TNFα釋放的免疫反應(yīng)。當(dāng)給患敗血癥的個(gè)體遞送時(shí)，Vpr減少導(dǎo)致最終敗血癥休克的全身性免疫反應(yīng)。特別令人驚奇的發(fā)現(xiàn)是一旦敗血癥得到有效治療，本發(fā)明的方法可預(yù)防和保護(hù)全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的復(fù)發(fā)或繼發(fā)。
Vpr的氨基酸序列和編碼它的DNA序列在1999年2月23日的美國專利No.5,874,225中有描述，收錄在此作為參考文獻(xiàn)，包括專利和與其中相關(guān)的出版物。Vpr片段在下列專利中有描述，1994年2月22日申請的PCT/US94/02191專利，1995年9月21日申請的PCT/US95/12344專利和1998年8月14日申請的PCT/US98/16890專利(每個(gè)和各自向?qū)?yīng)的美國國家階段申請要求的優(yōu)先權(quán)都收錄在此作為參考文獻(xiàn))，和1998年6月9日出版的美國專利No.5,763,190，收錄在此作為參考文獻(xiàn)。收錄在此作為參考文獻(xiàn)的1993年12月15日申請的美國專利08/167,608和1994年1月26日申請的PCT/US94/00899描述了包括Vpr功能性片段作為病毒顆粒部分的重組病毒顆粒。Vpr蛋白的突變分析已鑒定了Vpr核定位和細(xì)胞周期停滯活性所需要的獨(dú)特功能區(qū)域Mahalingam，S.等，1997，病毒學(xué)雜志716339-6347(Mahalingam，S.et al.，1997，J.Virol.716339-6347)；Macreadie，I.G.等，1995，美國科學(xué)院院報(bào)922770-2774(Macreadie I.G.et al.，1995，Proc.Natl.Acad.Sci.，922770-2774)；兩者均收錄在此作為參考文獻(xiàn)。
A.預(yù)防全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的方法本發(fā)明提供了一個(gè)預(yù)防被認(rèn)為有高風(fēng)險(xiǎn)患全身炎性反應(yīng)綜合癥的個(gè)體患病的方法。在一個(gè)優(yōu)選具體實(shí)例中，個(gè)體被認(rèn)為有很高的風(fēng)險(xiǎn)發(fā)展成敗血癥。根據(jù)本發(fā)明，治療有風(fēng)險(xiǎn)發(fā)展為過度的全身性免疫反應(yīng)的方法包括給個(gè)體施用一個(gè)預(yù)防有效劑量的Vpr蛋白，可以Vpr蛋白或其一個(gè)功能性片段的形式，或以一個(gè)編碼Vpr蛋白或其功能性片段的核酸的形式，或兩種或多種的組合形式。當(dāng)一個(gè)編碼Vpr蛋白或其功能性片段的核酸被遞送到個(gè)體時(shí)，編碼序列可操作的與調(diào)節(jié)成分相連接。一旦傳遞到個(gè)體，編碼Vpr蛋白的核酸在個(gè)體中表達(dá)并合成Vpr蛋白。在一些具體實(shí)例中，Vpr是以含Vpr蛋白和/或其功能性片段的編碼序列的核酸分子的形式遞送的。在一些具體實(shí)例中，Vpr和/或其功能性片段是以蛋白形式遞送的。無論Vpr蛋白是以蛋白形式遞送的，或是以編碼它的核酸表達(dá)的，一旦被遞送到個(gè)體，它的存在會(huì)抑制不希望的免疫反應(yīng)。
在另一個(gè)具體實(shí)例中，預(yù)防全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的方法的附加步驟包括監(jiān)控個(gè)體血漿中前炎性細(xì)胞因子和敗血癥標(biāo)志蛋白/狀況的濃度，決定是否監(jiān)控的細(xì)胞因子/標(biāo)記指示病人患全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥，注射額外劑量的Vpr蛋白或其功能性片段，和/或編碼Vpr蛋白和/或其功能性片段的核酸。適用于監(jiān)控的前炎性細(xì)胞因子和敗血癥標(biāo)志蛋白/狀況包括但不限于細(xì)胞因子如TNFα、IL-1、IL-6、IL-8、IL-12；趨化因子比如IL-8、PBP、β-TG、NAP-2、GROα、GROβ、GRO、IP-10、SDF-1、MIP-1α、MIP-1β、MCP-1、RANTES、嗜酸細(xì)胞活化趨化因子、淋巴細(xì)胞激活素、神經(jīng)趨化素；和標(biāo)志蛋白/情況比如天青蛋白、E.coli和其它革蘭氏陰性細(xì)菌內(nèi)毒素、白細(xì)胞產(chǎn)生的氧化劑、降血鈣素原、白細(xì)胞高親和性Fc受體(CD64)；血清C活化蛋白(CRP)；神經(jīng)表面CD11b水平和選擇的未飽和自由脂肪酸與飽和自由脂肪酸的比例。在優(yōu)選的具體實(shí)例中，血漿中TNFα的濃度是被監(jiān)控的。在優(yōu)選的具體實(shí)例中，當(dāng)血漿中TNFα濃度高于100pg/ml時(shí)個(gè)體被鑒定患全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥，更優(yōu)選的高于50pg/ml，最優(yōu)選的是高于25pg/ml。
有很高風(fēng)險(xiǎn)患全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的個(gè)體包括但不限于有夸大免疫反應(yīng)傾向的人，比如因存在IL-1基因等位基因而發(fā)生的這種夸大免疫反應(yīng)傾向(美國專利No.6,251,598，收錄在此作為參考文獻(xiàn))。有很高風(fēng)險(xiǎn)患敗血癥的個(gè)體包括但不限于有使他們對血流侵襲敏感的潛在的疾病或情況，特別是那些住院的個(gè)體，或燒傷、外傷、負(fù)傷或外科手術(shù)病人。使病人對血流侵襲敏感的因素包括但不限于一個(gè)通常衰弱的免疫系統(tǒng)，比如在新生兒或老人中可見的，或?qū)е赂腥驹黾拥木植棵舾械那闆r或疾病，比如損傷循環(huán)、糖尿病和尿毒癥。
本文中所用的短語“預(yù)防有效劑量”是指預(yù)防有風(fēng)險(xiǎn)發(fā)展成全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的個(gè)體發(fā)生全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥相關(guān)的病癥的有效劑量。預(yù)防有效劑量優(yōu)選減少至少30％，更優(yōu)選的至少50％，最優(yōu)選的至少90％，TNFα血漿水平臨床意義增加。TNFα血漿水平臨床意義增加是指高于25pg/ml血漿的增加，優(yōu)選的高于50pg/ml血漿，最優(yōu)選的高于100pg/ml血漿。測定血漿TNFα水平的方法是專業(yè)領(lǐng)域已知的美國專利No.6,168,790；美國專利No.6,063,764；Creasey等，1991，休克循環(huán)3384-9(Creasyet al.，1991 Circ.Shock 3384-9)；收錄在此作為參考文獻(xiàn)。
應(yīng)該注意的是在正常的健康人或試驗(yàn)動(dòng)物中TNFα水平估計(jì)不高于10pg/mlMichie等，1988，藥物新工程雜志3181481-1486(Michie et al.，1988，New Eng J.Med.3181481-1486)；Mathison等，1988，臨床研究雜志811925(Mathison et al，1988，J.Clin.Invest.，811925)；和Waage等，1987，手術(shù)刀1355-357(Waage et al.，1987，Lancet 1355-357)；收錄在此作為參考文獻(xiàn)。在造成敗血癥的感染中，暴露于革蘭氏陰性菌脂多糖內(nèi)毒素(LPS)后，TNFα水平顯示10-20倍的提高以至達(dá)到400pg/ml血漿。血清TNFα水平與革蘭氏陰性菌、含LPS的腦膜炎球菌感染的致死結(jié)果顯示有很好的相關(guān)性Waage等，同上，1987(Waage et al.，supra，1987)。進(jìn)一步在近人類的靈長類動(dòng)物的敗血癥動(dòng)物模型中注意到增長的TNFα，并且這些變化與致死率直接相關(guān)Tracey等，自然330662-664，1987(Tracey et al.，Nature 330662-664，1987)，收錄在此作為參考文獻(xiàn)。
Vpr蛋白和/或其功能性片段的預(yù)防有效的每日劑量是0.1-100mg每公斤體重。通常0.5-50，優(yōu)選1-10mg每公斤體重每天。編碼Vpr蛋白和/或其功能性片段的核酸能與上述藥劑共同施用。編碼Vpr蛋白和/或其功能性片段的核酸的預(yù)防有效劑量是每劑量1ng-10mg核酸；在一些具體實(shí)例中，是約0.1-2000μg DNA。在一些優(yōu)選的具體實(shí)例中，治療活性劑量是約1-1000μgDNA。在一些優(yōu)選的具體實(shí)例中，治療活性劑量是約1-500μg DNA。在一些優(yōu)選的具體實(shí)例中，治療活性劑量是約25-250μg DNA。最優(yōu)選的，治療活性劑量是約100μg DNA。
預(yù)防個(gè)體患全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的劑量控制可包括在一次或多次劑量中施用一種或多種編碼Vpr蛋白和/或其功能性片段的核酸和Vpr蛋白和/或其功能性片段。按每天1-6次分開的劑量或按持續(xù)釋放的形式的Vpr的每天配藥可有效的獲得希望的結(jié)果。Vpr蛋白和/或其功能性片段，和/或編碼Vpr蛋白和/或其功能性片段的核酸的施用可每天重復(fù)1-6次，1至幾天或數(shù)周，或直到導(dǎo)致有風(fēng)險(xiǎn)發(fā)展成全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的因素減少。在優(yōu)選的具體實(shí)例中，Vpr蛋白和/或其功能性片段，和/或編碼Vpr蛋白和/或其功能性片段的核酸按Vpr蛋白持續(xù)注入的方式施用。在另一個(gè)優(yōu)選的具體實(shí)例中，隨持續(xù)注入Vpr蛋白和/或其功能性片段，和/或編碼它們的核酸后，Vpr蛋白和/或其功能性片段，和/或編碼它們的核酸按丸劑形式施用。
在其它具體實(shí)例中，預(yù)防全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥方法包括的附加步驟為施用一治療有效劑量的抗感染藥劑，典型的有對綠膿桿菌、腸桿菌屬、吲哚陽性變形桿菌屬和沙雷菌屬有抗性的氨基酸糖苷如阿米卡星、妥布霉素、奈替米星和慶大霉素、頭孢菌素如頭孢他啶、相關(guān)的β-內(nèi)酰胺試劑如拉氧頭孢；碳青霉烯類如亞胺培南；單環(huán)菌素藥劑如噻肟單酰胺菌素；氨芐青霉素和廣譜青霉素(如青霉素酶抗性青霉素、酰脲青霉素或抗假單胞菌青霉素或奧格門汀)。同抗病毒藥劑如法昔洛韋和阿昔洛韋一樣，抗真菌藥劑，兩性霉素和類似物也包括在抗感染藥劑定義中。
本文中所用的術(shù)語“抗感染藥劑的治療劑量”是指足夠達(dá)到細(xì)菌或真菌殺死的血漿濃度的量，或足夠減慢接受治療的個(gè)體中病毒復(fù)制的量。一般認(rèn)為對人施用安全的抗感染藥劑的治療劑量是專業(yè)人士已知的并是可變的，用抗生素、殺真菌劑或抗病毒試劑和感染個(gè)體的治療類型也是已知的。用于實(shí)施本發(fā)明的抗生素包括那些按《醫(yī)師的試驗(yàn)臺參考書》，Huff，B.B編輯，醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)公司，歐雷德爾，新澤西州(1989)Physicians’Desk Reference，Huff，B.B.ed.，Medical Economics Company，Inc.，Oradell.，N.J.(1989)中描述的方法制成制劑的抗生素，抗細(xì)菌和殺菌藥劑，該書收錄在此作為參考文獻(xiàn)。
此外，治療全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的各種藥劑與本發(fā)明成分的聯(lián)用也是有用的。它們包括類交感神經(jīng)胺(血管加壓素)如去甲腎上腺素、腎上腺素、異丙基腎上腺素、多巴胺和多巴酚丁胺；抗感染藥劑如甲基強(qiáng)的松龍、消炎痛和苯基丁氮酮；和皮質(zhì)類固醇如倍他米松、氫化可的松、甲基強(qiáng)的松龍或地塞米松；抗凝血?jiǎng)┤绺嗡兀鼓窱II或針對特定情況或安排的香豆素型藥物；利尿素如利尿磺胺或利尿酸；和鴉片劑對抗劑和β內(nèi)啡肽如納洛酮；額外的腫瘤壞死因子或白介素-1的對抗劑；酚噻嗪；抗組胺劑；高血糖素；α-腎上腺素封閉藥劑、血管舒張劑；血漿擴(kuò)張劑；紅細(xì)胞；血小板；低溫沉淀劑；新鮮凍存的血漿；細(xì)菌滲透蛋白；克林霉素；和(脂A)的抗體，E.coli的J5突變體或內(nèi)毒素核糖脂。制備這些佐劑的方法在許多文獻(xiàn)中有描述。
抗感染藥劑能與Vpr組合物同時(shí)或分開施用。在一個(gè)優(yōu)選的具體實(shí)例中，抗感染藥劑與Vpr或其片段一起施用。治療全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥藥劑所用的一個(gè)或多個(gè)佐劑也能與Vpr蛋白或其功能性片段，和/或編碼Vpr蛋白或其功能性片段的核酸一起施用。佐劑能分別給藥，或與Vpr蛋白和/或Vpr編碼核酸制成相同的制劑給藥。在一個(gè)優(yōu)選的具體實(shí)例中，佐劑與Vpr蛋白或其功能性片段和/或編碼Vpr蛋白或其功能性片段的核酸一起施用。
B.治療全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的方法本發(fā)明的另一方面提供一個(gè)治療已被診斷患全身炎性反應(yīng)綜合癥個(gè)體的方法。在一個(gè)優(yōu)選的具體實(shí)例中，個(gè)體已被診斷患敗血癥。根據(jù)本發(fā)明，治療有過度的全身性免疫反應(yīng)的個(gè)體的方法包括給個(gè)體施用Vpr蛋白，以Vpr蛋白或其功能性片段的形式，或以編碼Vpr蛋白或其功能性片段的核酸的形式，或以兩種或多種的組合形式。當(dāng)編碼Vpr蛋白或其功能性片段的核酸被遞送到個(gè)體時(shí)，編碼序列可操作的連接于調(diào)節(jié)成分。一旦遞送到個(gè)體，編碼Vpr蛋白的核酸序列在體內(nèi)表達(dá)并合成Vpr蛋白。在一些具體實(shí)例中，Vpr是以有Vpr蛋白和/或其功能性片段編碼序列的核酸分子形式遞送。在一些具體實(shí)例中，Vpr和/或其功能性片段以蛋白形式遞送。無論是以蛋白形式遞送的或是編碼它的核酸表達(dá)的，一旦遞送到個(gè)體，Vpr蛋白的存在能抑制或下調(diào)不希望的免疫反應(yīng)。
在另一個(gè)具體實(shí)例中，治療全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的方法包含額外的步驟，監(jiān)控個(gè)體前炎性因子和敗血癥標(biāo)志蛋白/狀況血漿中的濃度，決定是否監(jiān)控的細(xì)胞因子/標(biāo)志指示個(gè)體患全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥和施用額外劑量的Vpr蛋白和/或其功能性片段。適用于監(jiān)控的前炎性細(xì)胞因子和敗血癥標(biāo)志蛋白/狀況包括但不限于細(xì)胞因子如TNFα、IL-1、IL-6、IL-8、IL-12；趨化因子比如IL-8、PBP、β-TG、NAP-2、GROα、GROβ、GRO、IP-10、SDF-1、MIP-1α、MIP-1β、MCP-1、RANTES、嗜酸細(xì)胞活化趨化因子、淋巴細(xì)胞激活素、神經(jīng)趨化素；和標(biāo)志蛋白/狀況比如天青蛋白、E.coli和其它革蘭氏陰性細(xì)菌內(nèi)毒素、白細(xì)胞產(chǎn)生的氧化劑、降血鈣素原、白細(xì)胞高親和性Fc受體(CD64)；血清C活化蛋白(CRP)；神經(jīng)表面CD11b水平和選擇的未飽和自由脂肪酸與飽和自由脂肪酸的比例。在優(yōu)選的具體實(shí)例中，血漿中TNFα的濃度是被監(jiān)控的。在優(yōu)選的具體實(shí)例中，當(dāng)血漿中TNFα濃度高于100pg/ml時(shí)個(gè)體被鑒定患全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥，更優(yōu)選的高于50pg/ml，最優(yōu)選的是高于25pg/ml。
個(gè)體可通過一個(gè)或多個(gè)臨床癥狀診斷患全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥，如(1)體溫＞38℃或＜36℃；(2)心跳速率＞90跳每分鐘；(3)呼吸速度＞20次吸氣每分鐘或PaCO2＜32mm Hg；(4)白細(xì)胞計(jì)數(shù)＞12000/cumm，＜4000/cu mm，或＞10％不成熟(帶狀)形式；(5)器官功能障礙，高灌注或高血壓Bone等，1992，胸1011644(Bone et al.，1992，Chest 1011644)收錄在此作為參考文獻(xiàn)，也包括專業(yè)領(lǐng)域已知的其它方法。可通過使用許多專業(yè)領(lǐng)域已知的診斷檢測法來診斷個(gè)體是否患敗血癥，這些方法包括但不限于Centocor公司的TNF-α免疫測定法(WO 90/06314，收錄在此作為參考文獻(xiàn))，該法使用了兩個(gè)抗體檢測病人血液中這個(gè)感染調(diào)節(jié)子的水平。美國國家航空和宇宙航行局(NASA)建立的通過提取的天青蛋白檢測病人血液中假單胞桿菌測定法，并用一個(gè)單克隆抗體對它進(jìn)行檢測(美國專利No.5,210,019，收錄在此作為參考文獻(xiàn))。BioWhittaker的敗血癥測定法和Seikagaku Kyoto公司(東京，日本)的美洲鱟鱟試劑測定法？檢測病人血液中E.Coli內(nèi)毒素的水平。其它敗血癥診斷測定法檢測敗血癥反應(yīng)期間白細(xì)胞產(chǎn)生的氧化劑的存在(美國專利No.5,804,370，收錄在此作為參考文獻(xiàn))，敗血癥標(biāo)志肽降鈣素原(美國專利No.5,639,617，收錄在此作為參考文獻(xiàn))，白細(xì)胞高親和性Fc受體(CD64)表達(dá)Davis等，1995，血液學(xué)試驗(yàn)13(Daviset al.，Laboratory Hematology 13)，收錄在此作為參考文獻(xiàn)；血清C-活化蛋白(CRP)Drews等，1995，紐約學(xué)術(shù)科學(xué)年鑒762398(Drews et al.，1995，Ann.NY Acad.Sci.762398)；Kawamura和Nishida，1995，兒科學(xué)8410(Kawamura and Nishida，1995，Acta Paediatr.8410)，均收錄在此作為參考文獻(xiàn)；中性粒細(xì)胞表面CD11b水平(美國專利No.6,077,665，收錄在此作為參考文獻(xiàn))，和選擇性未飽和自由脂肪酸與飽和自由脂肪酸的比例(美國專利No.5,780,237，收錄在此作為參考文獻(xiàn))。
本文中短語“治療有效劑量”是指足夠緩解或減少敗血癥或全身炎性反應(yīng)綜合癥相關(guān)的癥狀嚴(yán)重程度的劑量。一般來說，治療有效劑量優(yōu)選減少至少30％，更優(yōu)選的至少50％，最優(yōu)選的至少90％，TNFα血漿水平臨床意義增加。TNFα血漿水平臨床意義增加是指高于25pg/ml血漿的增加，優(yōu)選的高于50pg/ml血漿，最優(yōu)選的高于100pg/ml血漿。測定血漿TNFα水平的方法是專業(yè)領(lǐng)域已知的美國專利No.6,168,790；美國專利No.6,063,764；Creasey等，1991，休克循環(huán)3384-9(Creasy et al.，1991 Circ.Shock 3384-9)；收錄在此作為參考文獻(xiàn)。
應(yīng)該注意的是在正常的健康人或試驗(yàn)動(dòng)物中TNFα水平估計(jì)不高于10pg/mlMichie等，1988，藥物新工程雜志3181481-1486(Michie et al.，1988，New Eng J.Med.3181481-1486)；Mathison等，1988，臨床研究雜志811925(Mathison et al.，1988，J.Clin.Invest.，811925)；和Waage等，1987，手術(shù)刀1355-357(Waage et al.，1987，Lancet 1355-357)；收錄在此作為參考文獻(xiàn)。在造成敗血癥的感染中，暴露于革蘭氏陰性菌脂多糖內(nèi)毒素(LPS)后，TNFα水平顯示10-20倍的提高以至達(dá)到400pg/ml血漿。血清TNFα水平與革蘭氏陰性菌、含LPS的腦膜炎球菌感染的致死結(jié)果顯示有很好的相關(guān)性Waage等，同上，1987(Waage et al.，supra，1987)。進(jìn)一步在近人類的靈長類動(dòng)物的敗血癥動(dòng)物模型中注意到增長的TNFα，并且這些變化與致死率直接相關(guān)Tracey等，自然330662-664，1987(Tracey et al.，Nature 330662-664，1987)，收錄在此作為參考文獻(xiàn)。
Vpr蛋白和/或其功能性片段的每日治療有效劑量能是0.1-100mg每公斤體重。通常0.5-50，優(yōu)選1-10mg每公斤體重每天。編碼Vpr蛋白和/或其功能性片段的核酸能與上述藥劑共同施用。編碼Vpr蛋白和/或其功能性片段的核酸的治療有效劑量是每劑量1ng-10mg核酸；在一些具體實(shí)例中，是約0.1-2000μg DNA。在一些優(yōu)選的具體實(shí)例中，治療活性劑量是約1-1000μgDNA。在一些優(yōu)選的具體實(shí)例中，治療活性劑量是約1-500μg DNA。在一些優(yōu)選的具體實(shí)例中，治療活性劑量是約25-250μg DNA。最優(yōu)選的，治療活性劑量是約100μg DNA。
預(yù)防個(gè)體全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的劑量控制可包括在一次或多次劑量中施用一種或多種編碼Vpr蛋白和/或其功能性片段的核酸和Vpr蛋白和/或其功能性片段。按每天1-6次分開的劑量或按持續(xù)釋放的形式進(jìn)行的Vpr的每天配藥可有效的獲得希望的結(jié)果。Vpr蛋白和/或其功能性片段，和/或編碼Vpr蛋白和/或其功能性片段的核酸的施用可每天重復(fù)1-6次，施用1至幾天或數(shù)周，或直到導(dǎo)致有風(fēng)險(xiǎn)發(fā)展成全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的因素減少。在優(yōu)選的具體實(shí)例中，Vpr蛋白和/或其功能性片段，和/或編碼Vpr蛋白和/或其功能性片段的核酸按Vpr蛋白持續(xù)注入的方式施用。在另一個(gè)優(yōu)選的具體實(shí)例中，隨持續(xù)注入Vpr蛋白和/或其功能性片段，和/或編碼它們的核酸后，Vpr蛋白和/或其功能性片段，和/或編碼它們的核酸按丸劑形式施用。
在其它具體實(shí)例中，治療全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥方法包括的附加步驟為施用一治療有效劑量的抗感染藥劑，典型的有對綠膿桿菌、腸桿菌屬、吲哚陽性變形桿菌屬和沙雷菌屬有抗性的氨基酸糖苷如阿米卡星、妥布霉素、奈替米星和慶大霉素、頭孢菌素如頭孢他啶、相關(guān)的β-內(nèi)酰胺試劑如拉氧頭孢；碳青霉烯類如亞胺培南；單環(huán)菌素藥劑如噻肟單酰胺菌素；氨芐青霉素和廣譜青霉素(如青霉素酶抗性青霉素、酰脲青霉素或抗假單胞菌青霉素或奧格門汀)。同抗病毒藥劑如法昔洛韋和阿昔洛韋一樣，抗真菌藥劑，兩性霉素和類似物也包括在抗感染藥劑定義中。
本文中所用的術(shù)語“抗感染藥劑的治療劑量”是指足夠達(dá)到細(xì)菌或真菌殺死的血漿濃度的量，或足夠減慢接受治療的個(gè)體中病毒繁殖的量。一般認(rèn)為對人施用安全的抗感染藥劑的治療劑量是專業(yè)人士已知的并是可變的，用抗生素、殺真菌劑或抗病毒試劑和治療感染個(gè)體的類型也是已知的。用于實(shí)施本發(fā)明的抗生素包括那些按《醫(yī)師的試驗(yàn)臺參考書》，Huff，B.B編輯，醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)公司，歐雷德爾，新澤西州(1989)Physicians’Desk Reference，Huff，B.B.ed.，Medical Economics Company，Inc.，Oradell.，N.J.(1989)中描述的制劑方法制成的抗生素，抗細(xì)菌和殺菌藥劑，該書收錄在此作為參考文獻(xiàn)。
此外，治療全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的各種佐劑與本發(fā)明成分的聯(lián)用也是有用的。它們包括類交感神經(jīng)胺(血管加壓素)如去甲腎上腺素、腎上腺素、異丙基腎上腺素、多巴胺和多巴酚丁胺；抗感染藥劑如甲基強(qiáng)的松龍、消炎痛和苯基丁氮酮；和皮質(zhì)類固醇如倍他米松、氫化可的松、甲基強(qiáng)的松龍或地塞米松；抗凝血?jiǎng)┤绺嗡兀鼓窱II或針對特定情況或安排的香豆素型藥物；利尿素如利尿磺胺或]利尿酸；和鴉片劑對抗劑和β內(nèi)啡肽如納洛酮；附加的腫瘤壞死因子或白介素-1的對抗劑；酚噻嗪；抗組胺劑；高血糖素；α-腎上腺素封閉藥劑、血管舒張劑；血漿擴(kuò)張劑；紅細(xì)胞；血小板；低溫沉淀劑；新鮮凍存的血漿；細(xì)菌滲透蛋白；克林霉素；和(脂A)的抗體，E.coli的J5突變體或內(nèi)毒素核糖脂。制備這些佐劑的方法在許多文獻(xiàn)中有描述。
抗生素能與Vpr蛋白同時(shí)或分開施用。在一個(gè)優(yōu)選的具體實(shí)例中，抗生素與Vpr一起施用。治療全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥藥劑所用的一個(gè)或多個(gè)佐劑也能與Vpr蛋白或其功能性片段，和/或編碼Vpr蛋白或其功能性片段的核酸一起施用。佐劑能分開給藥，或與Vpr蛋白和/或Vpr編碼核酸制成相同的制劑給藥。在一個(gè)優(yōu)選的具體實(shí)例中，佐劑與Vpr蛋白或其功能性片段和/或編碼Vpr蛋白或其功能性片段的核酸一起施用。
在一些本發(fā)明的預(yù)防和治療方法的具體實(shí)例中，一個(gè)或多個(gè)Vpr、其一個(gè)功能性片段、編碼Vpr的一個(gè)核酸或編碼Vpr功能性片段的一個(gè)核酸的聯(lián)合物向病人施用。在一些具體實(shí)例中，Vpr或其功能性片段按與編碼Vpr的核酸相同的制劑形式對個(gè)體施用。在其它具體實(shí)例中，Vpr或其功能性片段按與編碼Vpr的核酸不同的制劑形式對個(gè)體施用。
C.預(yù)防和治療全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥方法的方案通過直接DNA給藥向細(xì)胞遞送蛋白如Vpr，這樣的組合物和方法已有多種方案報(bào)道。這些方法的例子在美國專利No.5,593,972，美國專利No.5,739,118，美國專利No.5,580,859，美國專利No.5,589,466，美國專利No.5,703,055，美國專利No.5,622,712，美國專利No.5,459,127，美國專利No.5,676,954，美國專利No.5,614,503，和PCT申請專利PCT/US95/12502中都有描述，每個(gè)都收錄在此作為參考文獻(xiàn)。通過直接DNA給藥向細(xì)胞遞送的組合物和方法在PCT/US90/01515，PCT/US93/02338，PCT/US93/048131和PCT/US94/00899中有描述，每個(gè)都收錄在此作為參考文獻(xiàn)。除在這些申請專利中描述的遞送方案外，可供選擇的遞送DNA的方法在美國專利No.4,945,050和5,036,006中有描述，兩者都收錄在此作為參考文獻(xiàn)。核酸分子也能用脂介導(dǎo)的DNA轉(zhuǎn)染法傳遞，如在美國專利No.4,235,871，美國專利No.4,241,046和美國專利No.4,394,448中有描述，每個(gè)都收錄在此作為參考文獻(xiàn)。
包含有編碼Vpr序列的核酸的制劑根據(jù)施用的方式和位點(diǎn)制成。這種制劑在專業(yè)領(lǐng)域是已知的。除了核酸和可選的多肽外，制劑也可包括緩沖液、賦形劑、穩(wěn)定劑、載體和稀釋劑。
D.預(yù)防和治療全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥的藥物組合物包含Vpr蛋白或其一個(gè)片段和藥用載體和稀釋劑的藥物組合物可與根據(jù)選擇的施用方式選擇的組合物由普通專業(yè)人員制成制劑。合適的藥物載體在最新版的《Remington的藥物科學(xué)》(Reminton’s Pharmaceutical Sciences)上有描述，該書為專業(yè)領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)參考書，收錄在此作為參考文獻(xiàn)。
對腸胃外的給藥，Vpr蛋白或其片段能與藥用腸胃外媒介物相聯(lián)系，制成比如按溶液、懸浮物、乳劑或凍干粉形式的制劑?？膳e例的這種媒介物如水、鹽水、Ringer式溶液、葡萄糖溶液和5％人血清白蛋白。脂和無水媒介物如固體油也是可以使用的。媒介物或凍干粉可含有保持等滲透性(例如氯化鈉、甘露醇)和化學(xué)穩(wěn)定性(例如緩沖液和防腐劑)的添加物。制劑按通用方法除菌。例如，適用于注射方式給藥的腸胃外組合物可按1.5％的活性成分重量溶于0.9％氯化鈉溶液中。
包含Vpr蛋白或其片段的藥物組合物可按任何使活性藥劑到達(dá)哺乳動(dòng)物體內(nèi)藥劑作用位點(diǎn)的方式給藥。因?yàn)楫?dāng)以口服的形式給藥時(shí)蛋白被降解，所以通常使用腸胃外給藥，例如靜脈內(nèi)、皮下、肌內(nèi)給藥來優(yōu)化吸收。
給藥的劑量根據(jù)以下因素而改變，如藥效性質(zhì)；它的給藥模式和路徑；受藥者的年齡、健康和體重；癥狀的性質(zhì)和程度；并行治療的類型；和治療頻率。通常，Vpr蛋白的每天劑量能為0.1-100mg每公斤體重。一般為0.5-50，優(yōu)選1-10mg每公斤每天，按分開的劑量每天1-6次或持續(xù)釋放的形式或持續(xù)給藥能有效獲得希望的結(jié)果。
本發(fā)明的另一個(gè)方面描述了包含有編碼Vpr的核酸分子和藥用載體或稀釋劑的藥物組合物。根據(jù)本發(fā)明，編碼Vpr蛋白的遺傳材料以可表達(dá)形式向個(gè)體遞送。遺傳材料，DNA或RNA，被個(gè)體的細(xì)胞吸收并表達(dá)。因而產(chǎn)生的Vpr能抑制免疫反應(yīng)，無論是載體免疫原直接引起的免疫反應(yīng)或是不希望的免疫反應(yīng)如與自體免疫和感染疾病和狀況和移植過程相關(guān)聯(lián)的免疫反應(yīng)。因此，包含編碼Vpr遺傳材料的藥物組合物與包含Vpr蛋白的藥物組合物一樣有用。
可操作的與個(gè)體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)必須的調(diào)節(jié)成分連接的編碼Vpr蛋白的核酸序列可以用一系列策略的藥物組合物的形式來傳遞，該策略包括但不限于病毒載體如腺病毒或反轉(zhuǎn)錄病毒載體或直接核酸轉(zhuǎn)化。使用病毒載體遞送編碼目的蛋白的核酸的方法已廣泛報(bào)道。重組病毒載體如反轉(zhuǎn)錄病毒載體或腺病毒載體用常規(guī)方法和初始材料制備。重組病毒載體包括編碼Vpr的核酸序列。這個(gè)載體與藥用載體或稀釋劑結(jié)合。獲得的藥用制備物可給個(gè)體施用。一旦個(gè)體感染病毒載體，Vpr在感染細(xì)胞中產(chǎn)生。
或者，包含編碼Vpr核酸的分子可按不使用感染性載體的藥物組合物的方式施用。核酸分子可是DNA或RNA，優(yōu)選DNA。DNA分子可為線形或環(huán)形，優(yōu)選質(zhì)粒。核酸分子與藥用載體或稀釋劑結(jié)合。
根據(jù)本發(fā)明，包含編碼Vpr蛋白的核酸序列的藥物組合物可直接施用到人體，或在體外傳遞到與個(gè)體分離、給藥后重新移入的細(xì)胞。通過任一途徑，遺傳材料被引入存在于個(gè)體體內(nèi)的細(xì)胞。優(yōu)選的給藥途徑包括肌內(nèi)的、腹膜內(nèi)的、真皮內(nèi)的和皮下注射?；蛘?，藥物組合物可通過不同的方式引入到從個(gè)體分離的細(xì)胞中。這些方式包括，例如，轉(zhuǎn)染、電轉(zhuǎn)化和基因槍法。核酸分子被細(xì)胞吸收后，它們被重新植入個(gè)體。
根據(jù)本發(fā)明的這方面的藥物組合物包含約1ng到10mg核酸在制劑中；在一些具體實(shí)例中，約0.1-2000μg DNA。在一些優(yōu)選的具體實(shí)例中，藥物組合物包含約1-1000μg DNA。在一些優(yōu)選具體實(shí)例中，藥物組合物約含1-500μg DNA。在一些優(yōu)選具體實(shí)例中，藥物組合物約含25-250μg DNA。最優(yōu)選的，藥物組合物約含100μg DNA。
根據(jù)本發(fā)明的這方面的藥物組合物是根據(jù)使用的給藥模式來制成制劑的。普通專業(yè)人士能容易的將編碼Vpr的核酸制成制劑。在以注射為選擇的給藥模式的例子中，使用無菌、等滲、無熱源的制劑。一般來說，等滲的添加物包括氯化鈉、葡萄糖、甘露醇、三梨醇和乳糖。等滲溶液如磷酸鹽緩沖液是優(yōu)選的。穩(wěn)定劑包括明膠和白蛋白。
核酸表達(dá)的調(diào)節(jié)成分包括啟動(dòng)子、起始密碼子、終止密碼子和多聚腺苷酸信號。這些調(diào)節(jié)成分必須可操作的與編碼目的多肽和可選的Vpr多肽的序列連接，并且調(diào)節(jié)成分必須是按核酸形式給藥的個(gè)體能使用的。例如，起始和終止密碼子必須與編碼序列同一框架。使用的啟動(dòng)子和多聚腺苷酸信號也必須在個(gè)體的細(xì)胞內(nèi)是有功能的。
可舉例的用于實(shí)施本發(fā)明的啟動(dòng)子包括但不限于猿病毒40(SV40)的啟動(dòng)子、鼠乳腺致癌因子(MMTV)、人免疫缺陷型病毒(HIV)例如HIV長末端重復(fù)(LTR)啟動(dòng)子、莫洛尼病毒、ALV、巨細(xì)胞病毒(CMV)如CMV介導(dǎo)早期啟動(dòng)子、EB病毒(EBV)、勞斯肉瘤病毒(RSV)，也包括人類基因如人肌動(dòng)蛋白、人肌凝蛋白、人血紅蛋白、人肌肉肌醇蛋白和人金屬硫蛋白中的啟動(dòng)子。
可舉例的用于實(shí)施本發(fā)明的多聚腺苷酸信號包括但不限于SV40多聚腺苷酸信號和LTR多聚腺苷酸信號。特別使用的是在pCEP4質(zhì)粒(Invitrogen，圣地亞哥，加利福尼亞州)中的SV40多聚腺苷酸信號，被稱為SV40多聚腺苷酸信號。
在其它具體實(shí)例中，藥物組合物包括一個(gè)治療有效劑量的抗感染藥劑，典型的有對綠膿桿菌、腸桿菌屬、吲哚陽性變形桿菌屬和沙雷菌屬有抗性的氨基酸糖苷如阿米卡星、妥布霉素、奈替米星和慶大霉素、頭孢菌素如頭孢他啶、相關(guān)的β-內(nèi)酰胺試劑如拉氧頭孢、碳青霉烯類如亞胺培南、單環(huán)菌素藥劑如噻肟單酰胺菌素、氨芐青霉素和廣譜青霉素(如青霉素酶抗性青霉素、酰脲青霉素或抗假單胞菌青霉素或奧格門汀)。同抗病毒藥劑如法昔洛韋和阿昔洛韋一樣，抗真菌藥劑，兩性霉素和類似物也包括在抗感染藥劑定義中。
本文中所用的術(shù)語“抗感染藥劑的治療劑量”是指足夠達(dá)到細(xì)菌或真菌殺死的血漿濃度的量，或足夠減慢接受治療的個(gè)體中病毒復(fù)制的量。一般認(rèn)為對人施用安全的抗感染藥劑的治療劑量是專業(yè)人士已知的并是可變的，用抗生素、殺真菌劑或抗病毒試劑和感染個(gè)體治療的類型也是已知的。用于實(shí)施本發(fā)明的抗生素包括那些按《醫(yī)師的試驗(yàn)臺參考書》，Huff，B.B編輯，醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)公司，歐雷德爾，新澤西州(1989)Physicians’Desk Reference，Huff，B.B.ed.，Medical Economics Company，Inc.，Oradell.，N.J.(1989)中描述的制劑方法制成的抗生素，抗細(xì)菌和殺菌藥劑。
此外，治療全身炎性反應(yīng)綜合癥/敗血癥中的各種佐劑在本發(fā)明藥物組合物中也是有用的。它們包括類交感神經(jīng)胺(血管加壓素)如去甲腎上腺素、腎上腺素、異丙基腎上腺素、多巴胺和多巴酚丁胺；抗感染藥劑如甲基強(qiáng)的松龍、消炎痛和苯基丁氮酮；和皮質(zhì)類固醇如倍他米松、氫化可的松、甲基強(qiáng)的松龍或地塞米松；抗凝血?jiǎng)┤绺嗡?，抗凝血酶III或針對特定狀況或安排的香豆素型藥物；利尿素如利尿磺胺或利尿酸；和鴉片劑對抗劑和β-內(nèi)啡肽如納洛酮；附加的腫瘤壞死因子或白介素-1的對抗劑；酚噻嗪；抗組胺劑；高血糖素；α-腎上腺素封閉藥劑、血管舒張劑；血漿擴(kuò)張劑；紅細(xì)胞；血小板；低溫沉淀劑；新鮮凍存的血漿；細(xì)菌滲透蛋白；克林霉素；和(脂A)的抗體，E.coli的J5突變體或內(nèi)毒素核糖脂。制備這些佐劑的方法在許多文獻(xiàn)中有描述。
前述的具體實(shí)例是對本發(fā)明的舉例說明，并不是以任何形式寫來限制本發(fā)明。那些專業(yè)人士能識別在本發(fā)明本質(zhì)和范圍內(nèi)的修改。所有此處引用的參考文獻(xiàn)都以其完整形式作為參考文獻(xiàn)引用于此。
權(quán)利要求
1.一種對已診斷患有全身炎性反應(yīng)綜合癥或敗血癥的個(gè)體的治療方法，包括給上述個(gè)體施用一個(gè)治療有效劑量的免疫調(diào)節(jié)藥物組合物的步驟，該藥物組合物包括從下列小組中選擇的一個(gè)或多個(gè)成分，該小組包括i)Vpr蛋白；ii)Vpr蛋白的一個(gè)功能性片段；iii)一個(gè)可操作的連接于調(diào)節(jié)成分的編碼Vpr蛋白的核酸；iv)一個(gè)可操作的連接于調(diào)節(jié)成分的編碼Vpr蛋白的一個(gè)功能性片段的核酸。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征為個(gè)體被施用的是一個(gè)可操作的連接于調(diào)節(jié)成分的編碼Vpr蛋白或其功能性片段的核酸。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征為核酸的給藥劑量是1-500μg核酸。
4.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征為核酸的給藥劑量是20-250μg核酸。
5.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征為核酸的給藥劑量大約是100μg核酸。
6.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征為可操作的連接于調(diào)節(jié)成分的編碼Vpr蛋白或其功能性片段的核酸包含在一個(gè)質(zhì)粒中。
7.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征為可操作的連接于調(diào)節(jié)成分的編碼Vpr蛋白或其功能性片段的核酸包含在一個(gè)病毒載體中。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征為病毒載體是從包含一個(gè)反轉(zhuǎn)錄病毒載體和一個(gè)腺病毒載體的小組中選擇的。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征為免疫調(diào)節(jié)藥物組合物的給藥步驟至少重復(fù)一次。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征為免疫調(diào)節(jié)藥物組合物的給藥步驟每天進(jìn)行1-6次。
11.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征為額外包括至少一個(gè)給上述個(gè)體施用一個(gè)治療有效劑量的抗感染藥劑的步驟。
12.如權(quán)利要求11所述的方法，其特征為抗感染藥劑是從包括阿米卡星、妥布霉素、奈替米星、慶大霉素、頭孢菌素、頭孢他啶、拉氧頭孢、碳青霉烯、亞胺培南、噻肟單酰胺菌素、氨芐青霉素、青霉素、酰脲青霉素、奧格門汀、兩性霉素、法昔洛韋、阿昔洛韋的小組中選擇的。
13.如權(quán)利要求11所述的方法，其特征為抗感染藥劑的給藥步驟是與免疫調(diào)節(jié)藥物制備物的給藥步驟同時(shí)進(jìn)行的。
14.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征為包含有額外的步驟監(jiān)控個(gè)體血漿中前炎性細(xì)胞因子和敗血癥標(biāo)志蛋白/狀況的濃度，決定是否有對免疫調(diào)節(jié)藥物組合物額外劑量的需要和是否施用額外劑量的免疫調(diào)節(jié)藥物組合物。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其特征為監(jiān)控TNFα的血漿水平并根據(jù)TNFα的血漿水平高于25pg/ml來決定免疫調(diào)節(jié)藥物組合物額外劑量的需要。
16.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征為免疫調(diào)節(jié)藥物組合物的給藥步驟包括持續(xù)給藥。
17.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征為個(gè)體被施用Vpr蛋白或其功能性片段。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其特征為Vpr蛋白或其功能性片段按每天0.1-100mg/kg體重給藥。
19.如權(quán)利要求17所述的方法，其特征為Vpr蛋白或其功能性片段按每天0.5-50mg/kg體重給藥。
20.如權(quán)利要求17所述的方法，其特征為Vpr蛋白或其功能性片段按每天1.0-10mg/kg體重給藥。
21.一種對經(jīng)鑒定有很高風(fēng)險(xiǎn)患敗血癥的個(gè)體預(yù)防患敗血癥的方法，包括給上述個(gè)體施用一個(gè)預(yù)防有效劑量的免疫調(diào)節(jié)藥物組合物的步驟，該藥物組合物包括從下列小組中選擇的一個(gè)或多個(gè)成分，該小組包括i)Vpr蛋白；ii)Vpr蛋白的一個(gè)功能性片段；iii)可操作的連接于調(diào)節(jié)成分的編碼Vpr蛋白的一個(gè)核酸；iv)可操作的連接于調(diào)節(jié)成分的編碼Vpr蛋白的一個(gè)功能性片段的一個(gè)核酸。
22.如權(quán)利要求21所述的方法，其特征為個(gè)體被施用的是一個(gè)可操作的連接于調(diào)節(jié)成分的編碼Vpr蛋白或其功能性片段的核酸。
23.如權(quán)利要求22所述的方法，其特征為核酸的給藥劑量是1-500μg核酸。
24.如權(quán)利要求22所述的方法，其特征為核酸的給藥劑量是25-250μg核酸。
25.如權(quán)利要求22所述的方法，其特征為核酸的給藥劑量大約是100μg核酸。
26.如權(quán)利要求22所述的方法，其特征為可操作的連接于調(diào)節(jié)成分的編碼Vpr蛋白或其功能性片段的核酸包含在一個(gè)質(zhì)粒中。
27.如權(quán)利要求22所述的方法，其特征為可操作的連接于調(diào)節(jié)成分的編碼Vpr蛋白或其功能性片段的核酸包含在一個(gè)病毒載體中。
28.如權(quán)利要求27所述的方法，其特征為病毒載體是從包含一個(gè)反轉(zhuǎn)錄病毒載體和一個(gè)腺病毒載體的小組中選擇的。
29.如權(quán)利要求21所述的方法，其特征為免疫調(diào)節(jié)藥物組合物的給藥步驟至少重復(fù)一次。
30.如權(quán)利要求29所述的方法，其特征為免疫調(diào)節(jié)藥物組合物的給藥步驟每天進(jìn)行1-6次。
31.如權(quán)利要求21所述的方法，其特征為額外包括至少一個(gè)給上述個(gè)體施用一個(gè)治療有效劑量的抗感染藥劑的步驟。
32.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征為抗感染藥劑是從包括阿米卡星、妥布霉素、奈替米星、慶大霉素、頭孢菌素、頭孢他啶、拉氧頭孢、碳青霉烯、亞胺培南、噻肟單酰胺菌素、氨芐青霉素、青霉素、酰脲青霉素、奧格門汀、兩性霉素、法昔洛韋、阿昔洛韋的小組中選擇的。
33.如權(quán)利要求31所述的方法，其特征為抗感染藥劑的給藥步驟是與免疫調(diào)節(jié)藥物制備物的給藥步驟同時(shí)進(jìn)行的。
34.如權(quán)利要求21所述的方法，其特征為包含有額外的步驟監(jiān)控個(gè)體血漿中前炎性細(xì)胞因子和敗血癥標(biāo)志蛋白/狀況的濃度，決定是否有對免疫調(diào)節(jié)藥物組合物額外劑量的需要和是否施用額外劑量的免疫調(diào)節(jié)藥物組合物。
35.如權(quán)利要求34所述的方法，其特征為監(jiān)控TNFα的血漿水平并根據(jù)TNFα的血漿水平高于25pg/ml來決定免疫調(diào)節(jié)藥物組合物額外劑量的需要。
36.如權(quán)利要求21所述的方法，其特征為免疫調(diào)節(jié)藥物組合物的給藥步驟包括持續(xù)給藥。
37.如權(quán)利要求21所述的方法，其特征為個(gè)體被施用Vpr蛋白或其功能性片段。
38.如權(quán)利要求37所述的方法，其特征為Vpr蛋白或其功能性片段按每天0.1-100mg/kg體重給藥。
39.如權(quán)利要求37所述的方法，其特征為Vpr蛋白或其功能性片段按每天0.5-50mg/kg體重給藥。
40.如權(quán)利要求37所述的方法，其特征為Vpr蛋白或其功能性片段按每天1.0-10mg/kg體重給藥。
41.一種用于預(yù)防和治療敗血癥的藥物組合物，包含一個(gè)抗感染藥劑和一個(gè)或多個(gè)從下列小組中選擇的成分，該小組包括v)Vpr蛋白；vi)Vpr蛋白的一個(gè)功能性片段；vii)可操作的連接于調(diào)節(jié)成分的編碼Vpr蛋白的一個(gè)核酸；viii)可操作的連接于調(diào)節(jié)成分的編碼Vpr蛋白的一個(gè)功能性片段的一個(gè)核酸。
42.如權(quán)利要求41所述的藥物組合物，其特征為抗感染藥劑是從包含阿米卡星、妥布霉素、奈替米星、慶大霉素、頭孢菌素、頭孢他啶、拉氧頭孢、碳青霉烯、亞胺培南、噻肟單酰胺菌素、氨芐青霉素、青霉素、酰脲青霉素、奧格門汀、兩性霉素、法昔洛韋、阿昔洛韋的小組中選擇的。
43.如權(quán)利要求41所述的藥物組合物，其特征為在治療全身炎性反應(yīng)綜合癥或敗血癥中額外包括至少一種佐劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及抑制引起敗血癥的免疫反應(yīng)的方法，涉及預(yù)防敗血癥的方法，涉及治療敗血癥的方法以及這些方法中使用的藥物組合物。
文檔編號A61K45/06GK1564696SQ02819665
公開日2005年1月12日 申請日期2002年10月7日 優(yōu)先權(quán)日2001年10月5日
發(fā)明者大衛(wèi)·B.·維尼爾, 穆舒瑪尼·卡魯皮亞 申請人:賓西法尼亞大學(xué)托管人