專利名稱：一種抗皮膚衰老組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗皮膚衰老組合物。
背景技術(shù)：
衰老又稱老化，通常是指在正常狀況下生物體發(fā)育成熟后，隨年齡增長機(jī)體發(fā)生的功能性和器質(zhì)性衰退的漸進(jìn)過程。皮膚衰老，是人體老化的一個重要表現(xiàn)，它是由自然因素或非自然因素造成的皮膚衰老現(xiàn)象。人出生后皮膚組織日益發(fā)達(dá)，功能逐漸活躍，當(dāng)?shù)竭_(dá)某種年齡就會開始退化。皮膚組織的成長期一般結(jié)束于25歲左右，有人稱此期為“皮膚的彎角”，自此后生長與老化同時進(jìn)行，皮膚彈力纖維漸漸變粗，到40-50歲初老期時，皮膚的老化慢慢明顯，但老化程度因人而異。皮膚老化的主要原因之一是真皮層的結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變。導(dǎo)致皮膚真皮結(jié)構(gòu)改變的原因有很多種，如基質(zhì)金屬蛋白酶-1 (MMP-1)、皮膚炎癥反應(yīng)、氧化反應(yīng)、皮膚水分散失等。目前研究發(fā)現(xiàn)，由于外界因素的作用，會激活體內(nèi)的基質(zhì)金屬蛋白酶-1 (MMP-1)，導(dǎo)致皮膚真皮中制成皮膚結(jié)構(gòu)的膠原蛋白和彈性蛋白被過度降解，從而使皮膚出現(xiàn)皺縮、無彈性等衰老癥狀?；贛MP-1在皮膚衰老過程中的重要作用，人們逐漸將抑制MMP-1活性、抑制異常的膠原降解等作為延緩衰老的新途徑(劉月恒，等，基質(zhì)金屬蛋白酶-1與皮膚衰老的研究進(jìn)展，中國老年學(xué)雜志，2010年10月第30卷)。隨著中草藥的迅速發(fā)展與現(xiàn)代技術(shù)研究手段的結(jié)合，中草藥有效成分的分離、鑒定變得更加細(xì)微，其藥理作用更加明確，中草藥的有效成分也被廣泛有效地應(yīng)用于抗衰老化妝品中。如何從中草藥中篩選出有效抑制基質(zhì)金屬蛋白酶-1活性，具有良好抗皮膚衰老的藥物，是今后的研究重點(diǎn)和方向
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種具有抗衰老作用的組合物。本發(fā)明提供了一種抗皮膚衰老組合物，它是以如下重量配比的原料制備而成的外用制劑:大黃提取物3-5份、馬齒莧提取物2-4份、葛根提取物2-4份、地黃提取物1_2份、銀杏葉提取物1-2份。進(jìn)一步地，它是以如下重量配比的原料制備而成的外用制劑:大黃提取物3-5份、馬齒莧提取物3-4份、葛根提取物3-4份、地黃提取物1_2份、銀杏葉提取物1-2份。更進(jìn)一步地，它是以如下重量配比的原料制備而成的外用制劑:大黃提取物4份、馬齒莧提取物3份、葛根提取物3份、地黃提取物2份、銀杏葉提取物I份；大黃提取物5份、馬齒莧提取物3份、葛根提取物4份、地黃提取物I份、銀杏葉提取物I份；
大黃提取物3份、馬齒莧提取物4份、葛根提取物4份、地黃提取物2份、銀杏葉提取物2份。其中，所述大黃提取物中，含大黃素和大黃酚的總量不少于0.45%;馬齒莧提取物中，含總黃酮不少于15% ;葛根提取物中，含葛根素不少于9% ;地黃提取物中，含梓醇不少于6%，毛蕊花糖苷不少于3% ;銀杏葉提取物中，黃酮醇苷不少于24.0%，萜類內(nèi)酯以白果內(nèi)酯，銀杏內(nèi)酯A，銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C總量計不少于6.0%。其中，所述提取物的制備方法如下:取大黃、馬齒莧、葛根、地黃或銀杏葉的水提物，上非極性或中極性大孔吸附樹脂柱，水洗除雜后，再以7(Γ80%ν/ν乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇后，干燥，即得各提取物。所述水提物是水煎提取物。所述水洗除雜，即加水洗脫至水洗液無色，或不發(fā)生Molish 反應(yīng)。進(jìn)一步地，所述非極性大孔吸附樹脂為DlOl ;所述中極性大孔吸附樹脂為DM301 ；優(yōu)選為DlOl大孔吸附樹脂。進(jìn)一步地，乙醇濃度為70 %ν/ν。其中，所述組合物是以各提取物為活性成分，加上藥學(xué)或化妝品常用的輔料或輔助性成分制備而成的皮膚外用制劑。進(jìn)一步地，所述輔助性成分為膠原蛋白、維生素或/和輔酵素Q10。其中，所述外用制劑為護(hù)膚霜、乳液、凝膠、化妝水或面膜。本發(fā)明還提供了上述組合物在制備基質(zhì)金屬蛋白酶-1抑制劑中的用途。本發(fā)明還提供了上述組合物在制備抗衰老、保濕或/和改善皮膚彈性的外用護(hù)膚品或藥品中的用途。本發(fā)明組合物，對基質(zhì)金屬蛋白酶-1的抑制活性良好，具有較強(qiáng)和長時間的保濕作用，能夠有效增強(qiáng)皮膚彈性，同時，該組合物將各中藥材提取物合理配伍，發(fā)揮了協(xié)同增效作用，具有更加顯著地抗衰老活性，提供了一種具有消除細(xì)紋、緊致肌膚、抗皺祛皺功效的新護(hù)膚品。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1抗衰老護(hù)膚霜的制備A油相(重量百分比)蜂蠟3.5%，硬脂酸3.2%，16/18醇4.0%，二甲硅油0.5%，羊毛脂0.8%、維生素A
0.6%、維生素D 0.6%、維生素E 0.8% ；B水相(重量百分比)大黃提取物4%、馬齒莧提取物3%、葛根提取物3%、地黃提取物2%、銀杏葉提取物1%、甘油6.5%、羧乙基纖維素0.31%、透明質(zhì)酸0.5%、維生素C0.5%、去離子水補(bǔ)足至100% ；制備方法:將水相和油相分別加熱熔化后，在水相攪拌的同時，慢慢加入油相并攪拌，繼續(xù)攪lh，停止攪拌，靜置、冷卻至室溫，即得抗衰老護(hù)膚霜。上述提取物的制備方法如下:稱取大黃、馬齒莧、葛根、地黃或銀杏葉各原料藥，粉碎為粗粉，分別加水煎煮三次，每次1.5小時；將各原料藥的水煎液，分別過DlOl大孔樹脂吸附，用水洗脫至水洗液無色，用70%v/v乙醇洗脫至無色，收集70%乙醇洗脫液濾液，濾液減壓回收乙醇，濃縮洗脫液，濃縮液噴霧干燥，即得。用高效液相色譜法測定各提取物:大黃提取物中，含大黃素和大黃酚的總量為9.24%，Ig干燥提取物相當(dāng)于
7.4-7.6g大黃藥材。馬齒莧提取物中，含總黃酮25.10%，Ig干燥提取物相當(dāng)于10.3-10.5g馬齒莧藥材。葛根提取物中，含葛根素27.25% ；lg干燥提取物相當(dāng)于Sg葛根藥材。地黃提取物中，含梓醇10.62%，毛蕊花糖苷6.34% ;lg干燥提取物相當(dāng)于8.8-9.0g地黃藥材。銀杏葉提取物中，黃酮醇苷29.52%，萜類內(nèi)酯以白果內(nèi)酯，銀杏內(nèi)酯A，銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C總量計8.35%。Ig干燥提取物相當(dāng)于9.8-10.0g銀杏葉藥材。實(shí)施例2抗衰老乳液的制備A油相(重量百分比)泊洛沙姆3%、span601.5%、吐溫602%、白油18%、西黃耆膠0.5%、骨膠原蛋白2%、維
生素E 0.8% ； B水相(重量百分比)
`
大黃提取物5%、馬齒莧提取物3%、葛根提取物4%、地黃提取物1%、銀杏葉提取物1%、甘油6%、卡波姆3%、丁二醇0.5%、維生素B0.5%，維生素C0.5%、去離子水補(bǔ)足至100% ；制備方法:將油相和水相分別熔化后攪拌混合均勻，在油相攪拌的同時，慢慢將混合后的水相加入乳化罐中攪拌，連續(xù)攪拌20min，停止攪拌，靜置冷卻室溫，即得抗衰老乳液。實(shí)施例3抗衰老凝膠的制備按如下重量百分比稱取原料:大黃提取物3%、馬齒莧提取物4%、葛根提取物4%、地黃提取物2%、銀杏葉提取物2%、卡波姆9401%、甘油5%、氫氧化鈉(10%溶液)0.04%、聚山梨酯80 0.2%、羥苯乙酯0.1%、蒸餾水補(bǔ)足至100% ；制備方法:將卡波姆與聚山梨酯溶解于30ml蒸餾水中，加入氫氧化鈉溶液，攪勻后加入大黃提取物，馬齒莧提取物，葛根提取物，地黃提取物，銀杏葉提取物，再將羥苯乙酯逐漸加入攪勻，即得抗衰老凝膠。實(shí)施例4抗衰老化妝水的制備按如下重量百分比稱取原料:大黃提取物3%、馬齒莧提取物2%、葛根提取物2%、地黃提取物1%、銀杏葉提取物2%、甘油10%、丙二醇3%、吐溫60 3%、果酸1%、骨膠原蛋白1%、輔酵素QlO 1%、聚乙二醇400 2%，維生素E 1%、去離子水補(bǔ)足至100% ;制備方法:大黃提取物、馬齒莧提取物、葛根提取物、地黃提取物、銀杏葉提取物混合后，加入甘油、丙二醇、吐溫、果酸、骨膠原蛋白、輔酵素Q10、聚乙二醇400，維生素E、去離子水補(bǔ)足至IOOml混合均勻即得抗衰老化妝水。實(shí)施例5抗衰老面膜的制備按如下重量百分比稱取原料:大黃提取物4%、馬齒莧提取物4%、葛根提取物2%、地黃提取物2%、銀杏葉提取物2%、甘油8%、聚乙二醇800 16%、海藻糖1%、尿囊素0.1%、EDTA 二鈉0.1%、透明質(zhì)酸1.2%、維生素E 1%、去離子水補(bǔ)足至100% ；
制備方法:取少量去離子水，加入聚乙二醇800、甘油、海藻糖加熱攪拌，待冷卻至室溫，加入尿囊素、EDTA 二鈉、透明質(zhì)酸、維生素E，再加入大黃提取物、馬齒莧提取物、葛根提取物、地黃提取物、銀杏葉提取物，充分?jǐn)嚢?，使固體物質(zhì)在膠體中分散均勻，即得抗衰老面膜。實(shí)施例6本發(fā)明中各種提取物的制備稱取大黃、馬齒莧、葛根、地黃或銀杏葉各原料藥，粉碎為粗粉，分別加水煎煮三次，每次1.5小時；將各原料藥的水煎液，分別過DM301大孔樹脂吸附，用水洗脫至水洗液無色，用80%v/v乙醇洗脫至無色，收集80%乙醇洗脫液濾液，濾液減壓回收乙醇，濃縮洗脫液，濃縮液噴霧干燥，即得。經(jīng)檢測,本實(shí)施例制備的大黃提取物中，含大黃素和大黃酚的總量12.57% ;馬齒莧提取物中，含總黃酮18.24% ;葛根提取物中，含葛根素12.36% ;地黃提取物中，含梓醇
8.51%，毛蕊花糖苷4.17% ;銀杏葉提取物中，黃酮醇苷26.58%，萜類內(nèi)酯以白果內(nèi)酯，銀杏內(nèi)酯A，銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C總量計6.71%。由于藥材質(zhì)量差異，以及貯存、運(yùn)輸?shù)挠绊懀景l(fā)明中根據(jù)實(shí)施例1、6制備的提取物有效成分含量，擬定各提取物的質(zhì)量指標(biāo)如下:大黃提取物:按本品含干燥品計算，含大黃素和大黃酚的總量不得少于0.45%。符合《中國藥典》2010年版一部371頁中“大黃流浸膏”項(xiàng)下質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。馬齒莧提取物:按本品含干燥品計算，含總黃酮不得少于15%。

葛根提取物:按本品含干燥品計算，含葛根素不得少于9%。地黃提取物:按本品含干燥品計算，含梓醇不得少于6%，毛蕊花糖苷不得少于3%。銀杏葉提取物:按本品含干燥品計算，黃酮醇苷不少于24.0%，萜類內(nèi)酯以白果內(nèi)酯，銀杏內(nèi)酯A，銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C總量計不少于6.0%。符合《中國藥典》2010年版一部392頁中“銀杏葉提取物”項(xiàng)下質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本發(fā)明各原料藥的提取方法不僅限于上述方法，通過指標(biāo)成分的限定，采用文獻(xiàn)報道的其它方法也可替代。以下通過試驗(yàn)例具體說明本發(fā)明的有益效果。試驗(yàn)例I本發(fā)明組合物對體基質(zhì)金屬蛋白酶-1的影響基質(zhì)金屬蛋白酶-1 (MMP-1)在皮膚衰老過程中的重要作用，人們逐漸將抑制MMP-1活性，抑制異常的膠原降解，減少皮膚炎癥反應(yīng)及防止皮膚光老化產(chǎn)生的皺紋，作為延緩衰老的新途徑。根據(jù)基質(zhì)金屬蛋白酶衰老學(xué)說，外界因素引起基質(zhì)金屬蛋白酶-1 (MMP-1)活性增強(qiáng)，過度降解細(xì)胞外基質(zhì)，破壞了皮膚結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致皺紋的產(chǎn)生。如果某種成分能夠有效抑制基質(zhì)金屬蛋白酶-1的活性，就能減少細(xì)胞外基質(zhì)的破壞和流失，阻止皺紋的產(chǎn)生，達(dá)到抵抗皮膚衰老的目的。因此，通過體外抑制基質(zhì)金屬蛋白酶-1 (MMP-1)活性實(shí)驗(yàn)建立體外功效檢測方法，可以用于篩選具有消除細(xì)紋，緊致肌膚，抗皺祛皺功效的化妝品添加劑。1、實(shí)驗(yàn)方法在不破壞酶反應(yīng)體系的前提下，加入功效成分，通過酶反應(yīng)體系檢測產(chǎn)物熒光強(qiáng)度的變化，間接反映酶活力的變化，從而反映功效成分對MMP-1活性的影響作用。具體實(shí)驗(yàn)步驟
(I)溶劑配制:①配制緩沖液(50mmol/LHEPES，0.12mol/L NaCl, lOmmol/L CaCl2, 20 μ mol/L,ZnS04,0.05%Brij-35, pH=7.5)；②將MMP-1酶原用緩沖液梯度稀釋至0.22 μ g/100 μ L備用；③將熒光底物DQ-gelatin用緩沖液梯度稀釋至0.20 μ g/100 μ L備用；④在IL的0.lmol/L NaOH溶液中加入30mmol的酶原激活劑APMA’形成APMA儲備液(30mmol/L)備用；⑤將各待測物配制成lmg/ml濃度的溶液備用:分別按實(shí)施例1_3中五味中藥提取物配比比例，分別標(biāo)識為試驗(yàn)1-3組；為了篩選出最優(yōu)的活性部位，本發(fā)明還對中藥原料藥的水提物、醇提物進(jìn)行了對比研究:中藥原料藥的水提物，標(biāo)識為試驗(yàn)4組；中藥原料藥的醇提物，標(biāo)識為試驗(yàn)5組；實(shí)施例6制備的提取物，按實(shí)施例1中藥提取物比例配比，標(biāo)識為試驗(yàn)6組。水提物的制備:取大黃30g 、馬齒莧31g、葛根24g、地黃18g、銀杏葉10g，粉碎，混合后，加水煎煮3次，每次1.5h，合并濾液，濃縮，干燥即得。醇提物的制備:取大黃30g、馬齒莧31g、葛根24g、地黃18g、銀杏葉10g，粉碎，混合后，加入70%v/v乙醇回流提取2次，每次lh，合并提取液，回收乙醇后，干燥即得。各單味藥材的水提物或醇提物制備方法同上。(2) MMP-1酶原的活化:將MMP-1 酶原溶液(0.22 μ g/100 μ L)和 APMA 溶液(30mmol/L)按 10:1 的體積比(MMP: ΑΡΜΑ)混合，在37°C孵育45min活化；(3)加樣:取活化后的MMP-1溶液(濃度已降為0.20 μ g/100 μ L) 40 μ L加入96孔酶標(biāo)板中，再加入某種待測植物功效成分溶液8 μ L，熒光底物DQ-gelatin溶液(0.20 μ g/100 μ L)52 μ L，使最終反應(yīng)體系為100 μ L ;表I體外抑制MMP-1實(shí)驗(yàn)加樣表
權(quán)利要求
1.一種抗皮膚衰老組合物，其特征在于:它是以如下重量配比的原料制備而成的外用制劑: 大黃提取物3-5份、馬齒莧提取物2-4份、葛根提取物2-4份、地黃提取物1-2份、銀杏葉提取物1-2份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于:它是以如下重量配比的原料制備而成的外用制劑: 大黃提取物3-5份、馬齒莧提取物3-4份、葛根提取物3-4份、地黃提取物1-2份、銀杏葉提取物1-2份。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其特征在于:它是以如下重量配比的原料制備而成的外用制劑: 大黃提取物4份、馬齒莧提取物3份、葛根提取物3份、地黃提取物2份、銀杏葉提取物I份； 大黃提取物5份、馬齒莧提取物3份、葛根提取物4份、地黃提取物I份、銀杏葉提取物I份； 大黃提取物3份、馬齒莧提取物4份、葛根提取物4份、地黃提取物2份、銀杏葉提取物2份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的組合物，其特征在于:所述大黃提取物中，含大黃素和大黃酚的總量不少于0.45% ;馬齒莧提取物中，含總黃酮不少于15% ;葛根提取物中，含葛根素不少于9% ;地黃提取物中，含梓醇不少于6%，毛蕊花糖苷不少于3% ;銀杏葉提取物中，黃酮醇苷不少于24.0%，萜類內(nèi)酯以白果內(nèi)酯，銀杏內(nèi)酯A，銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C總量計不少于6.0%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的組合物，其特征在于:所述提取物的制備方法如下:取大黃、馬齒莧、葛根、地黃或銀杏葉的水提物，上非極性或中極性大孔吸附樹脂柱，水洗除雜后，再以7(Γ80%ν/ν乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇后，干燥，即得各提取物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其特征在于:所述非極性大孔吸附樹脂為DlOl;所述中極性大孔吸附樹脂為DM301。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其特征在于:乙醇濃度為70%ν/ν。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任意一項(xiàng)所述的組合物，其特征在于:所述組合物是以上述各提取物為活性成分，加上藥學(xué)或化妝品中常用的輔料或輔助性成分制備而成的皮膚外用制劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其特征在于:所述輔助性成分為膠原蛋白、維生素或/和輔酵素Q10。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任意一項(xiàng)所述的組合物，其特征在于:所述外用制劑為護(hù)膚霜、乳液、凝膠、化妝水或面膜。
11.權(quán)利要求1-10任意一項(xiàng)所述組合物在制備基質(zhì)金屬蛋白酶-1抑制劑中的用途。
12.權(quán)利要求1-10任意一項(xiàng)所述組合物在制備抗衰老、保濕或/和改善皮膚彈性的外用護(hù)膚品或藥品中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種抗皮膚衰老組合物，它是以如下重量配比的原料制備而成的外用制劑大黃提取物3-5份、馬齒莧提取物2-4份、葛根提取物2-4份、地黃提取物1-2份、銀杏葉提取物1-2份。本發(fā)明還提供了該組合物的用途。本發(fā)明組合物，對基質(zhì)金屬蛋白酶-1的抑制活性良好，具有較強(qiáng)和長時間的保濕作用，能夠有效增強(qiáng)皮膚彈性，同時，該組合物將各中藥材提取物合理配伍，發(fā)揮了協(xié)同增效作用，具有更加顯著地抗衰老活性，提供了一種具有消除細(xì)紋、緊致肌膚、抗皺祛皺功效的新護(hù)膚品。
文檔編號A61K36/804GK103070810SQ201310046660
公開日2013年5月1日 申請日期2013年2月6日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月6日
發(fā)明者林山, 郭文 申請人:成都山信藥業(yè)有限公司