專利名稱：：一種小分子肽在制備促進(jìn)手術(shù)后傷口愈合藥物和食品中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，是分子量低于10000的肽在制備促進(jìn)手術(shù)后傷口愈合藥物和食品中的新用途，特別是涉及海洋膠原肽和大豆肽在促進(jìn)手術(shù)后傷口愈合中的新用途。
背景技術(shù)：
：傷口愈合是組織生長、再生的一種特殊生物學(xué)過程，所涉及的炎癥反應(yīng)細(xì)胞增殖、新生血管和淋巴管形成，以及細(xì)胞外基質(zhì)合成，是一個(gè)連續(xù)動(dòng)態(tài)過程，不能截然分開，因此，凡是能促進(jìn)或抑制某一個(gè)環(huán)節(jié)的因素，均可影響傷口愈合的整個(gè)過程。傷口愈合過程中的某些環(huán)節(jié)可受一些營養(yǎng)代謝因素的影響。海洋膠原肽是以海洋魚皮作主要原料，用酶解法生產(chǎn)的、相對(duì)分子質(zhì)量低于1000的低聚肽(短肽)為主要成分的粉末狀產(chǎn)品。彭宏斌，CHKD博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫2008年博士論文《海洋膠原肽輔助降血糖和免疫營養(yǎng)功能的效果研究》研究表明海洋膠原肽可以改善高血糖和高脂膳食負(fù)荷的2型糖尿病大鼠體內(nèi)過氧化應(yīng)激標(biāo)志的表達(dá)，具有輔助降血糖功能；海洋膠原肽短期干預(yù)可以改善糖尿病患者胰島素敏感性和改善胰島素分泌功能，縮短糖尿病患者的血糖調(diào)整期，降低夜間低血糖的發(fā)生率，改善手術(shù)后患者的營養(yǎng)狀況，提高手術(shù)后患者的免疫能力。《中國組織工程研究與臨床康復(fù)雜志》2008，12(23):劉桂琴等(海洋膠原肽對(duì)2型糖尿病大鼠過氧化應(yīng)激標(biāo)志物表達(dá)的影響)公開了體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)海洋膠原肽具有抗氧化等生物活性，可能具有一定的抗炎癥效應(yīng)。關(guān)于海洋膠原肽的用途，申請(qǐng)?zhí)?00710157641.8專利文獻(xiàn)中公開了海洋膠原肽作為制備降血糖藥物、保健食品或食品的用途，申請(qǐng)?zhí)?00710157643.7專利文獻(xiàn)中公開了海洋膠原肽作為制備抗氧化藥物、保健食品、食品或化妝品的用途，申請(qǐng)?zhí)?00610086812.8專利文獻(xiàn)中公開了海洋膠原肽在制備免疫調(diào)節(jié)藥物或食品中的用途，以上專利未述及海洋膠原肽在促進(jìn)手術(shù)后傷口愈合的用途?，F(xiàn)有技術(shù)中均未述及海洋膠原肽關(guān)于手術(shù)后促進(jìn)傷口愈合的應(yīng)用的報(bào)導(dǎo)。大豆肽是以大豆、豆粕或大豆蛋白為主要原料，用酶解法或微生物發(fā)酵法生產(chǎn)的，主要成分為肽，且分子量分布在10000Dalton以下的粉末狀產(chǎn)品。大豆肽含有的八種必需氨基酸，除蛋氨酸為限制氨基酸以外，甘氨酸、脯氨酸等其它氨基酸均超過或接近世界衛(wèi)生組織(冊(cè)O(shè))的推薦標(biāo)準(zhǔn)，因此具有較高的營養(yǎng)價(jià)值。分子量小于1000的肽吸收率高達(dá)90%以上。優(yōu)質(zhì)大豆肽的分子量分布以小于1000的為主，分子量主要在300700范圍內(nèi)。大豆肽能促進(jìn)礦物質(zhì)吸收；大豆肽有降低血壓的作用；促進(jìn)脂肪代謝及降低膽固醇?！妒称房萍肌?007,(7):243國明明等，大豆肽免疫調(diào)節(jié)作用的研究表明，大豆肽還有免疫功能?！渡锛庸み^程》2008，6(4):69王莉娟，大豆肽體外抗氧化活性研究表明，大豆肽還有抗氧化功能?！吨袊澄锱c營養(yǎng)》2000，(4):39陳曉光等，大豆肽的生理功能及應(yīng)用前景，研究表明大豆肽還有降低血糖作用。關(guān)于大豆肽的用途，申請(qǐng)?zhí)?00510077612.1專利文獻(xiàn)中公開了具有解酒護(hù)肝功能的產(chǎn)品及制備方法和用途，申請(qǐng)?zhí)?00610026655.1專利文獻(xiàn)中公開了一種促進(jìn)肥牛肌腱發(fā)育的多肽及微生物制劑及制備方法，以上專利均未述及大豆肽用于促進(jìn)手術(shù)后傷口愈合的用途。關(guān)于低分子肽類的藥物，申請(qǐng)?zhí)枮?00410022266.2專利文獻(xiàn)中公開了c-ski基因及其多肽促進(jìn)損傷愈合又減輕瘢痕；申請(qǐng)?zhí)枮?1109400.l專利文獻(xiàn)中公開了基因重組成纖維細(xì)胞生長因子一8a多肽具有上調(diào)細(xì)胞連接蛋白(Connexin43)表達(dá)，活化上皮功能，加速傷口愈合，以及促進(jìn)軟骨分化等生物活性；申請(qǐng)?zhí)枮?00610152684.2專利文獻(xiàn)中公開了具有促進(jìn)血管形成、組織再生及傷口愈合作用的多肽組合制劑；申請(qǐng)?zhí)?00410098483.X專利文獻(xiàn)中公開了一組具有促進(jìn)新血管形成、組織再生及傷口愈合作用的活性小分子多肽胸腺素P16及其藥物組合物；申請(qǐng)?zhí)?00410015853.9專利文獻(xiàn)中公開了促進(jìn)皮膚、結(jié)締組織、骨生長的多肽組合物；申請(qǐng)?zhí)?1820299.3專利文獻(xiàn)中公開了新的一類多肽成纖維細(xì)胞生長因子具有促進(jìn)傷口愈合等作用；申請(qǐng)?zhí)?00610112159.8專利文獻(xiàn)中公開了涉及用于加速傷口愈合的組合物，該組合物中包含有血栓調(diào)節(jié)蛋白的EGF樣區(qū)域之氨基酸序列的多肽或其中保守性變異體；申請(qǐng)?zhí)?0116910.6專利文獻(xiàn)中公開了一種新的多肽——上皮形成素9.9和編碼這種多肽的多核苷酸用于促進(jìn)傷口愈合等；申請(qǐng)?zhí)?9816184.5專利文獻(xiàn)中公開了取代的雜環(huán)?；脑趥谟虾头乐寡“迥壑械挠猛?。綜上所述，目前還沒有關(guān)于分子量在10000以下的天然來源的肽在促進(jìn)手術(shù)后傷口愈合方面的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容海洋膠原肽以深海魚的魚皮為主要原料，分子量分布在lOOOODalton以下淡黃色粉術(shù)狀小分子肽，其中140-1000分子量范圍占70%以上。大豆肽是以大豆、豆粕或大豆蛋白為主要原料，分子量分布在10000Dalton以下的粉末狀產(chǎn)品，其中140-1000分子量范圍占70%以上。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，分子量140-10000的肽能促進(jìn)手術(shù)后傷口愈合，可用于制備促進(jìn)術(shù)后傷口愈合的食品或藥品，有很好的應(yīng)用前景。具體實(shí)施例方式分子量小于ioooo的肽促進(jìn)手術(shù)后大鼠傷口愈合的功效研究l.材料與方法1.1海洋膠原肽以深海魚的魚皮為主要原料，采用生物酶法生產(chǎn)的分子量分布在10000Dalton以下淡黃色粉末狀小分子肽，其中140-1000分子量范圍占80%以上。1.2大豆肽是以大豆、豆粕或大豆蛋白為主要原料，用酶解法或微生物發(fā)酵法生產(chǎn)的，分子量分布在10000Dalton以下的粉末狀產(chǎn)品，其中140-1000分子量范圍占70°/。以上。1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康雄性二級(jí)SD大鼠，體重230-250克。1.4實(shí)驗(yàn)條件清潔級(jí)動(dòng)物室，溫度范圍21-23°C，相對(duì)濕度50%—60%。1.5實(shí)驗(yàn)方法1.5.1動(dòng)物模型建立方法大鼠經(jīng)1%戊巴比妥鈉麻醉后，剃去背部皮膚，常規(guī)皮膚消毒，背部兩側(cè)分別切一個(gè)2cm長的縱行切口，同時(shí)切開肌肉，深達(dá)腹腔，然后逐層縫合肌肉和皮膚。整個(gè)過程模擬臨床手術(shù)過程，同時(shí)手術(shù)當(dāng)天計(jì)為術(shù)后5第0天(POD0)，以此類推。1.5.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組取216只體重為230-250g的大鼠，隨即分為9組，每組24只，包括空白對(duì)照組、4個(gè)海洋膠原肽組(分別為0.667g/kg.bw、2.Og/kg.bw、6.Og/kg.bw和12g/kg.bw)和4個(gè)大豆肽組(分別為0.667g/kg.bw、2.Og/kg.bw、6.Og/kg.bw和12g/kg.bw)，相當(dāng)于人體推薦劑量的3.3倍、10倍、30倍和60倍)，空白對(duì)照組灌胃給予等體積溶劑。手術(shù)當(dāng)天開始，每日灌胃。分別于第3、7、14天處死大鼠，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)各8只動(dòng)物。1.5.3傷口愈合觀察1.5.3.1肉眼觀察每日用放大鏡觀察切口變化情況。各組于術(shù)后第3天觀察傷口及其周圍組織的創(chuàng)傷反應(yīng)，第7、14天觀察傷口的恢復(fù)情況。術(shù)后創(chuàng)傷反應(yīng)及傷口恢復(fù)情況統(tǒng)一按本實(shí)驗(yàn)室自建標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定。1.5.3.1.1傷口及其周圍組織的創(chuàng)傷反應(yīng)評(píng)定①I期反應(yīng)傷口有輕度腫脹。②n期反應(yīng)傷口及周圍組織輕度水腫，皮下有散在淤血斑。③m期反應(yīng)切口有少量血痂附著，傷口及周圍組織明顯水腫。1.5.3.1.2傷口恢復(fù)情況評(píng)定①優(yōu)傷口組織無腫脹，皮膚青紫現(xiàn)象消失。②良傷口組織輕度腫脹，皮下淤血斑消失，青紫現(xiàn)象逐漸消退。③差傷口及周圍組織腫脹。1.5.3.2切口愈合的組織病理學(xué)觀察各組大鼠分別于術(shù)后第3、7、14天于傷口處距切口邊緣約0.5cm取全層皮膚組織。左側(cè)傷口所取組織的一半用4%多聚甲醛固定，保存待做石蠟切片及HE、Masson染色，另一半用于抗拉力檢測(cè)，右側(cè)傷口皮膚用于羥脯氨酸測(cè)定和其他指標(biāo)的檢測(cè)。1.5.3.3膠原纖維染色(Masson染色)組織切片脫蠟至蒸餾水，蘇木素染色5IO分鐘，鹽酸酒精分化，流水藍(lán)化，蒸餾水洗，麗春紅酸性品紅液中染58分鐘，蒸餾水，1%磷鉬酸中染13分鐘，直接入苯胺藍(lán)液或亮綠液5分鐘，水速洗，置6(TC溫箱中烘干，二甲苯透明，封固。結(jié)果膠原纖維綠色，肌纖維、纖維素紅色。1.5.3.4切口的抗張強(qiáng)度檢測(cè)術(shù)后第7、14天，沿切口垂直方向切取以切口為中線，寬為0.5cm長為中線雙側(cè)各0.5cm，并包含切口在內(nèi)的皮膚試件組織，去除皮下脂肪組織，于長方形短邊以絲線縫合作為牽引線，將皮條置于帶有張力感受器的裝置中間，張力感受器另一端連接于多功能生物信號(hào)采集系統(tǒng)，采用帶有游標(biāo)卡尺的微調(diào)裝置手動(dòng)逐漸拉伸皮條，記錄皮條被拉斷時(shí)的張力。測(cè)微尺測(cè)量皮膚的厚度，每平方毫米面積的張力即為切口的抗張強(qiáng)度。1.5.3.5羥脯氨酸測(cè)定切取大鼠切口周圍2-3毫米的皮膚用于測(cè)定羥脯氨酸，方法依據(jù)南京建成生物工程公司的羥脯氨酸檢測(cè)試劑盒進(jìn)行操作。1.5.4統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS軟件進(jìn)行單因素方差分析。2.結(jié)果2.1大鼠術(shù)后傷口愈合的肉眼觀察結(jié)果肉眼觀察發(fā)現(xiàn)，術(shù)后第3天，對(duì)照組大鼠傷口多數(shù)有血痂附著，傷口及周圍組織明顯水腫，而海洋膠原肽組大鼠傷口的水腫程度明顯減輕(表l)。術(shù)后第7和14天，海洋膠原肽組、大豆肽組大鼠傷口愈合明顯好于對(duì)照組大鼠傷口。海洋膠原肽組、大豆肽組大鼠比對(duì)照組大鼠傷口提前l(fā)-2天愈合，同時(shí)發(fā)現(xiàn)6.Og/kg.bw和12g/kg.bw劑量組愈合最佳(表2)。表l各組傷口創(chuàng)傷反應(yīng)情況比較例(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表2各組傷口恢復(fù)情況比較例(％)第7天(16只/組)第14天(8只/組)組別-優(yōu)良差優(yōu)良差0/kg.bw3(18.75)6(37.5)7(43.75)4(50)3(37.5)1(12.5)0.667g/kg.bw(海洋肽)5(31.25)5(31,25)6(37.5)5(62.5)2(25.0)1(12.5)2.Og/kg.bw(海洋肽)6(37.5)6(37.5)4(25.0)5(62.5)2(25.0)1(12.5)6.Og/kg.bw(海洋肽)8(50.0)4(25.0)4(25.0)6(75,0)2(25,0)012g/kg.bw(海洋肽)8(50.0)5(31.25)3(18,7)7(87.5)1(12.5)00.667g/kg.bw(人豆肽)5(31.25)5(31.25)(31.25)(62.5)2(25.0)1(12.5)2.Og/kg.bw(大豆肽)6(37.5)6(37.5)4(25.0)(62.5)2(25.0)'(12.5)6.Og/kg.bw(大豆肽)8(50.0)4(25.0)4(25.0)(87.5)1(12.5)012g/kg.bw(大豆肽)8(50.0)5(31.25)2(12.5)7(87.5)1(12.5)02.2海洋膠原肽對(duì)大鼠術(shù)后傷口皮膚愈合的組織學(xué)觀察結(jié)果組織學(xué)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，術(shù)后第7天組織切片觀察對(duì)照組傷口表皮囊性增生為主，瘢痕組織較多，炎性細(xì)胞浸潤明顯多于海洋膠原肽組，而成纖維細(xì)胞和毛細(xì)血管則明顯少于海洋膠原肽組、大豆肽組。術(shù)后第14天組織切片觀察顯示，對(duì)照組傷口表皮以增生為主，瘢痕組織和炎性細(xì)胞還是多于海洋膠原肽組、大豆肽組，而各個(gè)海洋膠原肽、大豆肽組組傷口表皮完整，瘢痕組織明顯少于對(duì)照組，炎性細(xì)胞明顯減少，其中以6.Og/kg.bw劑量組最佳。2.3Masson染色光鏡組織學(xué)觀察Masson染色將結(jié)締組織和膠原纖維染成綠色，平滑肌染成紅色，細(xì)胞核染成褐色。術(shù)后第3天切口各個(gè)組之間的膠原纖維數(shù)量沒有明顯的差異。術(shù)后第7天結(jié)果發(fā)現(xiàn)，海洋膠原肽組、大豆肽組膠原纖維數(shù)量明顯多于對(duì)照組，以6.Og/kg.bw和12g/kg.bw劑量組最佳，。術(shù)后第14天同樣發(fā)現(xiàn)海洋膠原肽組、8大豆肽組膠原纖維數(shù)量明顯多于對(duì)照組。2.4術(shù)后不同時(shí)間傷口抗張力比較術(shù)后第7、14天各組傷口抗張力值見表1。從表3可見，第7天和第14天海洋膠原肽組、大豆肽組與對(duì)照組傷口的抗張力強(qiáng)度均有差異，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。表3術(shù)后各組傷口抗張力值(g/mm2,、XDSD)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注*表示與對(duì)照組比較，尸<^.02.5切口肉芽組織羥脯氨酸結(jié)果術(shù)后第7天、14天各組傷口羥脯氨酸檢測(cè)結(jié)果見表4。結(jié)果發(fā)現(xiàn)第7天和第14天海洋膠原肽組、大豆肽組與對(duì)照組傷口羥脯氨酸表達(dá)均有差異，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。表4術(shù)后各組羥脯氨酸結(jié)果("g/mg，XDSD)時(shí)間0/kg.bw0.667g/kg.bw2.Og/kg.bw6.Og/kg.bw12g/kg.bw(膠原)術(shù)后7.8402.179.21Q3.049.67D2.48*10,43Q3.35*11.03Q3.97*第7日(膠原)術(shù)后8.43口2.4510.57口3.81*11.咖3.29*12.89口3.74*13.73口2.43*第14日(大豆)術(shù)后7.49口1.879.05口2.659.93口2.18*10.85口3.41*11.52CB.59*第7日(大豆)術(shù)后8.66口2.349.89[J2.81*11.39EB.02*13.06口3.24*13.87d2.65*第14曰注*表示與對(duì)照組比較，尸<0.053.結(jié)論本研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)口給予術(shù)后大鼠不同濃度的海洋膠原肽、大豆肽組后，各個(gè)濃度的海洋膠原肽、大豆肽組都能夠提高術(shù)后傷口的抗張力值、膠原纖維、羥脯氨酸的表達(dá)水平，表明海洋膠原肽、大豆肽能夠促進(jìn)術(shù)后大鼠的傷口愈合程度，同時(shí)發(fā)現(xiàn)隨著濃度的增加，海洋膠原肽、大豆肽促進(jìn)傷口愈合的效果逐漸增強(qiáng)。本研究得出海洋膠原肽、大豆肽能夠促進(jìn)大鼠傷口愈合的最小劑量是0.667g/kg.bw。二、低聚肽含量測(cè)定1.方法提要低分子量的蛋白質(zhì)水解物(包含肽類及游離氨基酸)可溶于三氯乙酸溶液；高分子量的蛋白質(zhì)在三氯乙酸溶液中易沉淀。樣品經(jīng)三氯乙酸溶液溶解后，離心分離出沉淀蛋白質(zhì)物質(zhì)，測(cè)定出離心清液中的酸溶蛋白質(zhì)含量，清液中的酸溶蛋白質(zhì)含量減去游離氨基酸含量即為低聚肽的含量。2.分析步驟2.1酸溶蛋白質(zhì)含量的測(cè)定稱取2g(精確至lmg)樣品，加入10mL15%三氯乙酸溶液，混合均勻，靜置10min。將樣品溶液在4000rpm下離心10min后，取全部清液，按GB/T5009.5規(guī)定的方法測(cè)定清液中的酸溶蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)換算系數(shù)為6.25。檢驗(yàn)結(jié)果根據(jù)樣品的干燥失重，折算為干基。2.2游離氨基酸含量的測(cè)定樣品前處理稱取2030mg樣品，精確到0.0001g，用3%磺基水楊酸溶液溶解均勻。將樣品溶液轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，定容。將樣品溶液在轉(zhuǎn)速為4000r/min離心機(jī)上離心5min得清液，再用0.45um微孔濾膜過濾清液，將濾液轉(zhuǎn)移至50ral容量瓶中，定容后作為儀器檢測(cè)用樣品。其余操作同GB12292水果、蔬菜汁游離氨基酸含量的測(cè)定規(guī)定的方法。2.3結(jié)果的表述10低聚肽的含量^按式(1)計(jì)算尸2□f□^(1)式中尸2——樣品中低聚肽含量(以干基計(jì))，％;S——樣品中酸溶蛋白質(zhì)含量(以干基計(jì))，％;^——樣品中游離氨基酸含量(以干基計(jì))，％。2.4測(cè)定結(jié)果測(cè)定海洋膠原肽粉和大豆肽粉低聚肽含量，結(jié)果見表5。表5、肽粉中低聚肽的含量測(cè)定結(jié)果樣品海洋膠原肽大豆肽低聚肽含量85.5%79.7%3.相對(duì)分子質(zhì)量小于1000的肽所占比例(高效凝膠過濾色譜法)3.1方法提要采用高效凝膠過濾色譜法測(cè)定。即以多孔性填料為固定相，依據(jù)樣品組分分子體積大小的差別進(jìn)行分離，在肽鍵的紫外吸收波長220mn條件下檢測(cè)，使用凝膠色譜測(cè)定相對(duì)分子質(zhì)量分布的專用數(shù)據(jù)處理軟件(即GPC軟件)，對(duì)色譜圖及其數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)算得到低聚肽的相對(duì)分子質(zhì)量大小及分布范圍。3.2試劑乙腈色譜純；三氟醋酸分析純；水超純水或二次蒸餾水。相對(duì)分子質(zhì)量校正曲線所用標(biāo)準(zhǔn)品細(xì)胞色素C(cyyochrome，MW12500);抑酞酶(aprotinin,MW6500);桿菌酶(bacitracin,MW1450);乙氨酸一乙氨酸一酪氨酸一精氨酸(MW451);乙氨酸一乙氨酸一乙氨酸(MW189)3.3儀器和設(shè)備高效液相色譜儀配有紫外檢測(cè)器和含有GPC數(shù)據(jù)處理軟件的色譜工作站或積分儀；流動(dòng)相真空抽濾脫氣裝置；超聲波振蕩器；分析天平感量O.0001g。3.4色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)色譜柱TSKgelG2000SWXL300mmX7.8mm或性能與此相近的同類型其他適用于測(cè)定蛋白質(zhì)和多肽的凝膠柱；流動(dòng)相乙腈水三氟乙酸，45:55:0.1(體積比)檢測(cè)波長UV220nm;流速0.5ml/min;柱溫30°C;進(jìn)樣體積lOul。為使色譜系統(tǒng)符合檢測(cè)要求，規(guī)定在上述色譜條件下，凝膠色譜柱的柱效即理論塔板數(shù)(N)按三肽標(biāo)準(zhǔn)品(乙氨酸一乙氨酸一乙氨酸)峰計(jì)算不低于5000,低聚肽的分配系數(shù)(Kd)應(yīng)在01之間。3.5相對(duì)分子質(zhì)量校正曲線制作分別用流動(dòng)相配制成O.1%(W/V)的上述不同相對(duì)分子質(zhì)量的肽標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用孔徑為O.2-0.5um聚四氟乙烯或尼龍過濾膜過濾后分別進(jìn)樣，得到系列標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖。以相對(duì)分子質(zhì)量的對(duì)數(shù)(lgMW)對(duì)保留時(shí)間作圖或作線性回歸得到相對(duì)分子質(zhì)量校正曲線及其方程。3.6樣品制備稱取樣品20.0mg于10mL容量瓶中，用流動(dòng)相定容至刻度，超聲振蕩10min，使樣品充分溶解混勻，用孔徑為0.2-0.5uni聚四氟乙烯或尼龍過濾膜過濾后，上機(jī)進(jìn)樣。3.7相對(duì)分子質(zhì)量的計(jì)算將3.6制備的樣品溶液在上述色譜條件下分析。然后用GPC數(shù)據(jù)處理軟件，將樣品的色譜數(shù)據(jù)代入校正曲線方程中進(jìn)行計(jì)算，即可得到樣品中肽的相對(duì)分子質(zhì)量及其分布范圍。用峰面積歸一化法計(jì)算相對(duì)分子質(zhì)量范圍在1000以下的肽的峰面積相對(duì)百分比之和。3.8測(cè)定結(jié)果海洋膠原肽和大豆肽分子量分布范圍測(cè)定結(jié)果見表6，7。表6、海洋膠原肽結(jié)果分子量范圍開始時(shí)間min結(jié)束時(shí)間min重均分子量峰面積％(入220nm)1000-1000013.96618.99514098.2023500-100018.99520.50967227.1174140-50020.50923.28931761.354270-14023.28924.8021082.2662表7、大豆肽結(jié)果分子』t范圍開始時(shí)間min結(jié)束時(shí)間min重均分子量峰面積％(A220nm)1000-1000013.96618.995201214.6817500-100018.99520.50967226.8898140--50020.50923.28931753.456170-14023.28924.8021084.3834以上結(jié)果表明，海洋膠原肽和大豆肽分子量主要集中在140-1000，占70%以上。權(quán)利要求1.一種分子量≤10000的肽在制備促進(jìn)手術(shù)后傷口愈合藥物和食品中的應(yīng)用。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的肽，其特征在于分子量小于2000。3.根據(jù)權(quán)利要求1或者2所述的肽，其特征在于140-1000分子量范圍的肽含量》70%。4.根據(jù)權(quán)利要求l-3任意所述的肽，其特征在于它是一種海洋膠原肽。5.根據(jù)權(quán)利要求l-3任意所述的肽，其特征在于它是一種大豆肽。全文摘要本發(fā)明涉及一種分子量小于10000的肽在制備促進(jìn)手術(shù)后傷口愈合藥物和食品中的應(yīng)用，其中在140-1000分子量范圍的肽含量不低于70％，它是一種海洋膠原肽和大豆肽。文檔編號(hào)A61K38/02GK101461934SQ20091011480公開日2009年6月24日申請(qǐng)日期2009年1月4日優(yōu)先權(quán)日2009年1月4日發(fā)明者付玉梅,盧建中,呂毅斌,萍喻,堯梅香,群廖,易敏之,勇李,李詒光申請(qǐng)人:江中藥業(yè)股份有限公司