專利名稱：治療腦癌的蛇毒膠囊及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于傳統(tǒng)藥物及天然藥物，尤其涉及一種治療腦癌、腦癌轉(zhuǎn)移肺癌、淋巴癌的中成藥物——蛇毒膠囊的配方及其制備方法。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤是自身體內(nèi)細(xì)胞分裂失控，任意繁殖，發(fā)生惡性病變，從而嚴(yán)重?fù)p害健康并危及生命的一類疾病。在傳染病得以控制的今天，惡性腫瘤已上升為人類主要的死亡原因之一，根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)報(bào)告，目前，全世界每年新發(fā)生癌癥病人約為590萬人，死亡病例為430萬人，幾乎占全世界每年死亡總?cè)藬?shù)的十分之一。我國(guó)的情況也不容樂觀，每年新發(fā)生癌癥病人約120萬，死亡人數(shù)100萬左右，并有逐年上升的趨勢(shì)。尤其是腦癌患者愈后并發(fā)癥較多，大腦是人體的司令部，一旦發(fā)病，全身癱瘓，給病人身心造成的傷害尤為突出。因此研究治療腦癌是當(dāng)今國(guó)際生命科學(xué)領(lǐng)域的重大課題。
蛇類自古以來就為一種補(bǔ)益食品和藥品，蛇肉中含有多種營(yíng)養(yǎng)成分，每100g蛇肉含水分78.8％、蛋白質(zhì)15.7％、脂肪1.7％、碳水化合物3.3％，此外尚含有維生素A、視黃醇、硫黃素、尼克酸等無機(jī)物。近年來蛇毒抗腫瘤作用的研究日臻完善，研究成果引起國(guó)內(nèi)外廣泛關(guān)注，蛇毒治癌作為抗癌新秀將為廣大患者帶來新的生機(jī)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，將金環(huán)蛇毒粉、大王蛇粉、黃鱔粉與十幾味中草藥按一定配比經(jīng)煎煮、過濾、研磨、混合、攪拌、篩理等工序制成膠囊。利用蛇毒中的細(xì)胞毒素可直接殺死癌細(xì)胞、抑殺率高的特點(diǎn)，使腫塊縮小或消失；利用中藥具有整體性提高免疫功能的能力，間接抑殺癌細(xì)胞，通過刺激淋巴細(xì)胞增殖，提高免疫活性細(xì)胞及免疫因子活性，增強(qiáng)免疫功能，拮抗和抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和蔓延，達(dá)到抗癌的目的；使患者在服藥后較短的治療期內(nèi)，扶正固本，全面提高病人體質(zhì)，加強(qiáng)抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，從而阻止、延緩腫瘤的發(fā)生或轉(zhuǎn)移；增強(qiáng)療效，促進(jìn)康復(fù)，延長(zhǎng)生命；輔助放化療，增效、減毒，防止復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。蛇毒膠囊服藥簡(jiǎn)便，無任何毒副作用，藥源充足，采集方便，配制簡(jiǎn)單，經(jīng)濟(jì)實(shí)用，是一種新型的治療腦癌、腦癌轉(zhuǎn)移肺癌、淋巴癌的中藥制劑。
本發(fā)明的要點(diǎn)在于，蛇毒膠囊是由下述重量的組分組成的金環(huán)蛇毒粉15mg/g，大王蛇粉50mg/g，黃鱔粉100mg/g，冬蟲夏草水提干膏粉15mg/g，靈芝水提干膏粉20mg/g，西洋參水提干膏粉10mg/g，枸杞水提干膏粉45mg/g，茯苓粉100mg/g，甘草水提干膏粉25mg/g，黃芪粉200mg/g，黃精水提干膏粉65mg/g，當(dāng)歸粉100mg/g，薏苡仁粉45mg/g，雞內(nèi)金粉20mg/g，三七粉150mg/g，白術(shù)粉40mg/g。
蛇毒膠囊的制作工藝流程1.蛇毒粉的制備將所需蛇毒液經(jīng)兩次層析分離，飽和硫酸銨沉淀、離心、透析、冷凍干燥后得到精制蛇毒干粉末備用；2.蛇粉的制備將所需蛇洗凈并除掉污物后，自然干燥成蛇干，鱔干，經(jīng)真空干至小于5％以下，用機(jī)械方法煅成3.0-5.0cm長(zhǎng)，粉碎過80目篩，在真空烘箱內(nèi)干燥，研成細(xì)粉，過100目篩備用；3.中藥經(jīng)鑒定符合處方要求，諸藥按比例配料；(1)冬蟲夏草水提干膏粉，靈芝水提干膏粉，西洋參水提干膏粉，枸杞水提干膏粉，甘草水提干膏粉，黃精水提干膏粉的制備是將所需的冬蟲夏草、靈芝、西洋參、枸杞、甘草、黃精加水6-8倍，煎煮1-1.5小時(shí)，過濾，過濾液存放，在第二次加水4-6倍，煎煮1-1.5小時(shí)、過濾，將兩次過濾液合并，減壓濃縮至干膏，制成粉末備用；(2)茯苓粉、黃芪粉、當(dāng)歸粉、薏苡仁粉、雞內(nèi)金粉、三七粉、白術(shù)粉是將茯苓、黃芪、當(dāng)歸、薏苡仁、雞內(nèi)金、三七、白術(shù)分別粉碎成粉末狀，混勻后過100目篩備用；4.將上述各種中藥粉末與蛇毒粉、蛇粉、黃鱔粉混勻，在無菌的條件下分裝至1號(hào)膠囊中，每粒300mg。
蛇毒膠囊的用法與用量口服，一次10粒，一日3次；21天為一療程，可與手術(shù)、放化療聯(lián)用。
規(guī)格300mg/粒。
包裝30粒/瓶。
注意孕婦禁用。
貯藏密封，置陰涼干燥處。
使用說明本發(fā)明蛇毒膠囊是治療腦癌的中成藥，主要由蛇毒、蛇粉及中藥科學(xué)加工而成。經(jīng)過大量的動(dòng)物試驗(yàn)及臨床實(shí)踐證明，其具有理氣降逆，活血化瘀，軟堅(jiān)散結(jié)，益氣養(yǎng)血，扶助正氣，提高機(jī)體免疫力，防癌抗癌的明顯療效。
藥理作用本藥通過蛇毒抑制和殺傷癌細(xì)胞，蛇粉及中藥科學(xué)配伍能刺激機(jī)體的自然保護(hù)機(jī)制，增強(qiáng)免疫力，抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，從而阻止和延緩腫瘤的發(fā)生或轉(zhuǎn)移。
吸收、分布、消除本藥口服快且吸收完全，約為給藥量的90％，且受食物影響小，吸收后廣泛分布于體內(nèi)組織和體液中，其中腎、脾、肺、膽汁中濃度較高，其藥物濃度與血濃度幾乎相等?？诜笱帩舛冗_(dá)峰時(shí)間為45～60min，半衰期2.4～3h，腎功能減退者稍有延長(zhǎng)。本藥經(jīng)腎、膽汁和腸道排泄，其中24h由尿排出10％，約3.6％經(jīng)糞便排出體外。
適應(yīng)癥腦癌，對(duì)腦癌、淋巴和肺轉(zhuǎn)移也有較好療效。
注意本藥毒副作用低，服用較安全。一般反應(yīng)有輕微惡心等胃部不適；偶見白細(xì)胞、血小板減少，短暫性轉(zhuǎn)氨酶升高，但停藥后即迅速消失。孕婦、哺乳期婦女及肝功能不全者慎用。長(zhǎng)期使用遵醫(yī)囑。
本發(fā)明蛇毒膠囊治癌的理論依據(jù)(1)、蛇毒中的細(xì)胞毒素能直接殺死癌細(xì)胞，抑殺率高，從而使腫塊縮小或消失，臨床實(shí)踐證明中醫(yī)扶正固本對(duì)惡性腫瘤可起到減毒增效的作用。
(2)、多研究證明，中藥具有通過活化巨噬細(xì)胞和刺激抗體的產(chǎn)生而達(dá)到提高人體免疫力，抵抗腫瘤的作用。
蛇毒、蛇粉的主要成分含量金環(huán)蛇蛇毒15mg/g，性能味甘，性溫，有毒。歸肝經(jīng)，具有祛風(fēng)通絡(luò)攻毒作用。藥理試驗(yàn)表明，金環(huán)蛇蛇毒對(duì)多種瘤株有細(xì)胞毒作用，能降低血液粘度，粘附率和聚集功能，對(duì)瘤細(xì)胞有抑制作用。大王蛇粉50mg/g，味甘、性平、入肝經(jīng)，可擴(kuò)張血管，增加機(jī)體免疫力，有抗移植性腫瘤的作用。黃鱔100mg/g，味甘，性溫、能補(bǔ)益虛損，增強(qiáng)體質(zhì)。
蛇毒、蛇粉、鱔粉防癌、抗癌的主要機(jī)理(1)、蛇毒細(xì)胞毒素是蛇毒的主要毒性組分之一，約占蛇毒總蛋白含量的25％-60％，具有廣泛的生物學(xué)反應(yīng)活性，生物學(xué)反應(yīng)是調(diào)整機(jī)體內(nèi)部自身潛力以增強(qiáng)對(duì)腫瘤的生物學(xué)反應(yīng)。同時(shí)，蛇毒還含有多種酶及大量肽類。經(jīng)過多種動(dòng)物試驗(yàn)認(rèn)為蛇毒對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺死過程，首先是抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，不久，細(xì)胞毒與腫瘤細(xì)胞接觸，然后腫瘤細(xì)胞膜及核膜破裂、消失，核固縮，最后腫瘤細(xì)胞部分死亡；蛇毒中的降纖酶，主要降低血漿纖維蛋白原含量，從而使血液粘度降低、血流通暢、消除癌癥轉(zhuǎn)移對(duì)在血管壁形成的斑塊，起到防止癌轉(zhuǎn)移的作用。
(2)、蛇類自古以來就作為一種補(bǔ)益食品和藥品，蛇肉中含有多種營(yíng)養(yǎng)成分，每100g蛇肉含水分78.8％、蛋白質(zhì)15.7％、脂肪1.7％、碳水化合物3.3％，此外尚含有維生素A，視黃醇，核黃素等。黃鱔能補(bǔ)益虛損，每100g鱔肉中，蛋白質(zhì)含量高達(dá)17％以上，維生素A含量達(dá)428IU/100g，此外脂肪、維生素B1、維生素B2等營(yíng)養(yǎng)成分的含量也較豐富。蛋白質(zhì)含量較低的膳食可促進(jìn)人與動(dòng)物腫瘤的發(fā)生，如果提高蛋白質(zhì)含量，則可抑制腫瘤的發(fā)生。維生素A可抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，從而延緩腫瘤的發(fā)生或轉(zhuǎn)移；維生素A還可以改變致癌物的代謝，增加免疫反應(yīng)。
中藥主要成分含量及藥理作用(1)、冬蟲夏草15mg/g，味甘，性平，歸肺、腎經(jīng)。冬蟲夏草是一種昆蟲的幼蟲和真菌的結(jié)合體?，F(xiàn)代藥理研究表明，冬蟲夏草可增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，提高巨噬細(xì)胞的吞噬功能，對(duì)細(xì)胞低下的動(dòng)物有保護(hù)作用；對(duì)肺癌、腦癌、肝癌等有顯著的抑制作用，此外冬蟲夏草中的蟲草素對(duì)多種致病菌有較強(qiáng)的抑制作用。
(2)、靈芝20mg/g，性能甘，溫。入心、肺、脾、肝經(jīng)。靈芝中的三萜類化合物具有抗腫瘤活性，可抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)；靈芝多糖是一類非特異性免疫增強(qiáng)劑，不僅能增強(qiáng)細(xì)胞免疫作用，而且能增強(qiáng)體液免疫作用，間接地產(chǎn)生抗廇作用。
(3)、西洋參10mg/g，性能甘，微苦。入脾，肺經(jīng)。其主要成分為人參皀甙，人參多糖，氨基酸和多肽等。人參皂甙有促進(jìn)機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成和細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。具有抗疲勞抗應(yīng)激，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，改善血液循環(huán)，促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬的功效。
(4)、枸杞45mg/g，味甘，性平。歸肝、腎經(jīng)。枸杞多糖是枸杞中主要生物活性成分之一，具有多方面的藥理及生理作用?，F(xiàn)代科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，枸杞多糖能激活T細(xì)胞及M細(xì)胞，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，抑制小鼠9-180腫瘤。
(5)、茯苓100mg/g，味甘，淡，性平，歸心、肺、脾、腎經(jīng)。茯苓主要含有β-茯苓聚糖，三萜類化合物，茯苓多糖。其主要的生理機(jī)能包括利尿作用，抗腫瘤作用，(茯苓多糖具有很強(qiáng)的抗腫瘤活性)增強(qiáng)機(jī)體免疫力，改善心血管機(jī)能的作用。
(6)、甘草25mg/g，味甘，性平。歸脾、胃、心、肺經(jīng)。甘草能健脾益氣，清熱解毒，所含皀苷通過調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，抑制或直接殺死腫廇細(xì)胞等機(jī)制對(duì)S-180，U-14等惡性腫廇起到抑制作用。
(7)、黃芪200mg/g，性能甘，溫。入脾，肺經(jīng)。能升陽補(bǔ)氣止汗回表，健脾養(yǎng)胃，增食欲，強(qiáng)筯骨；能增加人白細(xì)胞誘導(dǎo)干擾素產(chǎn)生能力，增加天然殺傷細(xì)胞NK的活性，促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬功能。
(8)、黃精65mg/g，味甘，性平。歸脾、肺、腎經(jīng)。黃精能益氣健脾，益腎填髓，治療頭昏目眩。
(9)、當(dāng)歸100mg/g，味甘，苦，平，性溫，歸心，肝，脾經(jīng)。當(dāng)歸能增加心肌血液供應(yīng)，并能抑制血小板聚集，促進(jìn)通氣功能，改善缺氧狀態(tài)。
(10)、薏苡仁45mg/g，性能甘，淡，微寒。入脾、肺經(jīng)。薏苡仁蛋白質(zhì)、維生素含量較高，此外含有薏苡仁酯，三萜類化合物等生理活性成分，現(xiàn)代藥理研究表明；薏苡仁酯有阻止癌細(xì)胞生長(zhǎng)并殺滅癌細(xì)胞之功效。薏苡仁多糖還具有增強(qiáng)免疫力的作用。
(11)、雞內(nèi)金20mg/g，味甘，性平。歸脾、胃、膀胱經(jīng)。雞內(nèi)金含胃激素、角蛋白、17種氨基酸、微量的胃蛋白酶等?，F(xiàn)代研究表明，雞內(nèi)金能夠促進(jìn)胃液分泌，提高消化能力。對(duì)氣郁血瘀所致脘腹癌脹有較好的效果。
(12)三七150mg/g，性能味甘，微苦，性溫。歸肝、胃、肺經(jīng)。止血活血，消腫止痛，解毒。能調(diào)節(jié)過高或過低的免疫反應(yīng)，但不干擾正常的免疫反應(yīng)。
(13)、白術(shù)40mg/g，性能甘，苦，溫。入脾、胃經(jīng)。補(bǔ)脾益氣，能增強(qiáng)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能，提高淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，并有升高白細(xì)胞的功效。
中藥防癌治癌的藥理作用可歸納為(1)、促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬功能巨噬細(xì)胞是由循環(huán)血液的單核細(xì)胞衍化而來的，能非特異性地吞噬多種抗原，并能識(shí)別和殺傷腫瘤細(xì)胞。很多研究表明，冬蟲夏草、西洋參、黃芪、茯苓具有通過活化巨噬細(xì)胞和刺激抗體的產(chǎn)生而達(dá)到提高人體免疫力，抵抗腫瘤的作用。
(2)、抗突變作用根據(jù)癌變的基因假設(shè)，基因突變或染色體畸變是導(dǎo)致癌變的重要途經(jīng)?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，西洋參、黃芪、白術(shù)能健脾益氣扶正，提高機(jī)體的物質(zhì)代謝，促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力，具有抗突變作用?？捎糜谀[瘤的預(yù)防和治療。
(3)、免疫增強(qiáng)作用腫廇的發(fā)生和發(fā)展與整個(gè)機(jī)體的免疫功能衰退密切相關(guān)，腫瘤一旦發(fā)生又會(huì)反過來加深對(duì)機(jī)體免疫功能的抑制，助長(zhǎng)腫瘤的發(fā)展。薏苡仁的有效成分薏苡仁酯具有抑制殺傷癌細(xì)胞的作用，薏苡仁多糖能顯著提高機(jī)體免疫力。經(jīng)現(xiàn)代藥理研究證明，枸杞，黃精、甘草能增加機(jī)體免疫功能，提高機(jī)體對(duì)各種有害刺激非特異性的抵抗力和抗癌作用，且本身幾乎無毒性，長(zhǎng)期用藥不會(huì)出現(xiàn)不良反應(yīng)等。此外，茯苓、三七等均有良好的免疫增強(qiáng)作用。
(4)、抑制腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)其分化。冬蟲夏草、靈芝、枸杞等可促進(jìn)淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，增加NK細(xì)胞的活性，同時(shí)有清除體內(nèi)自由基，提高超氧化物歧化酶(SOD)的作用，從而產(chǎn)生抗癌和抑癌效應(yīng)。
本發(fā)明達(dá)到的有益效果在于經(jīng)過大量的動(dòng)物試驗(yàn)及臨床觀察表明，蛇毒膠囊是治療癌癥的新秀，其獨(dú)特之處在于1、組方奇特，科學(xué)合理。
腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與正氣強(qiáng)弱密切相關(guān)?！罢龤獯鎯?nèi)，邪不可干”。而正氣虛弱，引起機(jī)體陰陽平衡失調(diào)，出現(xiàn)氣滯血瘀，邪毒壅踞，就會(huì)發(fā)生腫瘤。若正氣不復(fù)，“瘤毒”橫行，則癌塊留住不消或日漸增大，使疾病陷入惡性循環(huán)，預(yù)后必多險(xiǎn)惡。正如《醫(yī)宗必讀·積聚》篇所說“積之成也，正氣不足而后邪氣踞。……正氣與邪氣，勢(shì)不兩立，低昂然，一勝則一負(fù)，邪氣日昌，正氣日前，不攻去之，表從及矣”。因此在研究蛇毒膠囊的過程中，認(rèn)識(shí)到僅有蛇毒抗癌是不夠的，再以蛇毒抑制和殺死癌細(xì)胞的同時(shí)，配以中藥“祛邪而傷正，扶正而不助邪”的特點(diǎn)，達(dá)到功補(bǔ)兼施，提高機(jī)體免疫力來抗癌治癌的目的。諸藥配伍其藥理作用大大提高了，這是諸藥科學(xué)合理配伍的結(jié)果。
2、不但治標(biāo)，重在治本。
大量的研究證明中醫(yī)扶正固本法對(duì)惡性腫瘤可起到減毒增效的作用[18]。所謂減毒是指降低癌瘤細(xì)胞“毒性”的作用或減輕癌瘤病人在放、化療中的毒副反應(yīng)?；?、放療仍是當(dāng)前治療惡性腫瘤的主要手段，以中醫(yī)的觀點(diǎn)，上述兩種療法皆屬“攻伐”的范疇，臨床上常常出現(xiàn)攻邪傷正的副作用。而蛇毒膠囊在治療的同時(shí)，配合補(bǔ)氣養(yǎng)血，健脾和胃，滋補(bǔ)肝腎的扶正培本法，則取得較好療效。病人病灶得到控制，生存其延長(zhǎng)，治療期間不但明顯的機(jī)體衰弱、消化障礙、骨髓抑制等副反應(yīng)出現(xiàn)，相反，好多患者主癥緩解的同時(shí)精神轉(zhuǎn)佳，抵抗力增強(qiáng)，這本身就是達(dá)到一定治療的目的，同時(shí)也為根治腫瘤創(chuàng)造了條件。
3、既重抗癌，更重顧命“十瘤九虛”，中晚期癌癥患者體質(zhì)虛弱，無法經(jīng)受手術(shù)創(chuàng)傷和放化療的攻伐，許多病人不死于瘤而死于“藥攻”。蛇毒膠囊的治療理念是以正氣為本，寧可帶瘤生存，不可“瘤去人亡”。首先蓄積正氣，提高免疫功能，為抗癌攻瘤創(chuàng)造條件。凡用藥病人普遍反應(yīng)精神振作，食欲增加，睡眠好轉(zhuǎn)，極大地增強(qiáng)了治愈信心。
4、服用安全，藥效顯著蛇毒膠囊口服方便，吸收快，無明顯副作用，服用后，可明顯改善患者臨床癥狀，減少食欲減退惡心嘔吐、脫發(fā)等反應(yīng)。治療1-2個(gè)療程可使腫塊縮小或消失，使晚期患者延長(zhǎng)生存期，增強(qiáng)免疫力，從而加強(qiáng)對(duì)腫瘤的防御能力，提高生存質(zhì)量。
蛇毒膠囊實(shí)驗(yàn)研究摘要本實(shí)驗(yàn)旨在研究蛇毒膠囊對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用以及對(duì)細(xì)胞免疫功能的影響。蛇毒膠囊對(duì)S180腹水肉瘤有明顯抑制作用；可抑制腫瘤細(xì)胞DNA合成；對(duì)NK細(xì)胞活性有增強(qiáng)作用。
關(guān)健詞蛇毒膠囊抑制腫瘤細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)研究。
蛇毒膠囊是依據(jù)有關(guān)中醫(yī)抗腫瘤理論結(jié)合現(xiàn)代藥理研究而成，本藥對(duì)腦癌療效顯著，本研究的目的是從動(dòng)物試驗(yàn)角度探討其抗腫瘤作用，現(xiàn)報(bào)告如下材料與方法1、材料1.1蛇毒膠囊；由蛇毒、蛇粉、黃鱔、靈芝、冬蟲夏草、白術(shù)等組成。
1.2細(xì)胞株小鼠腹水肉瘤細(xì)胞(S180細(xì)胞)；小鼠T淋杷瘤細(xì)胞(YAC-1細(xì)胞)。
1.33H-TdR與125I-udR中國(guó)。
1.4實(shí)驗(yàn)動(dòng)物C57純系小鼠和昆明種小鼠，雄性，體重22±2g(白求恩醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供)。
2、方法2.1小鼠脾細(xì)胞懸液制備蛇毒膠囊經(jīng)口灌喂小鼠，分別以0mg/kg、125mg/kg、250mg/kg體重劑量，每天一次連續(xù)7天，隨后斷食處死，在無菌條件下取脾置于盛有RPMI-1640培養(yǎng)液的平皿中，用磨壓法制備細(xì)胞，以Tris-NH4CL緩沖液(PH＝7.2)溶紅細(xì)胞，用RPMI-1640培養(yǎng)液洗凈Tris緩沖液，用10％胎中血清(FCS)--RPMI·1640培養(yǎng)液(FCS-1640)調(diào)至所需濃度的細(xì)胞懸液。
2.2 NK細(xì)胞活性測(cè)定取傳代24h的YAC-1細(xì)胞作為靶細(xì)胞，用FCS-1640調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度到1×106/ml。分別加10-3mol/L 5-氟尿嘧啶(5FUdR)0.1ml，125碘-脫氧尿嘧啶核苷(125I-UdR)185K＜Bq，37℃培養(yǎng)4h，洗凈同位素并調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度至1×105/ml。取上述脾細(xì)胞懸液(1×107/ml)0.1ml及靶細(xì)胞懸液0.1ml(效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞濃度H為100∶1)，用FCS-1640補(bǔ)充至1ml，37℃培養(yǎng)16h，離心取上清液0.5ml，置于另一塑料放射免疫試管內(nèi)，用Crystod-12多探失Y譜儀(瑞典)測(cè)定上清液和下清液(含細(xì)胞)管的cpm值。按下式計(jì)算NK細(xì)胞活性 2.3蛇毒膠囊對(duì)S180腹水肉瘤生長(zhǎng)抑制的實(shí)驗(yàn)取經(jīng)小鼠腹腔傳代7天的S180細(xì)胞，用生理鹽洗滌2次，用臺(tái)酚藍(lán)染色，計(jì)數(shù)活細(xì)胞(95％以上)。調(diào)細(xì)胞懸液至2.5×106個(gè)活細(xì)胞/ml。將細(xì)胞懸液0.2ml(含5×105個(gè)細(xì)胞/只小鼠)注入小鼠腹腔。各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組小鼠分別腹腔注入不同濃度的蛇毒膠囊和生理鹽水。每天一次，連續(xù)12天。隨后頸椎脫臼處死，測(cè)腹水體積和S180細(xì)胞數(shù)及凈重體重。
2.4蛇毒膠囊對(duì)腫瘤細(xì)胞DNA合成影響的測(cè)定取體外24h傳代的腫瘤細(xì)胞，經(jīng)離心洗滌后用FCS-1640調(diào)成1×106個(gè)細(xì)胞/ml的細(xì)胞懸液。取0.1ml細(xì)胞懸液及0.9ml含不同蛇毒膠囊濃度的FCS-1640加入塑料放射免疫試管中，37℃培養(yǎng)1h，經(jīng)離心后洗凈蛇毒膠囊成分。每管加入37KBq3H-TdR，并用FCS-1640調(diào)至1ml，37℃培養(yǎng)0.5h，收獲細(xì)胞，用液焛儀測(cè)cpm值。結(jié)果以3H-TdR摻入量計(jì)算抑制百分率，表示蛇毒膠囊對(duì)腫瘤細(xì)胞DNA合成的抑制程度。
3、結(jié)果3.1蛇毒膠囊對(duì)小鼠脾NK細(xì)胞活性有增強(qiáng)作用。不同劑量的兩個(gè)試驗(yàn)組的NK細(xì)胞活性明顯高于對(duì)照組。見表1表1蛇毒膠囊對(duì)小鼠脾NK細(xì)胞活性的影響

3.2蛇毒膠囊可抑制腫瘤細(xì)胞DNA合成。
蛇毒膠囊對(duì)各種腫瘤細(xì)胞DNA合成均具有不同程度的抑制作用，并有一定程度的劑量效應(yīng)關(guān)系。見表2
表2蛇毒膠囊對(duì)腫瘤細(xì)胞DNA合成的抑制作用

注n＝5，*p＜0.05，**p＜0.01與對(duì)照組相比。
3.3蛇毒膠囊具有抑制S180腹水肉瘤生長(zhǎng)的作用。
經(jīng)不同計(jì)量蛇毒膠囊處理12天后的小鼠，其腹水量，腫瘤細(xì)胞數(shù)及小鼠體重凈增重量均小于未經(jīng)蛇毒膠囊處理的對(duì)照組，但差異程度不同，且未見劑量效應(yīng)關(guān)系。見表3表3蛇毒膠囊對(duì)S180腹水肉瘤生長(zhǎng)的影響

注n＝8，*p＜0.05與對(duì)照組相比。
3.4討論本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，蛇毒膠囊有抑制S180腹水肉瘤增殖的作用。劑量為125和250mg/kg時(shí)可使瘤細(xì)胞數(shù)明顯減少，500mg/kg時(shí)的抑瘤作用更加明顯。根據(jù)表2所表明的蛇毒膠囊對(duì)造血系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞DNA合成的明顯抑制作用，及其相當(dāng)明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系，可認(rèn)為蛇毒膠囊對(duì)DNA合成具有明顯的抑制作用與抑瘤作用。同時(shí)，在本實(shí)驗(yàn)中還證明，蛇毒膠囊具有提高機(jī)體細(xì)胞免疫力功能的作用，它表現(xiàn)為提高NK細(xì)胞活性。NK細(xì)胞是體內(nèi)一組具有自發(fā)性抗腫瘤，抗病毒的效應(yīng)細(xì)胞群，因?yàn)楸旧砜芍苯託[瘤細(xì)胞而成為腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)初始階段的第一道防線。
蛇毒膠囊對(duì)小鼠腦癌抑癌效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究摘要蛇毒膠囊對(duì)T739小鼠腦癌的抑癌效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)組喂服蛇毒膠囊，對(duì)照組應(yīng)用生理鹽水，觀察治療后各組的腫瘤重量和存活時(shí)間。結(jié)果顯示蛇毒膠囊有明顯的抑癌效應(yīng)。
關(guān)鍵詞蛇毒膠囊抑癌效應(yīng)，實(shí)驗(yàn)研究。
蛇毒膠囊中新型蛋白質(zhì)分子促使活化T細(xì)胞分泌的多種細(xì)胞因子對(duì)腫瘤細(xì)胞有極其強(qiáng)大的殺傷作用。已逐漸成為腫瘤治療的新熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)觀察喂服蛇毒膠囊對(duì)可移植性T739小鼠腦部腫瘤的抑癌效應(yīng)，現(xiàn)報(bào)告如下。
1、材料與方法1.1材料蛇毒膠囊(自擬方由蛇毒、冬蟲夏草、西洋參、黃芪、茯苓、薏苡仁、三七等組成。)T739小鼠由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院購得，共40只，4-6周齡，體重19±1.8g，T739小鼠腦癌瘤株由北京醫(yī)科大學(xué)研究所惠贈(zèng)。
1.2方法將40只T739小鼠隨機(jī)分成4組，每組10只，分別用來做抑瘤效應(yīng)觀察和存活期觀察。荷瘤鼠模型采用細(xì)胞懸液接種法，每只小鼠左下肢內(nèi)側(cè)皮下接種腫瘤細(xì)胞懸液2.0×106/0.5ml。
抑瘤效應(yīng)觀察實(shí)驗(yàn)組在小鼠接種腫瘤的當(dāng)天、7天和14天分別喂服蛇毒膠囊，對(duì)照組注射等量生理鹽水，15天后處死兩組接種小鼠，剝離腫瘤并稱重。
存活期觀察實(shí)驗(yàn)組在小鼠接種腫瘤即日起每天3次喂服蛇毒膠囊，直至小鼠死亡；對(duì)照組注射等量生理鹽水，記錄每只小鼠的存活時(shí)間。
1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用t檢驗(yàn)2、結(jié)果40只小鼠接種1周內(nèi)全部成瘤。腫瘤生長(zhǎng)迅速，小鼠死亡時(shí)均極消瘦，呈惡病質(zhì)狀態(tài)。根據(jù)以下公式計(jì)算小鼠的抑瘤率、存活延長(zhǎng)率。
抑瘤率＝(1-實(shí)驗(yàn)組瘤重均值/對(duì)照組瘤重均值)×100％存活延長(zhǎng)率＝(實(shí)驗(yàn)組平均存活天數(shù)/對(duì)照組平均存活天數(shù)-1)×100％具體結(jié)果見表1、2表1蛇毒膠囊對(duì)T739小鼠腦癌的抑瘤效應(yīng)(X±S)

與對(duì)照組比較P＜0.01
表2蛇毒膠囊對(duì)T739荷瘤鼠存活時(shí)間的影響(X±S)

與對(duì)照組比較P＜0.013、討論機(jī)體免疫功能下降是腫瘤發(fā)病的最主要病因之一，而抗腫瘤免疫主要是細(xì)胞免疫，蛇毒膠囊中的新型蛋白質(zhì)分子，可激活比普通抗原多達(dá)數(shù)千乃至數(shù)萬倍的細(xì)胞毒T細(xì)胞(CTL)及促使活化的T細(xì)胞分泌多種足量的細(xì)胞因子如TNF-a，TNF-β和IL-2，IL-6等，直接或間接地殺傷腫瘤細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)通過建立T739小鼠腦癌腫瘤模型來觀察喂服蛇毒膠囊后的抑瘤效應(yīng)。從表1可知，在相同時(shí)間內(nèi)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組腫瘤的生長(zhǎng)速度有顯著差異，實(shí)驗(yàn)組腫瘤明顯小于對(duì)照組(P＜0.01)，顯示蛇毒膠囊對(duì)活體腫瘤的生長(zhǎng)有良好的抑制性，抑瘤率為84.7％；且蛇毒膠囊在提高機(jī)體免疫力的同時(shí)，尚有抗惡病質(zhì)等惡性腫瘤并發(fā)癥的效果[20]。表2顯示喂服蛇毒膠囊后，實(shí)驗(yàn)組荷瘤鼠的存活時(shí)間比對(duì)照組明顯延長(zhǎng)(P＜0.01)延長(zhǎng)存活率達(dá)24.1％。本實(shí)驗(yàn)在喂服蛇毒膠囊后未發(fā)現(xiàn)荷瘤鼠有休克，全身感染等嚴(yán)重并發(fā)癥發(fā)現(xiàn)，尤于使用其他藥物使用時(shí)所產(chǎn)生的毒副作用。本研究為蛇毒膠囊在腦部腫瘤治療方面提供了一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
蛇毒膠囊聯(lián)合方案治療腦癌臨床觀察摘要目的，比較單用蛇毒膠囊，替尼泊苷(VM-26)+尼莫司汀(ACNU)化療方案以及蛇毒膠囊加VM-26和ACNU聯(lián)合化療方案療效。
方法1994年8月-1996年12月治療腦瘤50例。其中蛇毒膠囊組20例，VM-26+ACNU方案組10例，蛇毒膠囊聯(lián)合VM-26+ACNU組20例，結(jié)果顯示三組有效率分別為69.5％、56.5％、87.5％。
結(jié)論蛇毒膠囊或蛇毒膠囊加VM-26+ACNU方案治療腦癌副作用小，55％存活期超過6個(gè)月，同時(shí)減輕腦水腫，改善癥狀。
關(guān)鍵詞腦癌/中醫(yī)藥療法，腦癌/藥物療法，腦癌/中西醫(yī)結(jié)合治療。
腦為惡性腫瘤常見的轉(zhuǎn)移部位，近年來，肺癌腦轉(zhuǎn)移的發(fā)生率隨著肺癌發(fā)病率的增加而明顯上升，文獻(xiàn)報(bào)道為18％-57％。肺癌腦轉(zhuǎn)移后，病情迅速惡化，如不治療，多在癥狀出現(xiàn)2-3個(gè)月內(nèi)死亡，所以肺癌腦轉(zhuǎn)移的治療明顯影響預(yù)后。
一、研究對(duì)象3組50例病例中，男性31例，女性19例；年齡3-70歲，平均37歲。原發(fā)腦瘤30例，腦轉(zhuǎn)移瘤20例(其中肺癌12例、乳癌1例、惡淋3例、鼻咽癌1例、滑膜內(nèi)瘤1例、不明2例)。均經(jīng)病理證實(shí)。臨床表現(xiàn)頭痛23例次，惡心、嘔吐31例次、意識(shí)改變16例次，肢體肌力，感覺異常20例次，顱神經(jīng)受損17例次，共濟(jì)失調(diào)11例次，50例病員治療前神經(jīng)系統(tǒng)癥狀體征總數(shù)48例次。50例均經(jīng)顱腦CI檢查，并發(fā)瘤35例，多發(fā)瘤15例。伴顱外臟器轉(zhuǎn)移或原發(fā)灶末控者27例。
二、治療方法a)A組蛇毒膠囊組，口服，每次10粒，日3次，治療21天后間歇1周后重復(fù)。
b)B組VM-26+ACNU組，具體用法，VM-26100mg，iv gtt，dl-3，4wk重復(fù)；ACNU2-3mg/kg，iv dL，4-6wk重復(fù)。ACNU共47療程，平均2、3療程，VM-26共49療程，平均2.5療程?；熐熬o20％甘露醇250ml，iv gtt，DXM 10mg，iv。
c)C組蛇毒膠囊加VM-26+ACNU組，C組經(jīng)蛇毒膠囊治療10天后在癥狀體征改善后給予VM-26+ACNU方案治療。
每組每程均采用樞丹或滅吐靈預(yù)防性正吐治療。用藥前后均行肝、腎功能、心電圖，IgA，IgG，IgM測(cè)定無異常改變。
三、評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)1、近期療效近期療效評(píng)定按照WHO制定的實(shí)體瘤客觀療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，分完全緩解(CR)，部分緩解(PR)，穩(wěn)定(NC)，惡化(PD)，按照通用標(biāo)準(zhǔn)CR+PR為有效。
2、癥狀療效主要觀察顱內(nèi)病灶，肢體肌力異常，意識(shí)障礙，惡心、嘔吐等。
3、生存分析利用非成組資料隊(duì)列壽命評(píng)估的。Kaplan-Meire估計(jì)法計(jì)算進(jìn)行生存分析。生存期規(guī)定為從用藥結(jié)束之日起至死亡或本次隨訪時(shí)間。緩解期指CR和PR病例停藥4周時(shí)起到腫瘤出現(xiàn)復(fù)發(fā)，局部進(jìn)展或新的病灶出現(xiàn)為止這一段時(shí)間。
4、毒性發(fā)應(yīng)采用WHO 1981年統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)毒性。
四、結(jié)果1、50例治療后緩解情況見附表3表3治療后癥狀體征緩解情況

2、癥狀療效；A組與C組治療后顱腦CT檢查，腦水腫減輕或消失100％，伴顱外病灶不同程度縮小，惡心嘔吐100％緩解，總有效率(CR+PR)優(yōu)于B組。
3、生存期存活時(shí)間為1-17個(gè)月，平均6.5個(gè)月。超過6個(gè)月者31例，其中生存時(shí)間超過7個(gè)月者，均為A組與C組治療的病例。
4、毒性反應(yīng)毒副反應(yīng)主要表現(xiàn)為血象改變，A組發(fā)應(yīng)輕，B組和C組治療16天后白細(xì)胞和血小板有所下降，經(jīng)輸血后血象改變一周后可恢復(fù)，未發(fā)生嚴(yán)重感染及出血現(xiàn)象。三組病例中對(duì)血紅蛋白及胃腸道反應(yīng)不明顯。
討論迄今文獻(xiàn)報(bào)道，認(rèn)為腦瘤及腦轉(zhuǎn)移瘤不治者多在1-2個(gè)月內(nèi)死亡，單獨(dú)手術(shù)，放療可生存3-6個(gè)月。在臨床實(shí)踐中A組合C組臨床癥狀得到基本控制，顱內(nèi)病灶、顱外病灶總有效率和存活期比單純手術(shù)、放療都大大提高，蛇毒膠囊不失為一種有效的治療方案。
權(quán)利要求
1.一種治療腦癌的蛇毒膠囊，其特征在于，該膠囊是由下述重量的組分組成的金環(huán)蛇毒粉15mg/g，大王蛇粉50mg/g，黃鱔粉100mg/g，冬蟲夏草水提干膏粉15mg/g，靈芝水提干膏粉20mg/g，西洋參水提干膏粉10mg/g，枸杞水提干膏粉45mg/g，茯苓粉100mg/g，甘草水提干膏粉25mg/g，黃芪粉200mg/g，黃精水提干膏粉65mg/g，當(dāng)歸粉100mg/g，薏苡仁粉45mg/g，雞內(nèi)金粉20mg/g，三七粉150mg/g，白術(shù)粉40mg/g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療腦癌的蛇毒膠囊，其特征在于，所述的蛇毒粉的制備是將所需蛇毒液經(jīng)兩次層析分離，飽和硫酸銨沉淀、離心、透析、冷凍干燥后得到精制蛇毒干粉末備用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療腦癌的蛇毒膠囊，其特征在于，其中蛇粉的制備是將所需蛇洗凈并除掉污物后，自然干燥成蛇干，鱔干，經(jīng)真空干至小于5％以下，用機(jī)械方法煅成約3.0-5.0cm長(zhǎng)，粉碎過80目篩，在真空烘箱內(nèi)干燥，研成細(xì)粉，過100目篩備用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療腦癌的蛇毒膠囊，其特征在于，其中所述的冬蟲夏草水提干膏粉，靈芝水提干膏粉，西洋參水提干膏粉，枸杞水提干膏粉，甘草水提干膏粉，黃精水提干膏粉的制備是將所需的冬蟲夏草、靈芝、西洋參、枸杞、甘草、黃精加水6-8倍，煎煮1-1.5小時(shí)，過濾，過濾液存放，在第二次加水4-6倍，煎煮1-1.5小時(shí)、過濾，將兩次過濾液合并，減壓濃縮至干膏，制成粉末備用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療腦癌的蛇毒膠囊，其特征在于，其中所述的茯苓粉、黃芪粉、當(dāng)歸粉、薏苡仁粉、雞內(nèi)金粉、三七粉、白術(shù)粉是將茯苓、黃芪、當(dāng)歸、薏苡仁、雞內(nèi)金、三七、白術(shù)分別粉碎成粉末狀，混勻后過100目篩備用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的治療腦癌的蛇毒膠囊，其特征在于，將上述各種中藥粉末與蛇毒粉、蛇粉、黃鱔粉混勻，在無菌的條件下分裝至1號(hào)膠囊中，每粒300mg。
全文摘要
一種治療腦癌的蛇毒膠囊及制備方法，本發(fā)明將金環(huán)蛇毒粉、大王蛇粉、黃鱔粉與十幾味中草藥按一定配比經(jīng)煎煮、過濾、研磨、混合、攪拌、篩理等工序制成膠囊。本發(fā)明利用蛇毒中的細(xì)胞毒素可直接殺死癌細(xì)胞、抑殺率高的特點(diǎn)，使腫塊縮小或消失；利用中藥具有整體性提高免疫功能的能力，間接抑殺癌細(xì)胞，通過刺激淋巴細(xì)胞增殖，提高免疫活性細(xì)胞及免疫因子活性，增強(qiáng)免疫功能，拮抗和抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和蔓延，達(dá)到抗癌的目的。蛇毒膠囊服藥簡(jiǎn)便，無任何毒副作用，藥源充足，采集方便，配制簡(jiǎn)單，經(jīng)濟(jì)實(shí)用，是一種新型的治療腦癌、腦癌轉(zhuǎn)移肺癌、淋巴癌的中藥制劑。
文檔編號(hào)A61K35/56GK1682981SQ20051000725
公開日2005年10月19日 申請(qǐng)日期2005年2月6日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月6日
發(fā)明者石會(huì)蘋, 李保林 申請(qǐng)人:石會(huì)蘋, 李保林