專利名稱：一種高純度的丹參酮iia磺酸鈉、制備方法及其制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種丹參酮IIA磺酸鈉，特別是涉及一種高純度的丹參酮IIA磺酸鈉，還涉及該丹參酮IIA磺酸鈉的制備方法，以及使用該丹參酮IIA磺酸鈉制成的制劑。
背景技術(shù)：
丹參(RADIX ET RHIZOMA SALVIAE MILTIORRHIZAE)作為一種重要的中藥材，已被多版《中國(guó)藥典》收載。丹參為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖。春、秋二季采挖，除去泥沙，干燥而得。丹參性苦，微寒；歸心、肝經(jīng)。具有祛瘀止痛，活血通經(jīng)，清心除煩的功能。用于月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉痛經(jīng)，癥瘕積聚，胸腹刺痛，熱痹疼痛，瘡瘍腫痛，心煩不眠；肝脾腫大，心絞痛等癥。丹參因提取方法的不同，丹參所含的主要化學(xué)成分主要有兩大類，即脂溶性丹參酮類化合物和水溶性酚酸類化合物。這兩類化學(xué)成分的生物活性已經(jīng)被許多醫(yī)藥文獻(xiàn)和臨床應(yīng)用所證實(shí)。丹參中的脂溶性成分主要是一類以丹參酮IIA為代表的含有共軛鄰醌結(jié)構(gòu)的丹參酮類似物。從丹參中提取丹參酮IIA，經(jīng)磺化后得到的丹參酮IIA磺酸鈉，大大增強(qiáng)了藥物的水溶性，獲得了更高療效的新藥物。
丹參酮IIA磺酸鈉用于冠心病心絞痛和心肌梗塞、腦動(dòng)脈和視網(wǎng)膜動(dòng)脈及外周靜脈血栓形成、白塞氏綜合征、結(jié)節(jié)性紅斑。擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加冠狀動(dòng)脈血流量；減慢心率，增加心肌收縮力，改善缺氧后引起的心肌代謝紊亂及心功能；抑制凝血；促進(jìn)組織修復(fù)；降低血脂；保護(hù)紅細(xì)胞和抑制細(xì)菌生長(zhǎng)。
目前丹參酮IIA磺酸鈉在中國(guó)上市的劑型只有小水針劑，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)已載入中國(guó)國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)(產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)號(hào)WS-10001-(HD-1014)-2002，以下簡(jiǎn)稱“標(biāo)準(zhǔn)-1014”)。其相應(yīng)的原料藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)也已載入中國(guó)國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)(產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)號(hào)WS-10001-(HD-0923)-2002，以下簡(jiǎn)稱“標(biāo)準(zhǔn)-0923”)。
在對(duì)丹參酮IIA磺酸鈉注射液小水針劑的研究、生產(chǎn)過程中，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)存在著兩個(gè)嚴(yán)重的技術(shù)問題，即(1)在40℃加速試驗(yàn)條件下一個(gè)月后，制劑的有關(guān)物質(zhì)量升高快(按標(biāo)準(zhǔn)-0923的方法測(cè)定)，(2)注射液在40℃加速試驗(yàn)條件下放置一個(gè)月后容易產(chǎn)生沉淀。
盡管本發(fā)明人從制劑的處方、工藝等方法進(jìn)行了全面、深入的研究，但依然沒有解決這兩個(gè)問題。
原料藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，含量測(cè)定方法采用分光光度法進(jìn)行測(cè)定，限度定為96％；而有關(guān)物質(zhì)的控制采用薄層色譜法，限度定為相對(duì)于丹參酮IIA磺酸鈉5mg/ml的供試液而言，其中的丹參酮I磺酸鈉不得過0.2mg/ml(＜4.0％)，其中的丹參酮IIA不得過0.2mg/ml(＜4.0％)。
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，按現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)-0923執(zhí)行的丹參酮IIA磺酸鈉原料藥，采用高效液相色譜法測(cè)定，其含量不到94％，而有關(guān)物質(zhì)總量卻高達(dá)13％以上，單個(gè)雜質(zhì)高達(dá)6％以上。
本發(fā)明人意外的發(fā)現(xiàn)，將符合標(biāo)準(zhǔn)-0923的丹參酮IIA磺酸鈉純化后，采用高效液相色譜法測(cè)定，原料藥的有關(guān)物質(zhì)的總量在10.0％以下，單個(gè)雜質(zhì)的量在4.0％以下，含量在96.0％以上，采用這種高純度的丹參酮IIA磺酸鈉原料藥制備丹參酮IIA磺酸鈉的注射液，可以明顯地克服上述制備水針劑時(shí)存在的問題。而用這種高純度的丹參酮IIA磺酸鈉制備的大容量輸液劑、凍干粉針劑等也可取得良好的效果。
因此，本發(fā)明的目的在于，提供一種高純度的丹參酮IIA磺酸鈉、這種高純度的丹參酮IIA磺酸鈉的制備方法、以及使用這種高純度的丹參酮IIA磺酸鈉制成的制劑。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供了一種高純度的丹參酮IIA磺酸鈉、這種高純度的丹參酮IIA磺酸鈉的制備方法、以及使用這種丹參酮IIA磺酸鈉制成的制劑。
如前所述，現(xiàn)有技術(shù)，即現(xiàn)行的原料藥國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)(標(biāo)準(zhǔn)-0923)中，含量測(cè)定方法采用分光光度法進(jìn)行測(cè)定，限度定為96％；而有關(guān)物質(zhì)的控制采用薄層色譜法，限度定為相對(duì)于丹參酮IIA磺酸鈉5mg/ml的供試液而言，其中的丹參酮I磺酸鈉不得過0.2mg/ml(＜4.0％)，其中的丹參酮IIA不得過0.2mg/ml(＜4.0％)。
市售產(chǎn)品丹參酮IIA磺酸鈉(購(gòu)自上海第一生化藥業(yè)有限公司，產(chǎn)品批號(hào)為Y041120)，按標(biāo)準(zhǔn)-0923測(cè)定，扣除水分后，含量為96.3％，有關(guān)物質(zhì)按兩種雜質(zhì)分別計(jì)算，均小于4％(但均大于3％，以4％、3％對(duì)照)。
以上述原料藥(批號(hào)Y041120)制備丹參酮IIA磺酸鈉注射液，在40℃加速試驗(yàn)條件下放置3個(gè)月后，出現(xiàn)以下問題(1)制劑的有關(guān)物質(zhì)量升高快(按原料藥標(biāo)準(zhǔn)-0923的方法測(cè)定)，兩種雜質(zhì)分別計(jì)算，由初始時(shí)的均小于4％(但均大于3％，以4％、3％對(duì)照)增加到3月時(shí)的均大于6％(但均小于7％，以6％、7％對(duì)照)；
(2)注射液容易產(chǎn)生白色塊狀沉淀。
基于這些問題，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，采用高效液相色譜法，用自行摸索的色譜條件，測(cè)定丹參酮IIA磺酸鈉(Y041120)，其含量按扣除水分后計(jì)算，僅為93.8％，而有關(guān)物質(zhì)總和卻高達(dá)13.42％(最大的單個(gè)雜質(zhì)量達(dá)6.11％)。造成這種含量和有關(guān)物質(zhì)較大差異是可能的，因?yàn)楝F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)-0923中分光光度法測(cè)定含量，薄層色譜法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)，其分析方法的專屬性、準(zhǔn)確度、靈敏度等均不及高效液相色譜法。
為此，對(duì)原料藥(Y041120)進(jìn)行純化，采用高效液相色譜法進(jìn)行質(zhì)量控制，純化后的含量在96.0％(HPLC)以上，有關(guān)物質(zhì)總量在10.0％以下，單個(gè)雜質(zhì)的量在4.0％以下(HPLC)。采用這種經(jīng)過純化，并且含量和有關(guān)物質(zhì)達(dá)到上述要求后，與用未純化的原料藥制成的注射液相比(處方相同)，用純化原料制成的注射液在40℃放置1個(gè)月后，有關(guān)物質(zhì)的變化小，而且未見有沉淀出現(xiàn)。這就是本發(fā)明的基礎(chǔ)。
因此，本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的(1)一種高純度的丹參酮IIA磺酸鈉采用高效液相色譜法測(cè)定含量和有關(guān)物質(zhì)，其丹參酮IIA磺酸鈉的含量在96.0％以上，有關(guān)物質(zhì)總量在10.0％以下，單個(gè)雜質(zhì)的量在4.0％以下。
(2)一種高純度的丹參酮IIA磺酸鈉的制備方法以純度較低的丹參酮IIA磺酸鈉原料藥為起始材料，進(jìn)行重結(jié)晶，得到符合以上(1)項(xiàng)所述質(zhì)量要求的高純度的丹參酮IIA磺酸鈉。
上述的純度較低的丹參酮IIA磺酸鈉原料藥，可以是市售的丹參酮IIA磺酸鈉(例如，購(gòu)自上海第一生化藥業(yè)有限公司)，按標(biāo)準(zhǔn)-0923測(cè)定，含量為96.3％，兩種雜質(zhì)均小于4％(但大于3％，以4％、3％對(duì)照)。
上述的純度較低的丹參酮IIA磺酸鈉原料藥，也可以是自制的低純度的丹參酮IIA磺酸鈉，其含量可以低于標(biāo)準(zhǔn)-0923規(guī)定的96％，如含量在90％以上，但低于96％；而有關(guān)物質(zhì)的量高于標(biāo)準(zhǔn)-0923規(guī)定的4％+4％，如在8％+8％以下，但在4％+4％以上。
(3)一種含有高純度的丹參酮IIA磺酸鈉的制劑即以本發(fā)明高純度的丹參酮IIA磺酸鈉為藥理活性成分，制成含丹參酮IIA磺酸鈉的制劑，如小容量水針劑、凍干粉針劑、大容量輸液劑、口服固體制劑、口服液體制劑、外用制劑等。
具體地說，本發(fā)明可以按以下方案實(shí)現(xiàn)。
一種高純度的丹參酮IIA磺酸鈉，其特征在于，(1)采用高效液相色譜法測(cè)定含量，其中的丹參酮IIA磺酸鈉的含量在96.0％以上，(2)采用高效液相色譜法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)，其中有關(guān)物質(zhì)的總量在10.0％以下，單個(gè)雜質(zhì)的量在4.0％以下；所述的高效液相色譜法測(cè)定含量和有關(guān)物質(zhì)的方法，照《中國(guó)藥典》2005年版二部附錄VD進(jìn)行，包括以下步驟(i)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以濃度為0.05mol/L并用醋酸調(diào)pH值為3.0的醋酸銨溶液與甲醇的體積比為35∶65的混合溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm，調(diào)節(jié)流速至丹參酮IIA磺酸鈉的保留時(shí)間約為8分鐘，理論板數(shù)按丹參酮IIA磺酸鈉峰計(jì)算應(yīng)不低于2500，丹參酮IIA磺酸鈉峰與其它峰的分離度應(yīng)大于1.2；(ii)有關(guān)物質(zhì)檢查取丹參酮IIA磺酸鈉適量，加流動(dòng)相溶解，制成濃度約為100μg/ml的溶液，作為供試品溶液，精密量取供試品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液；取對(duì)照溶液20μl，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成份色譜峰的峰高約為滿量程的20％；另取丹參酮IIA對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成濃度為10μg/ml的溶液，取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖至丹參酮IIA峰保留時(shí)間的1.2倍；再精密量取對(duì)照溶液與供試品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至丹參酮IIA峰保留時(shí)間的1.2倍；供試品溶液的色譜圖中各雜質(zhì)色譜峰面積之和，除以對(duì)照溶液主峰面積，計(jì)算有關(guān)物質(zhì)的總量；供試品溶液的色譜圖中最大的單個(gè)雜質(zhì)的色譜峰面積除以對(duì)照溶液主峰面積，計(jì)算單個(gè)雜質(zhì)的量；(iii)含量測(cè)定精密稱取丹參酮IIA磺酸鈉約25mg，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密吸取5ml，置50ml的量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以符合中國(guó)國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-(HD-0923)-2002，用(ii)項(xiàng)方法檢查有關(guān)物質(zhì)的總量小于2％，單個(gè)雜質(zhì)的量在1.0％以下，并在60℃下真空干燥至恒重的丹參酮IIA磺酸鈉為對(duì)照品，精密稱取該丹參酮IIA磺酸鈉對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解并制成濃度約為25μg/ml的對(duì)照品溶液；取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。
基于上述的高效液相色譜法測(cè)定含量和有關(guān)物質(zhì)的方法，優(yōu)選的，本發(fā)明提供的一種高純度的丹參酮IIA磺酸鈉，其特征在于，(1)采用高效液相色譜法測(cè)定含量，其中的丹參酮IIA磺酸鈉的含量在97.0％以上，(2)采用高效液相色譜法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)，其中有關(guān)物質(zhì)的總量在8.0％以下，單個(gè)雜質(zhì)的量在3.0％以下。
基于上述的高效液相色譜法測(cè)定含量和有關(guān)物質(zhì)的方法，更優(yōu)選的，本發(fā)明提供的一種高純度的丹參酮IIA磺酸鈉，其特征在于，(1)采用高效液相色譜法測(cè)定含量，其中的丹參酮IIA磺酸鈉的含量在98.0％以上，(2)采用高效液相色譜法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)，其中有關(guān)物質(zhì)的總量在7.0％以下，單個(gè)雜質(zhì)的量在2.5％以下。
一種高純度的丹參酮IIA磺酸鈉的制備方法(1)往50～60℃的乙醇中，加入的較低純度的丹參酮IIA磺酸鈉粉末，邊加邊攪拌使粉末溶解，獲得近飽和的澄清溶液，按溶液體積比為3～7％的比例加入氯仿，將溶液加熱到70±3℃，在室溫下靜置，緩緩降溫到室溫，然后降溫到2～6℃，待結(jié)晶析出后，過濾，真空干燥，得磚紅色結(jié)晶性粉末；(2)測(cè)定含量和有關(guān)物質(zhì)，結(jié)果含量在96.0％以上，有關(guān)物質(zhì)的總量在10.0％以下，單個(gè)雜質(zhì)的量在4.0％以下。
優(yōu)選的方案是，一種高純度的丹參酮IIA磺酸鈉的制備方法(1)往55～60℃的乙醇中，加入市售的或自制的較低純度的丹參酮IIA磺酸鈉粉末，邊加邊攪拌使粉末溶解，獲得近飽和的澄清溶液，按溶液體積比為5％的比例加入氯仿，將溶液加熱到70±2℃，在室溫下靜置，緩緩降溫到室溫，然后降溫到2～6℃，待結(jié)晶析出后，過濾，真空干燥；(2)測(cè)定含量和有關(guān)物質(zhì)，結(jié)果含量在96.0％以上，有關(guān)物質(zhì)的總量在10.0％以下，單個(gè)雜質(zhì)的量在4.0％以下。
更優(yōu)選的方案是，一種高純度的丹參酮IIA磺酸鈉的制備方法(1)往57～60℃的乙醇中，加入市售的或自制的較低純度的丹參酮IIA磺酸鈉粉末，邊加邊攪拌使粉末溶解，獲得近飽和的澄清溶液，按溶液體積比為5％的比例加入氯仿，將溶液加熱到70±2℃，在室溫下靜置，緩緩降溫到室溫，然后降溫到2～4℃，待結(jié)晶析出后，過濾，真空干燥；(2)再按上述方法重復(fù)一次，得磚紅色結(jié)晶性粉末；(3)測(cè)定含量和有關(guān)物質(zhì)，結(jié)果含量在96.0％以上，有關(guān)物質(zhì)的總量在10.0％以下，單個(gè)雜質(zhì)的量在4.0％以下。
上述的本發(fā)明使用的較低純度的丹參酮IIA磺酸鈉，可以是市售的，如從上海第一生化藥業(yè)有限公司購(gòu)買(如批號(hào)為Y041120)，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)-0923檢驗(yàn)，含量為96.3％，有關(guān)物質(zhì)按兩種雜質(zhì)分別計(jì)算，均小于4％(但均大于3％，以4％、3％對(duì)照)；也可以是自制的，如用市售的丹參酮IIA經(jīng)過磺化反應(yīng)制成較低純度的丹參酮IIA磺酸鈉。
上述的本發(fā)明使用的較低純度的丹參酮IIA磺酸鈉，對(duì)其純度并不需要進(jìn)行嚴(yán)格的控制，因?yàn)榭梢酝ㄟ^上述的純化方法進(jìn)行多次操作，可以獲得本發(fā)明所述的高純度的丹參酮IIA磺酸鈉，因此，上述的本發(fā)明使用的較低純度的丹參酮IIA磺酸鈉，按標(biāo)準(zhǔn)-0923測(cè)定，其含量可以是90％以上的，兩種雜質(zhì)均小于8％的原材料。
使用本發(fā)明的高純度的丹參酮IIA磺酸鈉制備的制劑，其中包括治療上有效量的丹參酮IIA磺酸鈉和醫(yī)藥上可接受的輔料。
使用本發(fā)明的高純度的丹參酮IIA磺酸鈉制備的制劑，包括小容量水針劑、凍干粉針劑、大容量輸液劑、口服液體制劑、口服固體制劑等。
上述的小容量水針劑，每支可裝1～25ml，其中含有本發(fā)明所述的高純度的丹參酮IIA磺酸鈉1～200mg，其中還含有藥學(xué)上可接受的輔料。
上述的凍干粉針劑，每瓶中含有本發(fā)明所述的高純度的丹參酮IIA磺酸鈉1～200mg，其中還含有藥學(xué)上可接受的輔料。
上述的大容量輸液劑，每瓶可裝50～1000ml，其中含有本發(fā)明所述的高純度的丹參酮IIA磺酸鈉1～500mg，其中還含有藥學(xué)上可接受的輔料。
上述的口服液體藥劑，以每10ml計(jì)，其中含有本發(fā)明所述的高純度的丹參酮IIA磺酸鈉1～200mg，其中還含有藥學(xué)上可接受的輔料。
使用本發(fā)明的高純度的丹參酮IIA磺酸鈉制備的制劑，采用高效液相色譜法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)，扣除溶劑和/或輔料的色譜峰，其中有關(guān)物質(zhì)的總量在10.0％以下，單個(gè)雜質(zhì)的量在4.0％以下。
制劑的有關(guān)物質(zhì)檢查和含量測(cè)定也可采用上述原料藥質(zhì)量控制的高效液相色譜法進(jìn)行，只要在配液過程中作簡(jiǎn)單的調(diào)整，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易做到的，比如，取適量的制劑，用流動(dòng)相溶解或稀釋成相應(yīng)濃度，必要時(shí)過濾即可。
以小容量水針劑為例，用相同的處方，分別用低純度和高純度的丹參酮IIA磺酸鈉原料藥制成的注射液。結(jié)果表明，在40℃加速試驗(yàn)條件下一個(gè)月后，兩種原料制成的小水針劑在沉淀形成、有關(guān)物質(zhì)變化方面有明顯的差異(1)低純度原料制成的小水針約有20～30％的樣品產(chǎn)生白色塊狀沉淀，有關(guān)物質(zhì)總量由0月的約13.5％增加到3月的約16.5％，最大單一雜質(zhì)的量由0月的約6.1％增加到3月的約7.8％，分別增加約3.0％和1.7％。
(2)高純度原料制成的小水針樣品未見產(chǎn)生沉淀，有關(guān)物質(zhì)總量由0月的約6.4％～9.8％，增加到3月的約6.9％～10.4％，最大單一雜質(zhì)的量由0月的約2.4％～3.8％，增加到3月的約2.6％～4.1％，分別增加約0.5％和0.25％。
這種有益效果是由于原料藥純度提高而產(chǎn)生的。在將原料藥提純后，小水針的質(zhì)量有了明顯提高。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地做到，使用這種高純度的原料藥制備其它的制劑，也會(huì)使制劑的質(zhì)量提高。即本發(fā)明的用高純度丹參酮IIA磺酸鈉制成的制劑，不僅包括小容量水針劑，還包括大容量注射液，如葡萄糖注射液、氯化鈉注射液等，還包括粉針劑、口服溶液劑、口服固體制劑等。
因此，本發(fā)明的目的在于，提供一種高純度的丹參酮IIA磺酸鈉、這種高純度的丹參酮IIA磺酸鈉的制備方法、以及使用這種丹參酮IIA磺酸鈉制成的制劑。
本發(fā)明的基礎(chǔ)在于丹參酮IIA磺酸鈉原料藥按標(biāo)準(zhǔn)-0923檢驗(yàn)合格的，但按上述的高效液相色譜法檢驗(yàn)，含量在96.0％以下，有關(guān)物質(zhì)的總量在10.0％以上，單個(gè)雜質(zhì)的量在4.0％以上，用這種原料藥制備注射液時(shí)，在40℃加速試驗(yàn)條件下一個(gè)月后，制劑的有關(guān)物質(zhì)量升高快(按HPLC法測(cè)定)，并且容易產(chǎn)生沉淀。但是，在將上述這種純度較低的丹參酮IIA磺酸鈉原料藥經(jīng)過純化，制成含量在96.0％以上，有關(guān)物質(zhì)的總量在10.0％以下，單個(gè)雜質(zhì)的量在4.0％以下的高純度的丹參酮IIA磺酸鈉后，用這種純化的原料藥制備制劑，可以明顯地克服制劑在40℃加速試驗(yàn)條件下易出現(xiàn)沉淀和有關(guān)物質(zhì)增加較快的缺陷。
在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明人完成了本發(fā)明。
具體實(shí)施方式下面實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明，但所述實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不是限制本發(fā)明。
實(shí)施例1(1)原材料為低純度的丹參酮IIA磺酸鈉(批號(hào)為Y041120)，購(gòu)自上海第一生化藥業(yè)有限公司，按標(biāo)準(zhǔn)-0923測(cè)定，含量為96.3％，有關(guān)物質(zhì)總量小于8％，單一雜質(zhì)的量小于4％[但分別大于6％和3％，以4％、3％對(duì)照]，其余項(xiàng)目符合規(guī)定。檢驗(yàn)合格后，用本發(fā)明的高效液相色譜法測(cè)定含量和有關(guān)物質(zhì)，含量為93.8％。有關(guān)物質(zhì)的總量為13.42％，單個(gè)雜質(zhì)的量為6.11％。
(2)往56℃的乙醇1000ml中，加入較低純度的丹參酮IIA磺酸鈉(批號(hào)Y041120)粉末200g；(3)邊加邊攪拌使粉末溶解，獲得近飽和的澄清溶液；(4)按體積比5％的比例加入的氯仿50ml，攪拌均勻，將溶液加熱到72℃，攪拌溶解；(5)在室溫下靜置，緩緩降溫到室溫，靜置12小時(shí)，然后降溫到2～4℃，靜置12小時(shí)；(6)待結(jié)晶析出后，過濾，真空干燥，得磚紅色結(jié)晶性粉末(批號(hào)Y050415)。
制成的高純度的丹參酮IIA磺酸鈉，按照中國(guó)國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-(HD-0923)-2002測(cè)定，各項(xiàng)指標(biāo)均符合規(guī)定。再按照本發(fā)明的高效液相色譜法，測(cè)定含量和有關(guān)物質(zhì)實(shí)施例2(1)原材料為上述實(shí)施例1制成的高純度的丹參酮IIA磺酸鈉(批號(hào)Y050415)，按標(biāo)準(zhǔn)-0923測(cè)定，含量為98.6％，有關(guān)物質(zhì)總量小于7％，單一雜質(zhì)的量小于4％[但分別大于6％和3％，以4％、3.5％、3％對(duì)照]，其余項(xiàng)目符合規(guī)定。檢驗(yàn)合格后，用本發(fā)明的高效液相色譜法測(cè)定含量和有關(guān)物質(zhì)，含量為97.4％，有關(guān)物質(zhì)的總量為7.73％，單個(gè)雜質(zhì)的量為2.97％。
(2)往59℃的乙醇1000ml中，加入的較低純度的丹參酮IIA磺酸鈉(批號(hào)Y050415)粉末200g；(3)邊加邊攪拌使粉末溶解，獲得近飽和的澄清溶液；(4)按體積比5％的比例加入的氯仿50ml，攪拌均勻，將溶液加熱到72℃，攪拌溶解；
(5)在室溫下靜置，緩緩降溫到室溫，靜置12小時(shí)，然后降溫到2～3℃，靜置24小時(shí)；(6)待結(jié)晶析出后，過濾，真空干燥，得磚紅色結(jié)晶性粉末[批號(hào)Y050420]。
制成的高純度的丹參酮IIA磺酸鈉，按照標(biāo)準(zhǔn)-0923測(cè)定，各項(xiàng)指標(biāo)均符合規(guī)定。再按照本發(fā)明的高效液相色譜法，測(cè)定含量和有關(guān)物質(zhì)。
實(shí)施例3(1)原材料為低純度的丹參酮IIA磺酸鈉(批號(hào)為Y050212)，自制，自制方法為按現(xiàn)有技術(shù)，從丹參中提取純度為81％的丹參酮IIA(HPLC法)，然后用濃硫酸進(jìn)行磺化反應(yīng)，制得丹參酮IIA磺酸鈉(批號(hào)Y050212)。按標(biāo)準(zhǔn)-0923測(cè)定，含量為93.3％，有關(guān)物質(zhì)總量小于12％，單一雜質(zhì)的量小于6％[但分別大于10％和5％，以5％、6％對(duì)照]，其余項(xiàng)目符合規(guī)定，檢驗(yàn)合格后。用本發(fā)明的高效液相色譜法測(cè)定含量和有關(guān)物質(zhì)，含量為92.6％，有關(guān)物質(zhì)的總量為13.66％，單個(gè)雜質(zhì)的量為6.03％。
(2)往53℃的乙醇1000ml中，加入的較低純度的丹參酮IIA磺酸鈉(批號(hào)050212)粉末200g；(3)邊加邊攪拌使粉末溶解，獲得近飽和的澄清溶液；(4)按體積比7％的比例加入的氯仿70ml，攪拌均勻，將溶液加熱到70℃，攪拌溶解；(5)在室溫下靜置，緩緩降溫到室溫，靜置12小時(shí)，然后降溫到4～6℃，靜置12小時(shí)；(6)待結(jié)晶析出后，過濾，真空干燥，得磚紅色結(jié)晶性粉末；(7)所得粉末再按以上(2)～(6)步驟重復(fù)結(jié)晶一次，得磚紅色結(jié)晶性粉末(批號(hào)Y050425)。
制成的高純度的丹參酮IIA磺酸鈉，按照標(biāo)準(zhǔn)-0923測(cè)定，各項(xiàng)指標(biāo)均符合規(guī)定。再按照本發(fā)明的高效液相色譜法，測(cè)定含量和有關(guān)物質(zhì)。
實(shí)施例4測(cè)定丹參酮IIA磺酸鈉的含量和有關(guān)物質(zhì)的高效液相色譜法高效液相色譜法測(cè)定含量和有關(guān)物質(zhì)照《中國(guó)藥典》2005年版二部附錄VD進(jìn)行。
(i)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以濃度為0.05mol/L并用醋酸調(diào)pH值為3.0的醋酸銨溶液與甲醇的體積比為35∶65的混合溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm，調(diào)節(jié)流速至丹參酮IIA磺酸鈉的保留時(shí)間約為8分鐘，理論板數(shù)按丹參酮IIA磺酸鈉峰計(jì)算應(yīng)不低于2500，丹參酮IIA磺酸鈉峰與其它峰的分離度應(yīng)大于1.2；(ii)有關(guān)物質(zhì)檢查按(i)所確定的色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的方法進(jìn)行測(cè)定。
取丹參酮IIA磺酸鈉適量，加流動(dòng)相溶解，制成濃度約為100μg/ml的溶液，作為供試品溶液，精密量取供試品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液；取對(duì)照溶液20μl，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成份色譜峰的峰高約為滿量程的20％；另取丹參酮IIA對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成濃度為10μg/ml的溶液，取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖至丹參酮IIA峰保留時(shí)間的1.2倍；再精密量取對(duì)照溶液與供試品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至丹參酮IIA峰保留時(shí)間的1.2倍；供試品溶液的色譜圖中各雜質(zhì)色譜峰面積之和，除以對(duì)照溶液主峰面積，計(jì)算有關(guān)物質(zhì)的總量；供試品溶液的色譜圖中最大的單個(gè)雜質(zhì)的色譜峰面積除以對(duì)照溶液主峰面積，計(jì)算單個(gè)雜質(zhì)的量；(iii)含量測(cè)定精密稱取丹參酮IIA磺酸鈉約25mg，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密吸取5ml，置50ml的量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以符合中國(guó)國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-(HD-0923)-2002，用(ii)項(xiàng)方法檢查有關(guān)物質(zhì)的總量小于2％，單個(gè)雜質(zhì)的量在1.0％以下，并在60℃下真空干燥至恒重的丹參酮IIA磺酸鈉為對(duì)照品，精密稱取該丹參酮IIA磺酸鈉對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解并制成濃度約為25μg/ml的對(duì)照品溶液；取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。
在測(cè)定制劑的含量和有關(guān)物質(zhì)時(shí)，取與原料藥相當(dāng)量的制劑，用流動(dòng)相配制供試品溶液，必要時(shí)過濾，其余操作與上述(ii)和(iii)相同。
實(shí)施例5丹參酮IIA磺酸鈉原料藥的檢驗(yàn)(1)用標(biāo)準(zhǔn)-0923的方法測(cè)定實(shí)施例1～3所涉及的低純度的丹參酮IIA磺酸鈉原料藥(Y041120、Y050212)和高純度的丹參酮IIA磺酸鈉原料藥(Y050415、Y050420、Y050425)，結(jié)果見表1。
(2)用本發(fā)明實(shí)施例4的方法測(cè)定實(shí)施例1～3所涉及的低純度的丹參酮IIA磺酸鈉原料藥和高純度的丹參酮IIA磺酸鈉原料藥，結(jié)果見表1。
含量測(cè)定用對(duì)照品系本發(fā)明人按實(shí)施例1的方法提純，批號(hào)為C050110，按標(biāo)準(zhǔn)-0923檢查，符合規(guī)定；用實(shí)施例4(ii)項(xiàng)方法檢查有關(guān)物質(zhì)的總量為1.17％，最大的單個(gè)雜質(zhì)的量為0.62。
表1用國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)的方法測(cè)定丹參酮IIA磺酸鈉原料藥的檢驗(yàn)結(jié)果
從上表可見，采用本發(fā)明的制備方法，制成的高純度的丹參酮IIA磺酸鈉原料藥，用高效液相色譜法測(cè)定，含量明顯升高，有關(guān)物質(zhì)明顯降低。但采用國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)的方法測(cè)定卻看不出明顯的提高。
實(shí)施例6用不同純度的丹參酮IIA磺酸鈉制備小容量水針劑參考標(biāo)準(zhǔn)-1014，以相同的處方和工藝，采用不同純度(不同批號(hào))的丹參酮IIA磺酸鈉制備小容量水針劑，處方如下
制備方法取處方量的丹參酮IIA磺酸鈉、EDTA-Na，加500ml注射用水，攪拌溶解。加0.1％(w/v)活性炭，加1M鹽酸溶液或1M氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值為4.5±0.2，加熱至75～80℃，攪拌10分鐘，冷至45～50℃，粗濾脫炭，補(bǔ)加注射用水至1000ml，調(diào)節(jié)pH值至4.5±0.2，用0.22μm微孔濾膜過濾，灌裝，每瓶裝5ml，封口，115℃滅菌20分鐘，即得丹參酮IIA磺酸鈉小容量注射液。
所用的5批原料分別為Y041120、Y050212、Y050415、Y050420、Y050425，按以上處方和工藝制成的注射液的批號(hào)分別為Inj-1120、Inj-0212、Inj-0415、Inj-0420、Inj-0425。
將制成的小容量水針劑置于40℃的恒溫箱中放置3個(gè)月，觀察0月(未經(jīng)40℃放置即測(cè)定)和3月時(shí)樣品沉淀產(chǎn)生情況，再按照實(shí)施例4的方法測(cè)定含量和有關(guān)物質(zhì)。
另按標(biāo)準(zhǔn)-0923的方法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)。
沉淀的觀察方法為每批樣品取50支(瓶)觀察，累計(jì)產(chǎn)生沉淀的安瓿(瓶)數(shù)。結(jié)果見表2。
表2丹參酮IIA磺酸鈉小容量注射液40℃留樣質(zhì)量變化結(jié)果
注*雜質(zhì)-I為丹參酮I磺酸鈉；*雜質(zhì)-II為丹參酮IIA。
從上表可見，以相同的處方和工藝，采用不同純度的原料藥，制成丹參酮IIA磺酸鈉小容量注射液，其穩(wěn)定性差異明顯低純度的原料藥制成的制劑容易出現(xiàn)沉淀，雜質(zhì)隨留樣過程增長(zhǎng)較快；而高純度的原料藥制成的制劑未見出現(xiàn)沉淀，雜質(zhì)隨留樣過程變化較小。
實(shí)施例7
用不同純度的丹參酮IIA磺酸鈉制備大容量葡萄糖注射液、凍干粉針劑以兩批原料Y050212、Y050420，分別以相同的處方，分別制備丹參酮IIA磺酸鈉的大容量注射液和凍干粉針劑。
大容量注射液的處方如下
制備方法取處方量的丹參酮IIA磺酸鈉，加500ml注射用水，攪拌溶解，加入處方量的葡萄糖，攪拌溶解。加0.1％(w/v)活性炭，加鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值為4.5±0.2，加熱至沸，煮沸10分鐘，冷至55～60℃，粗濾脫炭，補(bǔ)加注射用水至1000ml，調(diào)節(jié)pH值至4.5±0.2，用0.22μm微孔濾膜過濾，灌裝，每瓶裝250ml，封口，115℃滅菌20分鐘，即得含有丹參酮IIA磺酸鈉的大容量葡萄糖注射液。批號(hào)分別為P0212、P0420。
凍干粉針劑的處方如下
制備方法取處方量的丹參酮IIA磺酸鈉，加500ml注射用水，攪拌溶解，加入處方量的甘露醇，攪拌溶解。加0.1％(w/v)活性炭，調(diào)節(jié)pH值為4.5±0.2，加熱至沸，煮沸10分鐘，冷至50～60℃，粗濾脫炭，補(bǔ)加注射用水至1000ml，調(diào)節(jié)pH值至4.5±0.2，用0.22μm微孔濾膜過濾，灌裝，每瓶2ml，半加塞，冷凍干燥。即得含有丹參酮IIA磺酸鈉的凍干粉針劑。批號(hào)分別為D0212、D0420。
冷凍干燥方法可參考相關(guān)的教科書，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以很容易地實(shí)現(xiàn)。
將制成的大容量葡萄糖注射液和凍干粉針劑置于40℃的恒溫箱中放置3個(gè)月，觀察葡萄糖注射液在0月和3月時(shí)樣品沉淀產(chǎn)生情況，再按照實(shí)施例4的方法測(cè)定葡萄糖注射液和凍干粉針劑的含量和有關(guān)物質(zhì)。結(jié)果見表3。
表3丹參酮IIA磺酸鈉大容量輸液劑和凍干粉針劑40℃留樣質(zhì)量變化結(jié)果
從上表可見，以相同的處方和工藝，采用不同純度的原料藥，制成丹參酮IIA磺酸鈉大容量葡萄糖注射液和冷凍干燥針劑，其穩(wěn)定性差異明顯低純度的原料藥制成的制劑出現(xiàn)沉淀，雜質(zhì)隨留樣過程增長(zhǎng)較快；而高純度的原料藥制成的制劑未見出現(xiàn)沉淀，雜質(zhì)隨留樣過程變化較小。
本發(fā)明的高純度的丹參酮IIA磺酸鈉還可以用于其它制劑，如口服液體藥劑、口服固體制劑等，不言而喻，本發(fā)明是延及這些制劑產(chǎn)品的。
權(quán)利要求
1.一種高純度的丹參酮IIA磺酸鈉，其特征在于，(1)采用高效液相色譜法測(cè)定含量，其中的丹參酮IIA磺酸鈉的含量在96.0％以上，(2)采用高效液相色譜法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)，其中有關(guān)物質(zhì)的總量在10.0％以下，單個(gè)雜質(zhì)的量在4.0％以下；所述的高效液相色譜法測(cè)定含量和有關(guān)物質(zhì)的方法，照《中國(guó)藥典》2005年版二部附錄VD進(jìn)行，包括以下步驟(i)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以濃度為0.05mol/L并用醋酸調(diào)pH值為3.0的醋酸銨溶液與甲醇的體積比為35∶65的混合溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm，調(diào)節(jié)流速至丹參酮IIA磺酸鈉的保留時(shí)間約為8分鐘，理論板數(shù)按丹參酮IIA磺酸鈉峰計(jì)算應(yīng)不低于2500，丹參酮IIA磺酸鈉峰與其它峰的分離度應(yīng)大于1.2；(ii)有關(guān)物質(zhì)檢查取丹參酮IIA磺酸鈉適量，加流動(dòng)相溶解，制成濃度約為100μg/ml的溶液，作為供試品溶液，精密量取供試品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液；取對(duì)照溶液20μl，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成份色譜峰的峰高約為滿量程的20％；另取丹參酮IIA對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成濃度為10μg/ml的溶液，取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖至丹參酮IIA峰保留時(shí)間的1.2倍；再精密量取對(duì)照溶液與供試品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至丹參酮IIA峰保留時(shí)間的1.2倍；供試品溶液的色譜圖中各雜質(zhì)色譜峰面積之和，除以對(duì)照溶液主峰面積，計(jì)算有關(guān)物質(zhì)的總量；供試品溶液的色譜圖中最大的單個(gè)雜質(zhì)的色譜峰面積除以對(duì)照溶液主峰面積，計(jì)算單個(gè)雜質(zhì)的量；(iii)含量測(cè)定精密稱取丹參酮IIA磺酸鈉約25mg，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，再精密吸取5ml，置50ml的量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；以符合中國(guó)國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-10001-(HD-0923)-2002，用(ii)項(xiàng)方法檢查有關(guān)物質(zhì)的總量小于2％，單個(gè)雜質(zhì)的量在1.0％以下，并在60℃下真空干燥至恒重的丹參酮IIA磺酸鈉為對(duì)照品，精密稱取該丹參酮IIA磺酸鈉對(duì)照品適量，用流動(dòng)相溶解并制成濃度約為25μg/ml的對(duì)照品溶液；取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。
2.按權(quán)利要求1的丹參酮IIA磺酸鈉，其特征在于，(1)采用高效液相色譜法測(cè)定含量，其中的丹參酮IIA磺酸鈉的含量在97.0％以上，(2)采用高效液相色譜法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)，其中有關(guān)物質(zhì)的總量在8.0％以下，單個(gè)雜質(zhì)的量在3.0％以下。
3.按權(quán)利要求2的丹參酮IIA磺酸鈉，其特征在于，(1)采用高效液相色譜法測(cè)定含量，其中的丹參酮IIA磺酸鈉的含量在98.0％以上，(2)采用高效液相色譜法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)，其中有關(guān)物質(zhì)的總量在7.0％以下，單個(gè)雜質(zhì)的量在2.5％以下。
4.按權(quán)利要求1的高純度的丹參酮IIA磺酸鈉的制備方法，其特征在于，其中包括以下步驟往50～60℃的乙醇中，加入較低純度的丹參酮IIA磺酸鈉粉末，邊加邊攪拌使粉末溶解，獲得近飽和的澄清溶液，按溶液體積比為3～7％的比例加入氯仿，將溶液加熱到70±3℃，在室溫下靜置，緩緩降溫到室溫，然后降溫到2～6℃，待結(jié)晶析出后，過濾，真空干燥，得磚紅色結(jié)晶性粉末。
5.按權(quán)利要求4的制備方法，其特征在于，其中包括以下步驟往55～60℃的乙醇中，加入市售的或自制的較低純度的丹參酮IIA磺酸鈉粉末，邊加邊攪拌使粉末溶解，獲得近飽和的澄清溶液，按溶液體積比為5％的比例加入氯仿，將溶液加熱到70±2℃，在室溫下靜置，緩緩降溫到室溫，然后降溫到2～6℃，待結(jié)晶析出后，過濾，真空干燥，得磚紅色結(jié)晶性粉末。
6.按權(quán)利要求5的制備方法，其特征在于，其中包括以下步驟往57～60℃的乙醇中，加入市售的或自制的較低純度的丹參酮IIA磺酸鈉粉末，邊加邊攪拌使粉末溶解，獲得近飽和的澄清溶液，按溶液體積比為5％的比例加入氯仿，將溶液加熱到70±2℃，在室溫下靜置，緩緩降溫到室溫，然后降溫到2～4℃，待結(jié)晶析出后，過濾，真空干燥；再按上述方法重復(fù)一次，得磚紅色結(jié)晶性粉末。
7.一種按權(quán)利要求1的高純度的丹參酮IIA磺酸鈉為生理活性成分制成的制劑，其特征在于，該制劑中包括治療上有效量的丹參酮IIA磺酸鈉和醫(yī)藥上可接受的輔料。
8.按權(quán)利要求7的制劑，其特征在于，該制劑為小容量注射液、凍干粉針劑、大容量輸液劑、口服液體制劑或口服固體制劑。
9.按權(quán)利要求7或8的制劑，其特征在于，按權(quán)利要求1的高效液相色譜法測(cè)定該制劑中的有關(guān)物質(zhì)，扣除溶劑和/或輔料的色譜峰，其中有關(guān)物質(zhì)的總量在10.0％以下，單個(gè)雜質(zhì)的量在4.0％以下。
全文摘要
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種丹參酮IIA磺酸鈉，特別是涉及一種高純度的丹參酮IIA磺酸鈉，還涉及該丹參酮IIA磺酸鈉的制備方法，以及使用該丹參酮IIA磺酸鈉制成的制劑。本發(fā)明中將符合標(biāo)準(zhǔn)－0923的丹參酮IIA磺酸鈉純化后，采用高效液相色譜法測(cè)定，原料藥的有關(guān)物質(zhì)的總量在10.0％以下，單個(gè)雜質(zhì)的量在4.0％以下，含量在96.0％以上，采用這種高純度的丹參酮IIA磺酸鈉原料藥制備丹參酮IIA磺酸鈉的注射液，可以明顯地克服制備水針劑時(shí)存在的有關(guān)物質(zhì)上升和容易出現(xiàn)沉淀等問題；同時(shí)用這種高純度的丹參酮IIA磺酸鈉制備的大容量輸液劑、凍干粉針劑等也可取得良好的效果。
文檔編號(hào)A61K31/343GK1915986SQ20051009048
公開日2007年2月21日 申請(qǐng)日期2005年8月17日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月17日
發(fā)明者張玉梅, 晏四平 申請(qǐng)人:阿爾貝拉醫(yī)藥控股(通化)有限公司