專利名稱：新型β-氨基酸衍生物的制作方法
專利說(shuō)明 本發(fā)明涉及二肽單元Gly-Asp的等排物的β-氨基酸衍生物。本發(fā)明的化合物是具有抗血栓形成活性的假肽。具體地說(shuō)，這類化合物之所以著名，就在于它們能抑制纖維蛋白原結(jié)合到血小板上的纖維蛋白原受體(糖蛋白GP Ⅱ b/Ⅲ a)。
血栓形成過(guò)程中決定性的一步是纖維蛋白原分子使血小板交聯(lián)。這一步的要求是興奮劑如凝血酶或二磷酸腺苷(ADP)對(duì)血小板的活化。這種活化引起細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)調(diào)整，其結(jié)果是GP Ⅱ b/Ⅲ a以活性形式暴露出來(lái)。
GP Ⅱ b/Ⅲ a屬于稱為integrins的結(jié)合受體家族。除纖維蛋白原外，GP Ⅱ b/Ⅲ a的進(jìn)一步配體是fibronectin，vitronectin和vonWillebrand因子。這些配體在止血過(guò)程中起著重要作用，在這一過(guò)程中它們引起血小板粘合和凝聚。這些相互作用的特定治療性抑制可能對(duì)血栓形成過(guò)程中的一個(gè)決定性步驟有影響。纖維蛋白原及其它配體的結(jié)合，是由肽序列Arg-Gly-Asp(RGD)引起的(RuoslahtiE.，Pierschbacher M.，Cell 1986，44，517-18)。
纖維蛋白原在其γ鏈C-末端上還有一個(gè)對(duì)纖維蛋白原受體有親合力的肽序列(His-His-Leu-Gly-Gly-Ala-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val)。含有這些序列的小合成肽可能抑制纖維蛋白原、fibronectin、vitronectin和von Willebrand因子與GP Ⅱ b/Ⅲ a的結(jié)合，因而也可能抑制血小板凝聚(Plow等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1985，82，8057-61;Ruggeri等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1986，5708-12;Ginsberg等人，J.Biol.Chem.1985，260，3931-36;Gartner等人，J.Biol.Chem.1987，260，11，891-94)。
本發(fā)明提供假肽Arg-Gly-Asp類似物，其中Gly-Asp單元由β-氨基酸的衍生物代替，且其中Arg在多數(shù)情況下由一種芐脒羧酸代替。這種新型假肽抑制血小板凝聚和血栓形成。
因此，本發(fā)明涉及呈游離形式或鹽形式的化學(xué)式Ⅰ的假肽
式中R1是化學(xué)式-COOH、-COOM或-COO(C1-C4)烷基的基團(tuán)，輕好是-COOH，其中 M是堿金屬或堿土金屬原子，較好是Li， X是-CH2-，-CH＝，-CO-，-C*HOH-或-C*HO((C1-C4)烷基)-，較好是-CH2-， 或者也較好的是，X和R1合在一起成為一個(gè)
Y是-(CH2)m-，＝CH-或-NH-，較好是-(CH2)m-且m是1或2，較好是2 A或者是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中D是氫，一個(gè)保護(hù)基團(tuán)Z或一個(gè)通過(guò)其羰基鍵合的α-氨基酸， R2是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中n是3或4，且 t是0或1 或者 A是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中k是3，4，5或6， 0是3，4或5，且 P是0，1或2，較好是1 B或者是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中q是1或2，較好是1，且 R3是(C1-C4)烷基，(CH3)2CH-，叔丁基，1-金剛烷基，三甲基甲硅烷基，1-萘基，苯基，3-吲哚基或(C1-C4)烷氧基苯基，較好是(CH3)2CH，(C1-C4)烷氧基苯基(如對(duì)甲氧基苯基)，或1-金剛烷基，尤其是(CH3)2CH，或者 B是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中r是0，1或2，較好是0，且 R4是(C1-C4)烷基，2-丙基，叔丁基，苯基，對(duì)(C1-C4)烷氧基苯基，1-萘基，甲苯基，甲磺酰基或三磺?；?，較好是甲磺?；蛘? B是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中D是氫或一個(gè)保護(hù)基團(tuán)Z，且 R5是苯基-(CH2)t-，吲哚-3-基-(CH2)t-，萘-1-基-(CH2)t-，金剛烷-1-基-(CH2)t-，丙-2-基-(CH2)t-，三甲基甲硅烷基-(CH2)t-，或叔丁基-(CH2)t-，式中t的定義同上，或者 B是一種通過(guò)其羰基鍵合的α-氨基酸。
這些化學(xué)式中每一個(gè)用星號(hào)(＊)標(biāo)出的不對(duì)稱C原子既可以有R構(gòu)型也可以有S構(gòu)型。
在這些化學(xué)式中，(C1-C4)烷基較好是甲基，且(C1-C4)烷氧基較好是甲氧基。保護(hù)基團(tuán)Z較好是芐氧碳?；蚴宥⊙跆减；?。在D和/或B代表一種α-氨基酸的情況下，這可以是一種天然存在的α-氨基酸，或者一種非天然的α-氨基酸。
在本說(shuō)明書(shū)中，除非另有說(shuō)明，否則諸如“化學(xué)式Ⅰ的化合物”等術(shù)語(yǔ)包括呈鹽形式以及呈游離形式的化合物。
較好的化合物是化學(xué)式Ⅰ′的化合物
式中R1和m的定義同上，s是0和1，R6＝H、OH或0(C1-C4)烷基，或 R1和R2共同構(gòu)成一個(gè)-O-CO-基團(tuán)， B′或者是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中R3和q的定義同上，或者 B′是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中R4和r的定義同上，或者 B′是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中R5和D的定義同上。
尤其好的化合物是化學(xué)式Ⅰ″的化合物
化學(xué)式Ⅰ″ 式中R1、R6、m和s的定義同上，或 R1和R6共同構(gòu)成一個(gè)-O-CO-基團(tuán)，且 B″是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中q和R3的定義同上。
最好的化學(xué)式Ⅰ化合物是下列化學(xué)式Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ的化合物

這些分別是實(shí)例2、3、6、9、8和7的化合物。包括以上化學(xué)式Ⅱ至Ⅴ的化合物這一類型的化學(xué)式Ⅰ化合物，可以使用類似于如下合成方案1的步驟進(jìn)行合成。

在上述化學(xué)式中，[V]m-是基團(tuán)[CH2]m，且m、A、B、X、Y和R1的定義同上。
按照合成方案1，X＝Y(jié)＝CH2，R1＝COOH且m＝1或2的化學(xué)式Ⅰ的化合物，是從化合物X在室溫用三氟乙酸處理產(chǎn)生的?；衔颴是從Z保護(hù)的酯Ⅸ，通過(guò)使氨基與異戊酸或?qū)籽趸奖?取決于基團(tuán)B)偶合，同時(shí)添加DCC和HOBT，然后用LiOH使甲酯水解，借助于2，2，2-三氯乙酰亞胺酸叔丁酯使酸轉(zhuǎn)化成叔丁酯，在還原條件下用H2/Pd-C脫除保護(hù)基團(tuán)Z，隨后與適當(dāng)?shù)幕鶊F(tuán)A[例如A代表(對(duì)脒基苯基)-(CH2)5-COOH，其中S的定義同上]偶合，再次添加DCC和HOBT，這樣得到的。甲酯Ⅸ是從Z＝Boc保護(hù)的氨基酸Ⅷ，通過(guò)利用重氮甲烷/Ag2O方法(Helv.Chim.Act.58，969(1975))使羧酸鏈延長(zhǎng)，并在室溫用三氟乙酸脫除Boc基團(tuán)而得到的。
此外，包括上述化學(xué)式Ⅵ和Ⅶ的化合物這一類型的化學(xué)式Ⅰ化合物，可以利用類似于如下合成方案2的步驟來(lái)制備。
合成方案2
在上述化學(xué)式中，[V]m是[CH2]m，且m、A、B、X、Y和R1的定義同上。
按照合成方案2，其m為1、X和R1共同構(gòu)成HC*-O-CO-基團(tuán)且Y為CH2基團(tuán)的化學(xué)式Ⅰ化合物，可從化合物ⅩⅣ通過(guò)與適當(dāng)基團(tuán)A偶合(類似于合成方案1)，在還原條件下用H2/Pd-C脫除保護(hù)基團(tuán)，隨后與適當(dāng)基團(tuán)B偶合(類似于合成方案1)，然后在室溫用三氟乙酸脫除保護(hù)基團(tuán)這樣產(chǎn)生的?；衔铫羰菑幕衔铫?，通過(guò)在芐醇存在下用二苯磷酰基疊氮和三乙胺使羧酸轉(zhuǎn)化成Z保護(hù)的胺，并在四氫呋喃中用三苯膦還原疊氮基這樣得到的。羧酸ⅩⅢ是從化合物Ⅻ，利用酸側(cè)鏈的對(duì)映選擇性引進(jìn)分三步獲得的a)與Evans惡唑烷酮偶合，引進(jìn)手性輔助基團(tuán)(J.Am.Chem.Soc.1990，112，4011);b)與六甲基二硅疊氮鋰生成酰胺烯醇化物，并與溴乙酸叔丁酯反應(yīng);c)用氫過(guò)氧化鋰(Li-perhydroxide)脫除手性輔助基團(tuán)。疊氮羧酸Ⅻ是從內(nèi)酯Ⅺ通過(guò)用甲磺酰氯進(jìn)行醇的甲磺?；茂B氮化鈉疊氮化，在乙醇中用苛性鈉溶液使內(nèi)酯開(kāi)環(huán)，并在咪唑存在下與叔丁基二甲基甲硅烷基氯反應(yīng)，引進(jìn)醇保護(hù)基團(tuán)而得到的。
化學(xué)式Ⅰ的化合物抑制纖維蛋白原與纖維蛋白原受體血小板(糖蛋白GP Ⅱ b/Ⅲ a)的結(jié)合。由于這種性質(zhì)，這類化合物能防止人體血小板凝聚和血塊形成，因而可用來(lái)防止和治療血栓形成、中風(fēng)、心肌梗塞形成、炎癥、動(dòng)脈硬化和腫瘤。進(jìn)一步的治療性使用領(lǐng)域是骨質(zhì)疏松癥、血栓溶解期間PTCA和添加之后的急性再閉塞。
本說(shuō)明及以下實(shí)例中所使用的縮略語(yǔ)有下列意義。
Z 苯甲酰氧碳酰 Boc 叔丁氧碳酰 DCC 二環(huán)己基碳化二亞胺 HOBT 羥基苯并三唑 DMF 二甲基甲酰胺 THF 四氫呋喃 TFA 三氟乙酸 EtoAc 乙酸乙酯 RP 反相 Pd/C(10%) 含10%鈀的鈀炭催化劑 LiOH 氫氧化鋰 PTCA 經(jīng)皮魯米那冠狀血管成形術(shù) TBDMS 叔丁基-二甲基甲硅烷基-氯硅烷 MeOH 甲醇 LiHMDS 六甲基二硅疊氮化鋰 DPPA 二苯基磷酰疊氮 EtOH 乙醇 NMM N-甲基嗎啉 實(shí)例1 (S)-3-(N-甲苯磺酰胺基)-6-[N-(對(duì)脒基苯乙酰)胺基]己酸 A)(S)-3-氨基-6-[N-[芐氧碳酰)胺基]己酸甲酯·三氟乙酸鹽 0.69毫升氯甲酸異丁酯在-15℃滴加到1.95克Boc-Orn(Z)-OH和0.74毫升NEt3(三乙胺)在12毫升THF中的溶液中。在-15℃30分鐘后，把沉淀的鹽酸鹽過(guò)濾掉，濾液在-15℃與40毫升(8毫摩爾)重氮甲烷的乙醚溶液混合。反應(yīng)混合物于0℃攪拌4小時(shí)，再于4℃靜置16小時(shí)。加水，用乙醚萃取該溶液。乙醚相用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)濃縮。所得到的殘留物用15毫升甲醇溶解，與246毫克氧化銀(Ⅰ)混合，加熱回流12小時(shí)。過(guò)濾除去固體物質(zhì)，把甲醇蒸發(fā)掉，殘留物在硅膠上(乙酸乙酯/己烷為1∶1)進(jìn)行色譜分離。由此分離的產(chǎn)品是(S)-3-N-Boc-氨基-6-N-Z-氨基己酸甲酯。MS395(M+H)+。
所得到的產(chǎn)品在0℃與10毫升二氯甲烷及10毫升三氟乙酸混合，在室溫?cái)嚢?小時(shí)，真空蒸餾脫除溶劑，殘留物在高真空中干燥24小時(shí)。得到無(wú)色固體的(S)-3-氨基-6-[N-(芐氧碳酰)胺]己酸甲酯·三氟乙酸鹽產(chǎn)品。
B)(S)-3-N-甲苯磺酰胺基-6-N-Z-氨基己酸甲酯 1.3克從A步得到的三氟乙酸鹽溶于5毫升DMF及0.75毫升三乙胺中，然后添加468毫克甲苯磺酰氯。2小時(shí)后，加水，用乙醚進(jìn)行萃取。乙醚相用水洗，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)掉乙醚，殘留物在硅膠上(乙酸乙酯/己烷為1∶1)色譜分離。由此分離的產(chǎn)品是(S)-3-N-甲苯磺酰胺基-6-N-Z-氨基己酸甲酯。MS449(M+H)+。
C)(S)-3-(N-甲苯磺酰胺基)-6-[N-(對(duì)脒基苯乙酰)胺基]己酸 把按照B步得到的產(chǎn)品溶于20毫升甲醇中，在0.3克Pd/C(10%)和1.34毫升1N鹽酸存在下進(jìn)行氫化。當(dāng)反應(yīng)結(jié)束時(shí)，過(guò)濾除去催化劑，把甲醇蒸發(fā)掉，殘留物在高真空下干燥。得到500毫克(S)-3-(N-甲苯磺酰胺基)-6-氨基己酸甲酯鹽酸鹽無(wú)色泡沫。把0.5克氯化氫、373毫克N-Boc-對(duì)脒基苯乙酸(由對(duì)脒基苯乙酸的Boc酰化產(chǎn)生(Pharmazie 29，256-262))、0.19毫升三乙胺和199毫克HOBT溶于10毫升DMF中，并與276毫克DCC混合。在室溫下16小時(shí)后，過(guò)濾除去沉淀的固體，把DMF蒸發(fā)掉，殘留物用乙酸乙酯溶解。乙酸乙酯相用水洗滌、用硫酸鈉干燥、蒸發(fā)濃縮、殘留物在硅膠上(乙酸乙酯)色譜分離。所得到的產(chǎn)品與0.2毫升茴香醚在5毫升TFA中的溶液混合，在室溫?cái)嚢?小時(shí)，滴加到300毫升乙醚中。過(guò)濾掉沉淀的固體，溶于2毫升甲醇和1毫升水的混合物中，與57毫升LiOH·H2O混合。在室溫5小時(shí)后，把甲醇蒸發(fā)掉，水溶液用0.13毫升TFA中和。濾出沉淀的固體、干燥，用甲醇/乙醚重結(jié)晶。得到(S)-3-(N-甲苯磺酰胺基)-6-[N-(對(duì)脒基苯乙酰)胺基]己酸·三氟乙酸鹽產(chǎn)品白色固體，MS461(M+H)+。游離化合物是用已知方法從三氟乙酸鹽得到的。
實(shí)例2 (S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺基]-6-[N-(對(duì)脒基苯乙酰)胺基]己酸 A)(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺基]-6-N-Z-氨基己酸甲酯 1.3克從實(shí)例1A)步得到的三氟乙酸鹽、250毫克異戊酸、0.34毫升三乙胺和363毫克HOBT溶于5毫升DMF中，并與505毫克DCC混合。16小時(shí)后，過(guò)濾除去析出的沉積物，蒸出DMF，殘留物溶于乙酸乙酯。乙酸乙酯相用飽和碳酸氫鹽水溶液和水洗滌，用硫酸鈉干燥，在真空下脫除溶劑。殘留物用乙酸乙酯/乙醚重結(jié)晶純化，得到無(wú)色結(jié)晶的(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺基]-6-N-氨基己酸甲酯產(chǎn)品。MS379(M+H)+。
B)(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺基]-6-N-(對(duì)脒基苯乙酰)胺基]己酸 560毫克實(shí)例2A)步的產(chǎn)品溶于20毫升甲醇中，在0.3克Pd/C(10%)和1.41毫升1N鹽酸存在下進(jìn)行氫化。在如實(shí)例1C)步中所述的后處理之后，得到無(wú)色油狀的(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺]-6-氨基己酸甲酯·鹽酸鹽。400毫克鹽酸鹽和392毫克N-Boc-對(duì)脒基苯乙酸，連同0.2毫克三乙胺、259毫克HOBT和290毫克DCC一起反應(yīng)，按照實(shí)例1C)步中所述進(jìn)行后處理。在類似于實(shí)例1C)步那樣用TFA使Boc基團(tuán)斷裂并用LiOH·H2O使甲酯水解之后，所得到的粗產(chǎn)品用甲醇重結(jié)晶。分離出(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺基]-6-[N-(對(duì)脒基苯乙酰)胺基]己酸·三氟乙酸鹽產(chǎn)品，呈白色粉末;MS391(M+H)+。游離化合物是用已知方法從三氟乙酸鹽得到的。
實(shí)例3 (S)-3-N-[3-(對(duì)甲氧基苯基)丙酰]胺基-6-[N-(對(duì)脒基苯乙酰)胺基]己酸 A)(S)-3-N-[3-(對(duì)甲氧基苯基)丙酰]胺基-6-N-Z-氨基己酸甲酯 0.7克從實(shí)例1A)步得到的三氟乙酸鹽和256毫克3-(對(duì)甲氧基苯基)丙酸，連同0.21毫升三乙胺，256毫克HOBT和313毫克DCC一起反應(yīng)，按照實(shí)例2A)步中所述進(jìn)行后處理。粗產(chǎn)品用乙醚重結(jié)晶。得到白色結(jié)晶形式的(S)-3-N-[3-(對(duì)甲氧基苯基)丙酰]胺-6-N-Z-氨基己酸甲酯產(chǎn)品;MS457(M+H)+。
B)(S)-3-N-[3-(對(duì)甲氧基苯基)丙酰]胺基-6-[N-(對(duì)脒基苯乙酰)胺基]己酸 440毫克實(shí)例3B)步得到的甲酯類似于實(shí)例1C)步那樣進(jìn)行氫化，所得到的鹽酸鹽按照實(shí)例1C)步中所述用164毫克N-Boc-對(duì)脒基苯乙酸、0.13毫升三乙胺、164毫克HOBT和200毫克DCC進(jìn)行反應(yīng)和后處理。類似于實(shí)例1C)步那樣用TFA和LiOH·H2O使產(chǎn)品脫保護(hù)，粗產(chǎn)品用甲醇/水重結(jié)晶。得到(S)-3-[N-[3-(對(duì)甲氧基苯基)丙酰]胺基-6-[N-(對(duì)脒基苯乙酰)胺]己酸·三氟乙酸鹽產(chǎn)品，呈白色粉末。MS583(M+H)+。游離化合物是用已知方法從三氟乙酸鹽產(chǎn)生的。
實(shí)例4 (S)-3-[N-(金剛烷-1-基乙酰)胺基]-6-[N-(對(duì)脒基苯乙酰)胺基]己酸 A)(S)-3-[N-(金剛烷-1-基乙酰)胺基]-6-N-Z-氨基己酸甲酯 0.7克從實(shí)例1A)步得到的三氟乙酸鹽，按照實(shí)例2A)步中所述，用246毫克金剛烷-1-基乙酸、0.21毫升三乙胺、246毫克HOBT和331毫克DCC進(jìn)行反應(yīng)和后處理。粗產(chǎn)品在硅膠上(乙酸乙酯)進(jìn)行色譜分離，分離出無(wú)色油狀的(S)-3-[N-(金剛烷-1-基乙酰)胺基]-6-N-Z-氨基己酸甲酯產(chǎn)品;MS471(M+H)+。
B)(S)-3-[N-(金剛烷-1-基乙酰)胺基]-6-N-Z-氨基己酸叔丁酯 460毫克從實(shí)例4A)步得到的甲酯溶于4毫升NeOH和2毫升水中，與84毫克LiOH·H2O混合。在室溫4小時(shí)后，混合物用1N鹽酸中和，用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯相用硫酸鈉干燥，在真空下脫除溶劑。得到400毫克粗產(chǎn)品，將其溶于2毫升THF，并與479毫克2，2，2-三氯乙酰亞胺酸叔丁酯在2.5毫升環(huán)己烷中的溶液混合。在添加0.069毫升醚合三氟化硼之后，混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)混合物與5%碳酸氫鹽水溶液混合，用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相用飽和氯化鈉水溶液洗滌，用硫酸鈉干燥，溶劑蒸發(fā)濃縮。殘留物溶于二氯甲烷/己烷(1/1)中，濾出不溶的三氯乙酰胺，蒸出溶劑。所得到的粗油在硅膠上(乙酸乙酯/己烷1/1)進(jìn)行色譜分離，給出無(wú)色油狀的(S)-3-[N-(金剛烷-1-基乙酰)胺基]-6-N-Z-氨基己酸叔丁酯產(chǎn)品;MS513(M+H)+。
C)(S)-3-[N-(金剛烷-1-基乙酰)胺基]-6-[N-(對(duì)脒基苯乙酰)胺基]己酸 225毫克實(shí)例4B)步的叔丁酯溶于20毫升乙醇中，按照實(shí)例1C)步中所述，在0.1克Pd/C(10%)和0.028毫升乙酸存在下進(jìn)行氫化。得到的粗產(chǎn)品溶于5毫升DMF中，并類似于實(shí)例1C)步那樣與119毫克N-Boc-對(duì)脒基苯乙酸、0.061毫升三乙胺、73毫克HOBT和90毫克DCC反應(yīng)。經(jīng)后處理后所得到的粗產(chǎn)品在硅膠上(乙酸乙酯)進(jìn)行色譜分離，純產(chǎn)品與5毫升TFA在0.2毫升茴香醚中的溶液混合。在室溫3小時(shí)后，把反應(yīng)混合物滴加到300毫升乙醚中，濾出所沉淀的固體。在高真空中干燥之后，得到白色粉末狀的(S)-3-[N-(金剛烷-1-基乙酰)胺基]-6-[N-(對(duì)脒基苯乙酰)胺基]己酸·三氟乙酸鹽產(chǎn)品;MS505(M+H)+。游離化合物是用已知方法從三氟乙酸鹽產(chǎn)生的。
實(shí)例5 (S)-3-[N-(3-金剛烷-1-基丙酰)胺基]-6-[N-(對(duì)脒基苯乙酰)胺基]己酸 A)(S)-3-[N-(3-金剛烷-1-基丙酰)胺基]-6-N-Z-氨基己酸甲酯 (S)-3-[N-(3-金剛烷-1-基丙酰)胺基]-6-N-Z-氨基己酸甲酯是通過(guò)使0.85克實(shí)例1A)步的三氟乙酸鹽，類似于實(shí)例2A)步那樣，與423毫克3-金剛烷-1-基丙酸、0.28毫升三乙胺、337毫克HOBT和418毫克DCC反應(yīng)，然后用色譜法(硅膠、乙酸乙酯)純化而得到的;MS485(M+H)+。
B)(S)-3-[N-(3-金剛烷-1-基丙酰)胺基]-6-N-Z-氨基己酸叔丁酯 500毫克實(shí)例5A)步得到的甲酯按照實(shí)例4B)步中所述那樣用173毫克LiOH·H2O水解，并與575毫克2，2，2-三氯乙酰亞胺酸叔丁酯和0.06毫升醚合三氯化硼反應(yīng)。在如實(shí)例1B)步中所述那樣的后處理之后，分離出(S)-3-[N-(3-金剛烷-1-基丙酰)胺基]-6-N-Z-氨基己酸叔丁酯產(chǎn)品;MS527(M+H)+。
C)(S)-3-[N-(3-金剛烷-1-基丙酰)胺基]-6-[N-(對(duì)脒基苯乙酰)胺基]己酸 510毫克實(shí)例5B)步的產(chǎn)品類似于實(shí)例4C)步那樣進(jìn)行氫化，與430毫克N-Boc對(duì)脒基苯乙酸偶合，在用色譜法(硅膠/乙酸乙酯)純化之后，所得到的產(chǎn)品用5毫升TFA/茴香醚(95/5)脫保護(hù)。類似于實(shí)例4C)步那樣，在從乙醚中析出沉淀之后，得到白色粉末狀的(S)-3-[N-(3-金剛烷-1-基丙酰)胺基]-6-[N-(對(duì)脒基苯乙酰)胺基]己酸·三氟乙酸鹽;MS497(M+H)+。游離化合物是用已知方法從三氟乙酸鹽產(chǎn)生的。
實(shí)例6 (S)-3-(N-甲基丁酰)胺基]-7-[N-(對(duì)脒基苯甲酰)胺基]庚酸 A)(S)-3-氨基-6-N-Z-氨基庚酸甲酯 4.04克Boc-Lys(Z)-OH、1.38毫升氯甲酸異丁酯、1.44毫升三乙胺和80毫升(16毫摩爾)重氮甲烷醚溶液一起反應(yīng)，然后再與490毫克氧化銀(I)進(jìn)一步反應(yīng)，類似于實(shí)例1A)步那樣進(jìn)行后處理，然后用色譜法(硅膠、乙酸乙酯/己烷1/1)純化粗產(chǎn)品，產(chǎn)生(S)-3-N-Boc-氨基-6-N-Z-氨基己酸甲酯。MS409(M+H)+。把這種甲酯溶于15毫升二氯甲烷中，并與15毫升TFA混合。1小時(shí)后，在真空下脫除TFA和溶劑，殘留物在高真空下干燥，得到(S)-3-氨基-6-N-Z-氨基庚酸甲酯·三氟乙酸鹽產(chǎn)品。
B)(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺基]-7-N-Z-氨基庚酸甲酯 4.1克從實(shí)例6A)步得到的三氟乙酸鹽，按照實(shí)例2A)步中所述那樣，與1.0克異戊酸、1.36毫升三乙胺、1.65克HOBT和2.02克DCC反應(yīng)，并類似地進(jìn)行后處理。所得到的粗產(chǎn)品用乙醚重結(jié)晶，形成(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺基]-7-N-Z-氨基庚酸甲酯產(chǎn)品;MS393(M+H)+。
C)(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺基]-7-N-Z-氨基庚酸叔丁酯 如實(shí)例4B)步中所述，3.25克從實(shí)例6B)步得到的甲酯用1.36克LiOH·H2O皂化，并與4.04克2，2，2-三氯乙酰亞胺酸叔丁酯及0.42毫升醚合三氟化硼反應(yīng)，產(chǎn)生(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺基]-7-N-氨基庚酸叔丁酯產(chǎn)品;MS435(M+H)+。
D)(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺基]-7-[N-(對(duì)脒基苯甲酰)胺基庚酸 2.2克從實(shí)例6C)步得到的產(chǎn)品類似于實(shí)例4C)步那樣進(jìn)行氫化之后，產(chǎn)品如在實(shí)例4C)步中那樣與1.34克N-Boc-對(duì)脒基苯甲酸(類似于N-Boc-對(duì)脒基苯乙酸那樣制備)、0.7毫升三乙胺、0.852克HOBT和1.04克DCC進(jìn)一步反應(yīng)，隨后用25毫升TFA/茴香醚(95/5)脫保護(hù)，并進(jìn)行后處理，產(chǎn)生(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺]-7-[N-(對(duì)脒基苯甲酰)胺基]庚酸·三氟乙酸鹽產(chǎn)品，呈白色粉末形式;MS391(M+H)+。游離化合物是用已知方法從三氟乙酸鹽產(chǎn)生的。
實(shí)例7 (3S，5S)-6-(4-脒基苯乙酰胺基)-3-)4-甲氧基苯丙酰胺基)己酸-δ-內(nèi)酯 A)(4S)-4-羥基-5-O-甲磺酰基-戊酸-γ-內(nèi)酯 (4S)-4，5-二羥基戊酸-γ-內(nèi)酯(16.3克，140毫摩爾)和三乙胺(21.52毫升，154毫摩爾)溶于二氯甲烷中，將溶液冷卻至-30℃。然后邊攪拌邊滴加甲磺酰氯(12.0毫升，154毫摩爾)。然后在-30℃將溶液攪拌15分鐘，并用1.5小時(shí)的時(shí)間加熱到18℃。所得到的懸浮液添加到0.5N HCl中，用乙醚萃取數(shù)次。合并的有機(jī)相用飽和NaHCO3水溶液和飽和NaCl水溶液洗滌。用Na2SO4干燥和用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮之后，得到油狀(4S)-4-羥基-5-O-甲磺?；?戊酸-γ內(nèi)酯產(chǎn)品，它立即用于下一步反應(yīng)。
B)(4S)-4-羥基-5-疊氮基戊酸-γ-內(nèi)酯 實(shí)例7A)步得到的甲磺?；?25.0克，128.7毫摩爾)溶于DMSO(二甲基亞砜)中，溶液在室溫與疊氮化鈉(16.74克，257.4毫摩爾)混合，在100℃攪拌1 1/2 小時(shí)。冷卻棕色懸浮液，在真空下蒸餾出DMSO。殘留物溶于EtoAc中，用Hyflo過(guò)濾，真空濃縮。真空蒸餾(0.16毫巴)產(chǎn)生無(wú)色油狀的標(biāo)題化合物，αD＝+79.9°(C＝2.2，在CHCl3中)。
C)(4S)-5-疊氮基-4-[((1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基)氧]戊酸 從實(shí)例7B)得到的(4S)-4-羥基-5-疊氮基-戊酸-γ-內(nèi)酯(12.28克，87.01毫摩爾)溶于435毫升乙醇中，然后在室溫下邊攪拌邊添加43.5毫升2N NaOH水溶液。在室溫靜置1/2小時(shí)之后，溶液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮，在高真空中干燥。所得到的殘留物(16.94克)與174毫升DMF、咪唑(29.63克，435.05毫摩爾)和TBDMS-Cl(48.3克，313.24毫摩爾)混合，在室溫?cái)嚢?9小時(shí)。所得到的懸浮液添加到冰/1N NaHSO4水溶液中，用乙醚萃取數(shù)次。合并的有機(jī)相用Na2SO4干燥，并在真空中濃縮。殘留物溶于435毫升甲醇中，在室溫邊攪拌邊與18.44克Na2CO3(在87.0毫升H2O中)混合，然后在室溫?cái)嚢?/2小時(shí)。所得到的懸浮液與435毫升H2O混合，用己烷萃取2次。合并的己烷相用甲醇/H2O(1∶1)洗滌，合并的水相用NaHSO4酸化。在用己烷萃取和用飽和NaCl水溶液洗滌之后，有機(jī)相用Na2SO4干燥，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮。薄層色譜法和1H-NMR測(cè)定表明，所得到的(4S)-5-疊氮基-4-[((1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基)氧]戊酸粗產(chǎn)品實(shí)際上是純的，無(wú)需純化就可進(jìn)一步使用。MS274(M+H)+。
D)(3(4S)，4R)-3-[5-疊氮基-4-(((1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基)氧)-1-氧戊基]-4-(苯基甲基)-2-惡唑烷酮 實(shí)例7C)步產(chǎn)生的光學(xué)活性戊酸衍生物(19.79克，72.37毫摩爾)溶于405毫升干THF中，冷卻至-78℃，先與13.5毫升三乙胺(97毫摩爾)混合，然后與10.4毫升(84.7毫摩爾)新戊酰氯混合。在-78℃5分鐘后，用1小時(shí)時(shí)間把混合物溫?zé)嶂?℃，再次冷卻至-78℃。在第二反應(yīng)容器中，把(4R)-4-苯基甲基-2-惡唑烷酮(15.65克，88.3毫摩爾)溶于405毫升無(wú)水THF，冷卻至-78℃，與正丁基鋰(56.1毫升1.6M溶液)混合，在-78℃攪拌0.25小時(shí)。由此產(chǎn)生的氮雜烯醇化物在-78℃用一根壓力針與以前就地制備的混合酸酐混合。撤除冷卻浴，進(jìn)行1小時(shí)攪拌。反應(yīng)混合物添加到冰/NaHSO4溶液中，用EtOAc萃取，有機(jī)相用飽和NaHCO3水溶液和飽和NaCl水溶液洗滌，隨后用Na2SO4干燥，真空濃縮。所得到的粗材料用硅膠(己烷/EtOAc，3∶1)進(jìn)行色譜分離。所得到的標(biāo)題化合物呈白色固體;Ms433(M+H)+。
E)(3(2S，4S)，4R)-3-[5-疊氮基-4-(((1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基)氧)-2-叔丁氧碳酰甲基-1-氧戊基]-4-(苯基甲基)-2-惡唑烷酮 從實(shí)例7D)步得到的光學(xué)純酰亞胺(19.05克，44毫摩爾)溶于44毫摩爾THF中，添加到一種冷卻至-78℃的LiHMDS(48.4毫升1.0M溶液)在66毫升THF中的溶液中，在-78℃1/2小時(shí)之后，用20分鐘時(shí)間把溴乙酸叔丁酯(9.7毫升，66毫摩爾)滴加到冷卻至-78℃的烯醇化物中。在-78℃靜置1小時(shí)后，把混合物加熱至0℃，然后把飽和NH4Cl水溶液添加到反應(yīng)混合物中。在用乙醚萃取后，合并的有機(jī)相用飽和NaHCO3水溶液和飽和NaCl溶液洗滌，用Na2SO4干燥，真空濃縮。1H-NMR測(cè)定結(jié)果表明，產(chǎn)品是以(3(2S，4S)，4R)∶(3(2R，4S)4R)的非對(duì)映異構(gòu)體混合物(90∶10)形式存在的。在用硅膠(己烷/EtOAc，6∶1)進(jìn)行色譜分離之后，以無(wú)色油狀的純非對(duì)映異構(gòu)形式得到標(biāo)題化合物;MS521(M-N2+3H)+。
F)(3S，5S)-6-疊氮基-5-[((1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基)氧)-3-羥基碳酰-己酸叔丁酯 由實(shí)例7E)步得到的標(biāo)題化合物(21.5克，39.4毫摩爾)溶于500毫升THF中，相繼與180毫升H2O、16.7毫升H2O2(30%溶液)及LiOH(3.3克，78.8毫摩爾)混合，在0℃攪拌1 1/2 小時(shí)。然后添加Na2SO3(17.1克，136毫摩爾)在120毫升H2O中的溶液，攪拌在0℃進(jìn)行5分鐘。反應(yīng)混合物用1N NaHSO4水溶液酸化，用乙醚萃取數(shù)次。合并的有機(jī)相用飽和NaCl水溶液洗滌，用Na2SO4干燥，真空濃縮。得到的粗產(chǎn)品溶于己烷中。濾出所產(chǎn)生的(4R)-4-苯基甲基-2-惡唑烷酮，通過(guò)濃縮濾液并在高真空下使之干燥，得到純粹形式的己酸叔丁酯衍生物。MS410(M+H)+，是從其Na鹽測(cè)定的。
G)(3S，5S)-6-疊氮基-5-[((1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基)氧)-3-芐氧碳酰胺基-己酸叔丁酯 實(shí)例7F)步產(chǎn)生的標(biāo)題化合物(1.55克，4.0毫摩爾)溶于20毫升無(wú)水甲苯中，并相繼與DPPA(956微升(95%)，4.2毫摩爾)和三乙胺(613微升，4.4毫摩爾)混合，在回流下攪拌1/2小時(shí)。冷卻至大約40℃之后，添加芐醇(4.14毫升，40毫摩爾)，混合物在回流下再攪拌60分鐘。反應(yīng)溶液冷卻至室溫，與追加的甲苯混合，用飽和NaHCO3水溶液、10%酒石酸溶液和飽和NaCl水溶液洗滌，用Na2SO4干燥，真空濃縮。粗產(chǎn)品用硅膠(己烷/EtOAc，6∶1)進(jìn)行色譜分離，得到純粹形式的標(biāo)題化合物;MS493(M+H)+。
H)(3S，5S)-6-[4-(叔丁氧碳酰)脒基苯乙酰胺基]-5-[((1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基)氧)-3-芐氧碳酰胺基己酸叔丁酯 實(shí)例7G)步的標(biāo)題化合物(1.18克，2.4毫摩爾)溶于THF(12.0毫升)中，并類似于文獻(xiàn)(Tetrahedron Lett.24，763(1983))中所述步驟那樣與三苯膦(0.66克，2.52毫摩爾)先在室溫反應(yīng)(17小時(shí))，然后在回流下反應(yīng)。回流1小時(shí)之后，添加3.6摩爾當(dāng)量的H2O， 混合物進(jìn)一步回流攪拌4小時(shí)。反應(yīng)溶液冷卻、真空濃縮、殘留物溶于己烷中，并濾出不溶的氧化三苯膦。濾液進(jìn)行真空濃縮，分離所生成的胺，呈油狀，立即使其進(jìn)一步反應(yīng)。把這種胺溶于8毫升DMF中，連同4-(叔丁氧碳酰)脒基苯乙酸(733毫克，2.64毫摩爾)和HOBT(4.89毫克，3.19毫摩爾)一起在室溫下與DCC(494毫克，2.4毫摩爾)反應(yīng)。在室溫16小時(shí)后，將所得到的懸浮液冷卻至0℃，濾出沉淀的二環(huán)己基脲。濾液用EtOAc稀釋，用飽和NaHCO3水溶液和NaCl水溶液洗滌。在用NaSO4干燥后，產(chǎn)品進(jìn)行真空濃縮。所得到的粗材料用硅膠(己烷/EtOAc，30∶70)進(jìn)行色譜分離。得到白色固體狀標(biāo)題化合物;MS727(M+H)+。
I)(3S，5S)-6-[4-(叔丁氧碳酰)脒基苯乙酰胺基]-5-[((1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基)氧)-3-(4-甲氧基苯基丙酰胺基)己酸叔丁酯 實(shí)例7H)步的偶合產(chǎn)品(1.23克，1.69毫摩爾)溶于8.5毫升乙醇中，用10%Pd/C進(jìn)行氫化。在室溫下2小時(shí)后，過(guò)濾除去催化劑，濾液真空濃縮。把所得到的游離胺溶于5.6毫升DMF中，連同4-甲氧基苯丙酸(335毫克，1.86毫摩爾)和HOBT(345毫克，2.25毫摩爾)一起溶解，然后與DCC(349毫克，1.69毫摩爾)混合。在室溫靜置63小時(shí)后，把懸浮液冷卻至0℃，類似于實(shí)例7H)步中所述的工藝那樣進(jìn)行后處理。
得到的粗產(chǎn)品用硅膠(己烷/EtOAc)進(jìn)行色譜分離。分離出白色泡沫狀標(biāo)題化合物;MS755(M+H)+ J)(3S，5S)-6-[4-脒基苯乙酰胺基)-3-(4-甲氧基苯丙酰胺基)己酸-δ-內(nèi)酯 實(shí)例7I)步的偶合產(chǎn)品(639毫克，0.846毫摩爾)在0℃與0.21毫升乙二硫醇、0.21毫升茴香醚和4.23毫升TFA/H2O(95∶5)混合。在室溫3小時(shí)后，混合物再次冷卻至0℃，添加乙醚，濾出沉淀的固體。所得到的固體用乙醚洗滌，隨后進(jìn)行重結(jié)晶。得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽，呈白色結(jié)晶物質(zhì)。溶點(diǎn)216-218℃;[α]D＝+13.5℃(C＝0.48，甲醇)，MS467(M+H)+。游離化合物是用已知方法從三氟乙酸鹽得到的。
實(shí)例8 (3S，5S)-6-[4-脒基苯乙酰胺基)-3-(3-甲基丁酰胺基)己酸-δ-內(nèi)酯 A)(3S，5S)-6-[4-(叔丁氧碳酰)脒基苯乙酰胺基]-5-[((1，1-二甲基乙基)二甲基甲硅烷基)氧]-3-(3-甲基丁酰胺基)己酸叔丁酯 實(shí)例7H)步的偶合產(chǎn)物(0.6克，0.82毫摩爾)溶于5毫升乙醇中，用10%Pd/C進(jìn)行氫化。在室溫下2小時(shí)后，過(guò)濾除去催化劑，濾液進(jìn)行真空濃縮。把得到的游離胺溶于3毫升DMF中，連同異戊酸(110微升，0.9毫摩爾)和HO BT(172.5毫克，1.13毫摩爾)一起，與DCC(175毫克，0.82毫摩爾)混合。在室溫16小時(shí)后，用類似于實(shí)例7I)步中所述的工藝對(duì)反應(yīng)混合物進(jìn)行后處理。所得到的粗產(chǎn)品用硅膠(己烷/EtOAc)進(jìn)行色譜分離。得到白色泡沫狀標(biāo)題化合物。MS677(M+H)+。
B)(3S，5S)-6-[4-脒基苯乙酰胺基]-3-(3-甲基丁酰胺基)己酸-δ-內(nèi)酯 實(shí)例8A)步的產(chǎn)品(320毫克，0.473毫摩爾)類似于實(shí)例7J)步那樣用TFA處理，然后去掉保護(hù)基團(tuán)。在與乙醚發(fā)生沉淀反應(yīng)和隨后的重結(jié)晶之后，得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽，呈白色結(jié)晶。熔點(diǎn)236.7-237.7℃;[α]D＝+15.0°(C＝0.5，甲醇);MS389(M+H)+。游離化合物是用已知方法從三氟乙酸得到的。
實(shí)例9 (S)-3-N-[3-(對(duì)甲氧基苯基)丙酰]胺基-7-[N-(對(duì)脒基苯甲酰)胺基]庚酸 A)(S)-3-N-[3-(對(duì)甲氧基苯基)丙酰]胺基-7-N-Z-氨基庚酸甲酯 1.18克按照實(shí)例6A)步得到的三氟乙酸鹽與0.43克3-對(duì)甲氧基苯丙酸、0.4克HOBT、0.33毫升三乙胺和0.46克DCC反應(yīng)，利用實(shí)例6B)步中所述的工藝進(jìn)行后處理。所得到的粗材料用乙醚進(jìn)行重結(jié)晶，以白色結(jié)晶形式得到標(biāo)題化合物;MS471(M+H)+。
B)(S)-3-N-[3-(對(duì)甲氧基苯基)丙酰]胺基-7-N-Z-氨基庚酸叔丁酯 利用按照實(shí)例4B)步的工藝，0.7克實(shí)例9A)步中得到的甲酯用0.21克LiOH/H2O進(jìn)行水解，水解產(chǎn)物與0.82克2，2，2-三氯乙酰亞胺酸叔丁酯在0.1毫升醚合三氟化硼存在下反應(yīng)，類似地進(jìn)行后處理。在用硅膠(乙酸乙酯/己烷，1∶1)進(jìn)行色譜分離之后，得到無(wú)色油狀標(biāo)題化合物;MS513(M+H)+。
C)(S)-3-N-[3-(對(duì)甲氧基苯基)丙酰]胺基-7-[N-(對(duì)脒基苯甲酰)胺基]庚酸 0.55克按照實(shí)例9B)步得到的化合物用實(shí)例4C)步中所述的工藝進(jìn)行氫化，由此得到的胺與0.28克N-Boc-對(duì)脒基苯甲酸、0.18克HOBT、0.15毫升三乙胺和0.22克DCC用實(shí)例4C)步中所述的工藝進(jìn)行反應(yīng)。所得到的粗產(chǎn)品用色譜法(硅膠，乙酸乙酯)進(jìn)行純化，用5毫升TFA/茴香醚(95/5)脫保護(hù)。在用乙醚沉淀之后，得到標(biāo)題化合物的三氟乙酸鹽，呈白色粉末形式。MS469(M+H)+。游離化合物是用已知方法從三氟乙酸鹽產(chǎn)生的。
實(shí)例10 (3S，5S)-6-[4-脒基苯乙酰胺基]-3-N-[2-(對(duì)甲氧基苯基)乙磺酰胺基]己酸-δ-內(nèi)酯 A)(3S，5S)-6-[4-(叔丁氧碳酰)脒基苯乙酰胺基]-5-[((1，1-二甲基甲硅烷基)氧]-3-氨基己酸叔丁酯 1.09克(1.50毫摩爾)實(shí)例7-H)步的標(biāo)題產(chǎn)品在7.50毫升乙醇中與75.0毫克PtO2混合，先加熱回流3/4小時(shí)。然后添加75毫克Pd/C(10%)，混合物進(jìn)一步回流3/4小時(shí)進(jìn)行氫化作用。過(guò)濾除去催化劑，添加150毫克Pd/C(10%)至濾液中，進(jìn)一步回流1/2小時(shí)，然后進(jìn)一步添加75毫克Pd/C，回流再繼續(xù)進(jìn)行1小時(shí)。再次過(guò)濾除去催化劑，進(jìn)一步添加150毫克Pd/C(10%)，回流再繼續(xù)進(jìn)行1 1/2 小時(shí)。然后通過(guò)過(guò)濾除去催化劑和蒸發(fā)至干來(lái)回收標(biāo)題產(chǎn)品。薄層色譜分析(TLC)表明，粗產(chǎn)品(890毫克)是大約100%純的，而且無(wú)需任何進(jìn)一步純化就可用于進(jìn)一步合成。
B)(3S，5S)-6-[4-(叔丁氧碳酰)脒基苯乙酰胺基]-3-N-[2-(對(duì)甲氧基苯基)乙磺酰胺基]己酸叔丁酯 890毫克(1.50毫摩爾)以上實(shí)例10A)步的標(biāo)題化合物和99微升NMM(0.6摩爾當(dāng)量)在7.5毫升THF中，在氮?dú)夥障掠谑覝嘏c193.5毫克(0.55摩爾當(dāng)量)2-(對(duì)甲氧苯基)乙磺酰氯猛烈混合2 1/2 小時(shí)。進(jìn)一步添加193.5毫克磺酰氯和99微升NMM，混合物同以前一樣在室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后讓混合物在室溫靜置18小時(shí)。所形成的反應(yīng)混合物制成乙酸乙酯懸浮液，用10%乙酸水溶液萃取一次，用NaHCO3水溶液萃取一次，再用NaCl水溶液萃取一次。合并的水相進(jìn)一步用乙酸乙酯萃取一次。然后將合并的有機(jī)相干燥，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸發(fā)至干。這產(chǎn)生1.10克粗產(chǎn)品，對(duì)應(yīng)于約92.70%的產(chǎn)率。這種粗產(chǎn)品用102.5毫升色譜柱純化(硅膠25-40微米;洗脫液己烷/EtOAc為3∶7;流量率為10毫升/分;每10毫升為一個(gè)級(jí)分，吸收度為0.02/200mv)。把第11至20個(gè)級(jí)分合并，蒸發(fā)溶劑后回收標(biāo)題產(chǎn)品(257毫克)。MA+791;[MA--BOC]+691;[MA-(BOC+C4H8)]+635。
C)(3S，5S)-6-(4-脒基苯乙酰胺基)-3-N-[2-(對(duì)甲氧基苯基)乙磺酰胺基]乙酸-δ-內(nèi)酯·三氟乙酸鹽 實(shí)例10B)步的標(biāo)題產(chǎn)品(257毫克)在2毫升95%三氟乙酸水溶液中與茴香醚(100微升)和乙二硫醇(100微升)混合，在室溫靜置1 1/3 小時(shí)。所形成的懸浮液邊用冰浴冷卻，邊與20毫升二乙醚猛烈混合。濾出結(jié)晶的產(chǎn)品，用二乙醚洗滌，并于40℃在水泵真空下干燥。所產(chǎn)生的粗產(chǎn)品溶于溫乙醇中，將溶液冷卻，產(chǎn)品重結(jié)晶，給出純化形式的標(biāo)題產(chǎn)品(158毫克)。分析最終產(chǎn)品，具有下列特征 FAb 160℃ [α]RTD＝+12.8°(C＝0.25，在甲醇中) 221-896HfMA+503 游離化合物是用已知方法從三氟乙酸鹽產(chǎn)生的。
實(shí)例11 (3S，5S)-6-(4-脒基苯乙酰胺基)-3-(4-甲氧基苯丙酰胺基)己酸鋰 溶于528微升水中的153毫克(264微摩爾)實(shí)例7標(biāo)題化合物，借助于陰離子交換色譜法，使用Bio-Rad ACr1-×2 100-200目乙酸鹽形式的陰離子交換樹(shù)脂，轉(zhuǎn)化成乙酸鹽形式。使用2M乙酸的水/乙腈(1∶1)溶液作為洗脫液，把含有產(chǎn)品的級(jí)分蒸發(fā)，把殘留物溶于少量乙酸乙酯中，通過(guò)添加二乙醚沉淀出產(chǎn)品。把無(wú)定形產(chǎn)品殘留物溶于水中，與264微升2N LiOH(2.00摩爾當(dāng)量)混合，在室溫靜置15小時(shí)。從所得到的溶液，通過(guò)蒸發(fā)和用乙醇重結(jié)晶，得到標(biāo)題產(chǎn)品(87毫克，大約67%產(chǎn)率)。分析發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品具有下列特征 溶點(diǎn)＝227-230℃ [α]RTD＝11.6°(C＝0.31，在水中) 鋰鹽的[M+Li]+497 -COOLi491 MH+ -COOH485 化學(xué)式Ⅰ的化合物因其有價(jià)值的治療性質(zhì)而引人注目。具體地說(shuō)，化學(xué)式Ⅰ的化合物具有抑制纖維蛋白原與GP Ⅱ b/Ⅲ a結(jié)合、因而能防止血小板凝聚的能力。
化學(xué)式Ⅰ的化合物在抑制纖維蛋白原與孤立的和固定的GP Ⅱ b/Ⅲ a結(jié)合方面以及在纖維蛋白原存在下抑制ADP誘發(fā)的人體血小板凝聚方面的有益性能，在下列試驗(yàn)中得到證明 a)抑制纖維蛋白原與孤立的和固定的GP Ⅱ b/Ⅲ a結(jié)合 GP Ⅱ b/Ⅲ a是利用triton X-100萃取從人體血小板的膜分離出來(lái)、再用離子交換色譜法和凝膠過(guò)濾法純化的。把由此得到的受體蛋白結(jié)合到微滴度板上。定量測(cè)定在抑制劑存在下對(duì)生物素標(biāo)記的纖維蛋白原與受體結(jié)合的抑制作用。
b)在纖維蛋白原存在下抑制ADP誘發(fā)的人體血小板凝聚 血小板是從新鮮全血用離心法分離并洗滌的。洗滌的血小板在PGI2和腺苷三磷酸雙磷存在下用ADP(10毫摩爾濃度)刺激。用集合度計(jì)定量測(cè)定在抑制劑存在或不存在下血小板凝聚的能力。
化學(xué)式Ⅰ的化合物在IC50(化學(xué)式Ⅰ的化合物使纖維蛋白原對(duì)受體的結(jié)合力降低50%的濃度)為0.5至20納摩爾(nM，納＝10-9)的范圍對(duì)纖維蛋白原GP Ⅱ b/Ⅲ a的結(jié)合產(chǎn)生抑制作用。
化學(xué)式Ⅰ的化合物在IC50(化學(xué)式Ⅰ的化合物抑制50%血小板凝聚作用的濃度)為20至100納摩爾(nM)的范圍對(duì)ADP誘發(fā)的血小板凝聚產(chǎn)生抑制作用。
對(duì)實(shí)例1至8的化合物進(jìn)行試驗(yàn)，用以上所述試驗(yàn)步驟測(cè)定其抑制纖維蛋白原GP Ⅱ b/Ⅲ a結(jié)合(FB)和抑制ADP誘發(fā)的血小板凝聚(PA)的IC50值。所得結(jié)果給出如下。
實(shí)例號(hào)的產(chǎn)品: 1 2 3 4 5 6 7 8 FB:IC50(nM) 7.6 1.7 1.1 2.2 0.4 0.5 0.5 0.9 PA:IC50(nM) 640 100 31 67 61 15 80 110 由于這些試驗(yàn)中所表現(xiàn)的活性，化學(xué)式Ⅰ的化合物可用于血栓形成的預(yù)防性和急性治療。成年人每天0.1至20毫克/千克，較好0.1至3毫克/千克的劑量得到良好的結(jié)果。
化學(xué)式Ⅰ的化合物可類似地以鹽的形式應(yīng)用，這是讓它們與藥理上可接受的酸如乙酸、三氟乙酸、鹽酸等反應(yīng)得到的。
化學(xué)式Ⅰ的化合物、其溶劑化物或鹽可經(jīng)腸、如經(jīng)口(以片劑、膠囊劑等形成)或徑直腸或以噴霧劑形式給藥。也可以注射溶液和輸注溶液的形式非經(jīng)腸給藥。
權(quán)利要求
1、呈游離形式或鹽形式的化學(xué)式Ⅰ的假肽
式中R1代表化學(xué)式-COOH，-COOLi，-COO((C1-C4)烷基)的基團(tuán)，
X代表-CH2-，-CH=，-CO，-C·HOH，-C·HO((C1-C4)烷基)-，
或者X和R1合在一起代表一個(gè)
Y代表-(CH2)m-，=CH-，-NH-，且
m代表1或2
A可以代表如下化學(xué)式的基
式中D代表氫，一個(gè)保護(hù)基團(tuán)Z或一個(gè)通過(guò)羰基鍵合的α-氨基酸，
R2代表如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中n代表3或4，且
t代表0或1，
或者
A代表如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中K代表3，4，5或6，
O代表3，4或5，且
P代表0，1或2
B可以代表如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中q代表1或2，且
R3代表(C1-C4)烷基，(CH3)2CH-，叔丁基，1-金剛烷基，三甲基甲硅烷基，1-萘基，苯基，3-吲哚基，(C1-C4)烷氧基苯基，
或者
B代表如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中r=0，1或2，且
R4代表(C1-C4)烷基，2-丙基，叔丁基，苯基，對(duì)(C1-C4)烷氧基苯基，1-萘基，甲苯基，甲磺?；?，三磺?；?，或者
B代表如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中D=氫或一個(gè)保護(hù)基團(tuán)Z，且
R5=苯基-(CH2)t-，吲哚-3-基-(CH2)t，萘-1-基-(CH2)t-，金剛烷-1-基-(CH2)t-，丙-2-基-(CH2)t-，三甲基甲硅烷基-(CH2)t-，叔丁基-(CH2)t-，式中t的定義同上，或者
B代表每一個(gè)通過(guò)羰基鍵合的α-氨基酸。
2、如下化學(xué)式按照權(quán)利要求1的假肽
式中R1和m的定義同權(quán)利要求1，s是0和1，
R6＝H，OH或O(C1-C4)烷基，
R1和R6共同構(gòu)成一個(gè)-O-CO-基團(tuán)，
B′可以代表如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中R3和q的定義同權(quán)利要求1，或者
B′是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中R4和r的定義同權(quán)利要求1，或者
B′是如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中R5和D的定義同權(quán)利要求1。
3、如下化學(xué)式按照權(quán)利要求1和2的假肽
式中R1、R6、m和s的定義同權(quán)利要求1，
R1和R6共同形成一個(gè)-O-CH-基團(tuán)，且
B″代表如下化學(xué)式的基團(tuán)
式中q和R3的定義同權(quán)利要求1。
4、按照上述權(quán)利要求的假肽，選自
(S)-3-(N-甲苯磺酰胺基)-6-[N-(對(duì)脒基苯乙酰)胺基]己酸
(S)-3-[N-甲基丁酰)胺基]-6-[N-(對(duì)脒基苯乙酰)胺基]己酸
(S)-3-N-[3-(對(duì)甲氧基)丙酰]胺基-6-[N-(對(duì)脒基苯乙酰)胺基]己酸
(S)-3-[N-(金剛烷-1-基乙酰)胺基]-6-[N-(對(duì)脒基苯乙酰)胺基]己酸
(S)-3-[N-(3-金剛烷-1-基丙酰)胺基]-6-[N-(對(duì)脒基苯乙酰)胺基]己酸
(S)-3-[N-(3-甲基丁酰)胺基]-7-[N-(對(duì)脒基苯甲酰)胺基]庚酸
(3S，5S)-6-(4-脒基苯乙酰胺基)-3-(4-甲氧基苯丙酰胺基)己酸-δ-內(nèi)酯
(3S，5S)-6-(4-脒基苯乙酰胺基)-3-(3-甲基丁酰胺基)己酸-δ-內(nèi)酯
(S)-3-N-[3-(對(duì)甲氧基苯丙酰)胺基]-7-[N-(對(duì)脒基苯甲酰)胺基]庚酸
(3S，5S)-6-(4-脒基苯乙酰胺基)-3-N-(2-(對(duì)甲氧基苯基)乙磺酰胺基]己酸-δ-內(nèi)酯
(3S，5S)-6-(4-脒基苯乙酰胺基)-3-(4-甲氧基苯丙酰胺基)己酸鋰
5、按照權(quán)利要求1的化學(xué)式Ⅰ化合物的生產(chǎn)方法，其中m代表1，X和R1共同形成一個(gè)HC-O-CO-基團(tuán)，且Y代表一個(gè)CH2基團(tuán)，其特征在于如下化學(xué)式的化合物與適當(dāng)基團(tuán)A偶合，
式中Z具有權(quán)利要求1中所給出的意義，且A的定義同權(quán)利要求1，用氫解法使保護(hù)基團(tuán)Z斷裂，反應(yīng)產(chǎn)物與一個(gè)適當(dāng)基團(tuán)B偶合，因而B(niǎo)的定義同權(quán)利要求1，隨后借助于三氟乙酸使保護(hù)基團(tuán)斷裂，任選地從由此生成的三氟乙酸鹽釋放出化學(xué)式Ⅰ的化合物。
6、按照權(quán)利要求1的化學(xué)式Ⅰ化合物的生產(chǎn)方法，其中X＝Y(jié)＝CH2，R1＝COOH且m＝1或2，其特征在于如下化學(xué)式的化合物在室溫與三氟乙酸反應(yīng)，
式中[V]m代表基團(tuán)[CH2]m，A和B的定義同權(quán)利要求1，且m是1或2，隨后任選地從如此生成的三氟乙酸鹽釋放出化學(xué)式Ⅰ的化合物。
7、按照權(quán)利要求1至4呈鹽形式的假肽。
8、按照權(quán)利要求1至5的假肽或其鹽用于血栓形成的預(yù)防性和急性治療。
9、按照權(quán)利要求1至5的假肽或其鹽用于生產(chǎn)供血栓的預(yù)防性和急性治療用的藥劑。
10、含有一種或多種權(quán)利要求1至5的假肽或其鹽的治療組合物。
全文摘要
化學(xué)式I呈游離形式或鹽形式的假肽及其在血栓形成的預(yù)防性和急性治療方面的應(yīng)用。式中A、B、R1、X、Y和m的定義同權(quán)利要求1。
文檔編號(hào)A61K31/365GK1076200SQ9310248
公開(kāi)日1993年9月15日 申請(qǐng)日期1993年3月9日 優(yōu)先權(quán)日1992年3月10日
發(fā)明者G·科蒂爾什, R·梅特尼希 申請(qǐng)人:山道士有限公司