專(zhuān)利名稱(chēng)：一種新的抗菌抗病毒藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種由14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯或其藥學(xué)上可接受的鹽與連翹或連翹提取物制成的藥物組合物及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
由于目前對(duì)如青霉素、阿莫西林等許多傳統(tǒng)抗生素抗藥性的蔓延已引起了醫(yī)藥界的高度關(guān)注和重視，多種耐藥性菌株大量出現(xiàn)及新病毒的出現(xiàn)，使難治性感染越來(lái)越多。與此同時(shí)，由于傳統(tǒng)中草藥等天然藥物的配伍或有效成分的組合物往往具有互補(bǔ)、協(xié)同增效作用，亦不產(chǎn)生耐藥性，因而對(duì)天然藥物的發(fā)掘和研究日益受到重視。
穿心蓮為爵床科植物穿心蓮Andrographis paniculata(Burm.f.)Ness的干燥地上部分。具有清熱解毒、涼血、消腫之功效。主要用于感冒發(fā)熱，咽喉腫痛，口舌生瘡，頓咳勞嗽，泄瀉痢疾，熱淋澀痛，癰腫瘡瘍。其主要活性成分為穿心蓮內(nèi)酯。14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽是以傳統(tǒng)中藥穿心蓮提取的穿心蓮內(nèi)酯，經(jīng)半合成后，制成了具有高度生物活性的穿心蓮的衍生物，使給藥途徑更直接，藥理作用更強(qiáng)，毒副作用更小，具有解熱、消炎、殺菌、抗病毒的作用。藥理研究表明其鈉鉀鹽(即炎琥寧)能抑制早期毛細(xì)血管通透性增高與炎性滲出和水腫，能特異性地興奮垂體-腎上腺皮質(zhì)功能，促進(jìn)ACTH釋放，增加垂體前葉中ACTH的生物合成；體外具有滅活腺病毒、流感病毒、呼吸道病毒等多種病毒的作用；動(dòng)物試驗(yàn)有抗早、中孕作用。其鉀鹽(即穿琥寧)具有解熱、鎮(zhèn)靜、增加機(jī)體對(duì)病原體感染的應(yīng)急能力，對(duì)流感病毒、肺炎腺病毒、腸合胞病毒及呼吸道合胞病毒有滅活作用。其結(jié)構(gòu)式如下。
R＝Na+K+炎琥寧R＝H+K+穿琥寧連翹(Fructus Forsythia)為木犀科植物連翹Forsythia Suspensa(Thunb.)Vahl的干燥果實(shí)?？?，微寒。歸肺、心、小腸經(jīng)。主產(chǎn)于我國(guó)山西、河南、山東等地，為一種常用中藥材，具有清熱解毒、散結(jié)消腫之功效，主治溫?zé)?、丹毒、斑疹、癰瘍腫毒、瘰疬、小便淋閉等癥。連翹最早記載于古代神農(nóng)本草經(jīng)，最初在中醫(yī)驗(yàn)方中作為一種復(fù)合草藥，傳統(tǒng)上用它作為疼痛的萬(wàn)應(yīng)靈藥，特別用于癰腫的散熱?，F(xiàn)代藥理作用研究表明，連翹具有抗菌、消炎、解熱、鎮(zhèn)吐等作用?，F(xiàn)臨床上多以連翹用于上呼吸道感染、急性腎炎，并用其復(fù)方治療肝炎、腦膜炎等。連翹成分復(fù)雜，抑菌有效成分主要為苯乙醇苷類(lèi)，其中連翹酯苷類(lèi)均系咖啡?；揭掖架站哂休^強(qiáng)的抑菌活性；還含有一酚性成分連翹酚對(duì)金黃色葡萄球菌和志賀痢疾桿菌的抗菌效力最強(qiáng)，實(shí)驗(yàn)式為C18H13O7；木脂素也是一類(lèi)主要成分，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的有連翹脂素及其苷連翹苷、牛蒡子苷、(-)-羅漢松脂素-4’-β-D-葡萄糖苷及(+)-表松脂酚-β-D-葡萄糖苷等；此外，還有揮發(fā)油、黃酮類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)等成分。其活性成分連翹苷結(jié)構(gòu)式如下 連翹苷現(xiàn)代藥理學(xué)和藥效學(xué)研究表明14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽和連翹在抗菌、抗病毒、消炎鎮(zhèn)痛方面都具有很好的療效，目前已有單一有效成分的炎琥寧、穿琥寧注射液上市，而連翹多以配伍的方式發(fā)揮作用現(xiàn)已有如雙黃連注射液上市，但利用14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽和連翹的相互作用，配伍組方還未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容為了滿(mǎn)足臨床需要，本發(fā)明提供了一種新的抗菌、抗病毒藥物組合物及其制備方法和用途，其特征在于它是由14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽、連翹或連翹提取物制成。
以下14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽簡(jiǎn)稱(chēng)為T(mén)CY。
本發(fā)明藥物組分的用量是經(jīng)過(guò)發(fā)明人進(jìn)行大量摸索總結(jié)得出的，各組分用量在下述重量份數(shù)范圍內(nèi)都具有較好療效。其重量份數(shù)為T(mén)CY 5～200份，連翹5000～150000份或連翹提取物20～3000份；優(yōu)選份數(shù)為T(mén)CY 20～100份，連翹10000～100000份或連翹提取物50～2000份；最佳份數(shù)為T(mén)CY 40份連翹15000～60000份或連翹提取物70～1500份。
以上組成是按重量份作為配比的，如大規(guī)模生產(chǎn)可以以千克為單位，或以噸為單位，小規(guī)模生產(chǎn)也可以以克為單位。
以上組成，若以克為單位，可以制成100～10000次用量的制劑，如作為注射劑，可制成100～10000支，每次用量1～10支。如作為片劑，可制成100～10000片，每次服用1～10片。
以上重量份數(shù)對(duì)于特殊病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的比例，增加或者減少不超過(guò)100％。
上述藥物組合物，可以制成任一臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型，如注射劑、口服常釋劑型、緩釋控釋劑型、顆粒劑、丸劑、口服液體劑、滴眼劑、滴鼻劑、滴耳劑、吸入劑、栓劑、軟膏劑等。本發(fā)明藥物組合物優(yōu)選劑型為注射劑或口服制劑。
本發(fā)明的藥物組合物可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，需要的時(shí)候可以添加各種藥學(xué)上可接受的載體。所述的載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤(rùn)滑劑等。
本發(fā)明在制成注射劑時(shí)，為了增加其溶解度，可以加入吐溫-80等增溶劑。輸液中可以加入用于調(diào)節(jié)滲透壓的等滲調(diào)節(jié)劑，例如，氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、乳酸納、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，優(yōu)選氯化鈉或葡萄糖。粉針中可加入賦形劑，例如，甘露醇、葡萄糖等。
上述藥物組合物，具有抗菌、抗病毒、抗炎、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)咳化痰、止嘔、解熱、保肝、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等作用。
上述藥物組合物中，TCY為由14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯所成的藥學(xué)上可接受的鹽類(lèi)化合物，在制藥中最常用的為藥學(xué)上可接受的水溶性鹽類(lèi)化合物，在不排除使用特殊鹽類(lèi)化合物的前提下一般采用其相應(yīng)的鈉鹽、鉀鹽或鈉鉀鹽等鹽類(lèi)化合物。
上述藥物組合物中，連翹可通過(guò)水提醇沉、醇提、滲漉、半仿生法制備連翹粗提物。例如可根據(jù)中國(guó)專(zhuān)利CN1148375C制備。
現(xiàn)連翹提取物《中國(guó)藥典》(2005版一部275頁(yè))已收載，其中連翹苷(C29H36O15)含量不低于0.5％。
本發(fā)明提供了連翹的一種精制工藝，如下取連翹提取物，加水適量，加熱溶解，將溶液加到已預(yù)先處理并裝好的D2820型大孔吸附樹(shù)脂(提取物和樹(shù)脂比例為1∶15～20)慢慢滴加完后，用水洗脫至還原糖反應(yīng)呈陰性(1ml水洗脫液加入甲基萘酚0.5％試液2～3滴，沿試管壁緩緩加0.5ml濃硫酸，陰性為二試液界面出現(xiàn)棕色環(huán))，然后分別用水液和20％乙醇洗脫，收集20％乙醇洗脫液，回收乙醇，噴霧干燥，即得。
上述精制工藝制得的連翹提取物中連翹苷(C29H36O15)的含量不低于10％，得率為0.5～2％。
本發(fā)明經(jīng)過(guò)藥理學(xué)和藥效動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果證明，以TCY與連翹為組合物制成的藥物，對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、肺炎鏈球菌、白色念珠菌和溶血鏈球菌有明顯的抑制作用，對(duì)流感病毒的增殖及引起的肺炎有明顯的作用，對(duì)感染小鼠有保護(hù)作用，對(duì)內(nèi)毒素致發(fā)熱的家兔有解熱作用并且有消炎作用。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于
1.提供了一種新的抗菌、抗病毒、消炎的中西藥復(fù)方，滿(mǎn)足了臨床的需要。
2.對(duì)本發(fā)明組合物各配比進(jìn)行了藥效學(xué)研究，得出了本發(fā)明組合物的最優(yōu)配比。
3.對(duì)TCY和連翹的相互作用和配伍組方進(jìn)行了藥理研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)由TCY和連翹或連翹提取物制成的組合物療效優(yōu)于單用TCY或連翹，提示兩藥有協(xié)同增效的作用。
4.進(jìn)行了本發(fā)明組合物注射液的穩(wěn)定性研究，證明各項(xiàng)指標(biāo)均比較穩(wěn)定，保證了用藥的安全。
5.對(duì)連翹提取物的活性成分連翹苷的含量進(jìn)行了限定，保證了用藥的質(zhì)量。
6.用TCY和連翹提取物直接投料，避免了提取時(shí)造成的藥物損失和由于原藥材質(zhì)量差異造成的不同產(chǎn)品質(zhì)量差異較大的缺點(diǎn)，使藥品純度更高，安全性更高。
7.TCY和連翹的臨床療效確切，兩者合用后用藥劑量減少，具有廣闊的應(yīng)用前景。
以下試驗(yàn)例來(lái)進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述藥物的有益效果。由于目前已有試驗(yàn)證明，14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯的單鉀鹽、單鈉鹽或鉀鈉鹽等不同鹽類(lèi)之間的變化，對(duì)其藥效作用并不會(huì)有明顯的影響，因此以TCY鈉鉀鹽(即炎琥寧)和連翹為有效藥用成分組成的藥物組合物作為本發(fā)明的藥物組合物。這些試驗(yàn)例包括本發(fā)明藥物組合物的藥效學(xué)試驗(yàn)，本發(fā)明藥物組合物以下簡(jiǎn)稱(chēng)組合物。
試驗(yàn)例1 組合物體外抑菌試驗(yàn)供試品 連翹組連翹注射液，自制炎琥寧組炎琥寧注射液，自制組合物注射液炎琥寧+連翹重量份數(shù)分別為20mg+10g(樣品1)、20mg+30g(樣品2)、20mg+100g(樣品3)、40mg+10g(樣品4)、40mg+30g(樣品5)、40mg+100g(樣品6)、100mg+10g(樣品7)、100mg+30g(樣品8)、100mg+100g(樣品9)，自制供試菌種 金黃色葡萄球菌、傷寒桿菌、肺炎鏈球菌、白色念珠菌、溶血鏈球菌、大腸桿菌。
供試液的制備 取上述新魚(yú)腥草素鈉注射液、連翹注射液、組合物組各樣品注射液適量，分別配制成濃度為8％的供試液，再分別稀釋為4％、2％、1％、0.5％、0.25％的供試液。
菌懸液的制備 將上述供試菌種用適宜的斜面活化后，以無(wú)菌水制成含菌數(shù)約為108個(gè)/ml菌懸液。
紙片法抑菌試驗(yàn) 細(xì)菌用營(yíng)養(yǎng)瓊脂、霉菌培養(yǎng)用查氏培養(yǎng)基培養(yǎng)。取直徑6mm的濾紙片，放入8％供試液中浸泡5小時(shí)，取出，置于真空干燥箱中滅菌干燥。在超凈工作臺(tái)內(nèi)，將各種供試菌懸液取0.5ml注入無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)，再倒入瓊脂培養(yǎng)基，混勻后冷卻成含菌平板。然后用無(wú)菌鑷子夾取含供試液的濾紙片貼在含菌平板上，每皿5片，每菌重復(fù)3次。細(xì)菌置培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)48小時(shí)，霉菌置培養(yǎng)箱中30℃下培養(yǎng)48小時(shí)，測(cè)量24小時(shí)、48小時(shí)后濾紙片周?chē)志χ睆酱笮?，比較抑菌效果。抑菌圈越大，抑菌效果越好。
試驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論 由下表結(jié)果可知本發(fā)明組合物的注射液和炎琥寧注射液、連翹注射液對(duì)供試細(xì)菌都有明顯的抑菌作用，其中對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、傷寒桿菌有很強(qiáng)的抑制作用，對(duì)白色念珠菌、溶血鏈球菌有較強(qiáng)的抑制作用。當(dāng)炎琥寧和連翹重量份數(shù)分別為40mg、30g時(shí)抑菌圈最大即抑菌效果最好，且組合物注射液的抑菌效果分別與炎琥寧注射液、連翹注射液的抑菌效果相比較，前者對(duì)每一供試菌種的抑菌圈直徑均大于后面二者的，療效明顯，提示兩者有協(xié)同增效的作用。
表1 8％組合物注射液對(duì)供試菌的抑菌作用(抑菌直徑mm)
注表中抑菌直徑為平均值。
試驗(yàn)例2 組合物體內(nèi)抗病毒試驗(yàn)供試品 對(duì)照組氯化鈉注射液(山東長(zhǎng)富潔晶藥業(yè)有限公司)連翹組連翹注射液，自制炎琥寧組炎琥寧注射液，自制組合物組炎琥寧和連翹分別為40mg、30g，低、中、高三個(gè)劑量組，自制受試動(dòng)物 昆明種小鼠130只，體重14～15g，雌雄各半，將小鼠隨機(jī)分為感染對(duì)照組、正常對(duì)照組、連翹組、炎琥寧組、組合物注射液低、中、高組，每組10只。
病毒 流感病毒亞甲型鼠肺適應(yīng)株FM1，-70℃保存?zhèn)溆谩?br> 方法1.對(duì)小鼠流感性病毒肺炎的作用除正常組外，將小鼠用乙醚麻醉，以15個(gè)LD50流感病毒液(FM1)滴鼻感染。從感染前一天開(kāi)始腹腔注射給藥，連翹組給藥量為50mg/kg，炎琥寧注射液8mg/kg，組合物注射液低、中、高三組分別為30、40、50mg/kg，每天1次，連續(xù)5天，其中感染對(duì)照組與正常對(duì)照組給予同體積生理鹽水。第6天稱(chēng)取小鼠體重后解剖，摘取全肺稱(chēng)重，逐個(gè)計(jì)算肺指數(shù)值，并求出肺指數(shù)抑制率。公式如下肺指數(shù)＝肺重(g)/體重(g)×100
肺指數(shù)抑制率％＝(病毒對(duì)照組肺指數(shù)均值-試驗(yàn)組肺指數(shù)均值)/病毒對(duì)照組肺指數(shù)均值×100％注肺指數(shù)大，表示肺重量大，肺病變程度嚴(yán)重。
2.對(duì)小鼠肺內(nèi)流感病毒增殖量的影響除病毒感染量為1000LD50外，給藥方法同上。病毒感染后48小時(shí)處死小鼠，解剖取肺，摘取左側(cè)中葉肺固定，按病理切片常規(guī)脫水、包埋、制作石蠟切片。以間接免疫熒光法染色，觀察感染鼠內(nèi)特異性的病毒抗原，判斷藥物對(duì)病毒增殖的作用，熒光陽(yáng)性數(shù)越多，表明病毒顆粒增殖多。
上述試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)以x±s表示，采用t檢驗(yàn)，比較組間差異性。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表。
表2組合物對(duì)流感病毒感染小鼠肺部炎癥的影響(x±s，n＝10)
注與感染對(duì)照組相比*p＜0.05，**p＜0.01表3組合物對(duì)小鼠肺肺內(nèi)流感病毒增殖量的影響(x±s，n＝10)
注與感染對(duì)照組相比*p＜0.05，**p＜0.01試驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論由表2結(jié)果可知感染后小鼠肺指數(shù)值明顯增大，組合物注射液對(duì)流感病毒感染小鼠引起的肺炎有明顯的抑制作用(p＜0.01)，肺指數(shù)值明顯降低，抑制率增高肺組織病變程度明顯減輕。炎琥寧注射液對(duì)流感病毒感染小鼠引起的肺炎也有抑制作用(p＜0.05)。由表3結(jié)果可以看出組合物注射液對(duì)小鼠肺內(nèi)流感病毒增殖量有明顯的抑制作用(p＜0.01)，炎琥寧注射液對(duì)小鼠肺內(nèi)流感病毒增殖量也有抑制作用(p＜0.05)。而兩試驗(yàn)中連翹注射液療效不明顯。上述結(jié)果表明組合物注射液對(duì)流感病毒的增殖及引起的肺炎有較顯著的作用，明顯優(yōu)于單用連翹注射液或炎琥寧注射液，提示兩者有協(xié)同增效的作用。
試驗(yàn)例3 組合物體內(nèi)抑菌試驗(yàn)供試品 對(duì)照組氯化鈉注射液(山東長(zhǎng)富潔晶藥業(yè)有限公司)連翹組連翹注射液，自制炎琥寧組炎琥寧注射液，自制組合物組炎琥寧和連翹分別為40mg、30g，注射液自制受試動(dòng)物健 康小鼠40只，體重23～29g，雌雄兼用，隨機(jī)分為連翹注射液組、炎琥寧注射液組、組合物注射液組、氯化鈉注射液組，共4組，每組10只。
菌液 用5％胃膜素稀釋金黃色葡萄球菌、傷寒桿菌、大腸桿菌、肺炎鏈球菌，含菌量均為1010個(gè)/ml。
方法 每只小鼠腹腔注射菌液0.5ml感染，注射菌液后1、6小時(shí)分別腹腔注射連翹注射液50mg/kg、炎琥寧注射液8mg/kg、氯化鈉注射液50mg/kg，組合物注射液50mg/kg等感染后觀察24小時(shí)動(dòng)物生存數(shù)，判斷藥品保護(hù)作用。
表4組合物注射液對(duì)感染小鼠的保護(hù)作用
注*為小鼠處于瀕死狀態(tài)而被處死。
試驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論 金黃色葡萄球菌、傷寒桿菌、大腸桿菌和肺炎鏈球菌感染小鼠各治療組中，組合物注射液、炎琥寧注射液和連翹注射液對(duì)感染小鼠均有保護(hù)作用，但組合物注射液的保護(hù)作用明顯強(qiáng)于炎琥寧注射液、連翹注射液組單獨(dú)用藥，提示兩藥有協(xié)同作用。
試驗(yàn)例4 組合物對(duì)內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱試驗(yàn)受試動(dòng)物 體溫范圍在38.5～39.5℃內(nèi)且體溫波動(dòng)在0.3℃內(nèi)的家兔42只，體重2.2～2.5kg，按基礎(chǔ)體溫分層隨機(jī)分成7組，每組6只供試品 對(duì)照組氯化鈉注射液，山東華信制藥有限公司阿司匹林組連翹組連翹注射液，自制炎琥寧組炎琥寧注射液，自制組合物組炎琥寧和連翹分別為40mg、30g，分為低、中、高三個(gè)劑量組，自制方法 將家兔隨機(jī)分為對(duì)照組、阿司匹林組、連翹注射液組、炎琥寧注射液組、組合物低、中、高劑量組。各給藥組每日灌胃給藥，炎琥寧注射液組給藥量為4mg/kg，對(duì)照組灌胃等體積的氯化鈉注射液，其余組均為25mg/kg。連續(xù)灌胃3天，第三天給藥后半小時(shí)每兔均從耳緣靜脈注射大腸桿菌內(nèi)毒素150ug/kg，于內(nèi)毒素攻擊0.5、1、2、3、4、6小時(shí)后，分別測(cè)量體溫，以藥前測(cè)得3次體溫平均值為基數(shù)，計(jì)算各測(cè)定點(diǎn)時(shí)間兔體溫變化值(ΔT)。各組數(shù)據(jù)以X±SD℃表示，作t檢驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表。
表5組合物注射液對(duì)內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱的影響(n＝7，X±SD℃)
注*p＜005，#p＜0.01與賦性劑組比較；△p＜0.05與阿司匹林組比較；&p＜0.01與連翹組或炎琥寧組比較。
試驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論 由上表結(jié)果可以看出阿司匹林組、連翹注射液組、炎琥寧注射液組和組合物低、中、高三個(gè)劑量組均有顯著的解熱作用。組合物注射液組和阿司匹林組在給藥0.5小時(shí)后有明顯解熱作用(p＜0.05，p＜0.01)且可維持6小時(shí)。組合物注射液組在給藥3小時(shí)后與阿司匹林組有比較明顯的解熱作用(p＜0.05)。且組合物注射液組與連翹注射液組或炎琥寧注射液組相比解熱作用明顯(p＜0.01)，提示兩藥有協(xié)同增效作用。
試驗(yàn)例5 組合物對(duì)小鼠滑膜炎的治療作用試驗(yàn)試驗(yàn)動(dòng)物 KM小鼠，18～22g，共60只，隨機(jī)分為6組，每組10只供試品 對(duì)照組氯化鈉注射液，山東華信制藥有限公司連翹組連翹注射液，自制炎琥寧組炎琥寧注射液，自制組合物組炎琥寧與連翹分別為40mg、30g，低、中、高三個(gè)劑量組，自制方法 將小鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為生理鹽水對(duì)照組、連翹注射液組、炎琥寧注射液組、組合物低劑量組、組合物中劑量組和組合物高劑量組。分別腹腔注射給予連翹注射液50mg/kg，炎琥寧注射液組8mg/kg，組合物低、中、高三個(gè)劑量組30、40、50mg/kg，連續(xù)給藥1周；給藥當(dāng)天時(shí)，受試小鼠背部皮下注射空氣5ml，第3天及第6天再次注入空氣3ml，維持氣囊的膨脹，制造小鼠氣囊滑膜炎模型。于末次給藥后2小時(shí)囊內(nèi)注射30％雞蛋清1ml，6小時(shí)后處死小鼠，于氣囊內(nèi)注入生理鹽水(含肝素50U/ml)2.5ml，輕輕按壓，吸出1ml，1000r/min離心10分鐘，計(jì)數(shù)白細(xì)胞量，上清液用紫外分光光度法檢測(cè)前列腺素E2含量，以O(shè)D表示。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表。
表6組合物注射液對(duì)小鼠滑膜炎的治療作用
注與生理鹽水對(duì)照組比較，*表示p＜0.05，**表示p＜001；與連翹組或炎琥寧組比較，#p＜0.01試驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論 由上表結(jié)果可以看出連翹注射液、炎琥寧注射液和組合物注射液均可明顯降低氣囊滲出液OD值和滲出液中的白細(xì)胞數(shù)，而組合物注射液與連翹注射液或炎琥寧注射液相比較具有明顯治療小鼠滑膜炎的作用，提示兩藥有協(xié)同增效的作用。
試驗(yàn)例6 小鼠注射給藥急性毒性試驗(yàn)(1)試驗(yàn)方法供試品組合物注射液，炎琥寧和連翹分別為40mg、30g，自制受試動(dòng)物小鼠，每組雌雄各5只，雄性體重25～28g，雌性體重21～24g。
給藥途徑靜脈注射、腹腔注射。
給藥劑量尾靜脈注射100mg/kg，腹腔注射200mg/kg。
觀察項(xiàng)目死亡數(shù)、一般狀態(tài)、體重、剖檢、半數(shù)致死劑量。
(2)試驗(yàn)結(jié)果死亡數(shù)未出現(xiàn)死亡。
一般狀態(tài)未見(jiàn)異常變化。
體重于給藥前1天，給藥日，給藥后1、3、7、14天測(cè)量；未見(jiàn)異常變化。
剖檢心、肝、肺、腎等組織未見(jiàn)異常變化。
(3)結(jié)論本試驗(yàn)中未出現(xiàn)死亡，推測(cè)組合物注射液對(duì)雌雄小鼠靜脈給藥的半數(shù)致死劑量(LD50)均大于100mg/kg，腹腔注射給藥的半數(shù)致死劑量(LD50)均大于200mg/kg。
試驗(yàn)例7 組合物粉針劑穩(wěn)定性試驗(yàn)供試品組合物注射液，炎琥寧和連翹分別為40mg、30g，白制考察項(xiàng)目性狀、pH值、澄明度、有關(guān)物質(zhì)、標(biāo)示含量；并在加速試驗(yàn)6個(gè)月和長(zhǎng)期試驗(yàn)期末增加無(wú)菌和熱原檢查。
1、影響因素試驗(yàn)強(qiáng)光照射試驗(yàn)取供試品，置照度為4500Lx的光照箱內(nèi)放置10天。
高溫試驗(yàn)取供試品，分別置于40℃、60℃條件下放置10天。
低溫試驗(yàn)取供試品，在4℃冰箱中放置10天。
上述試驗(yàn)，分別于第5、10天取樣測(cè)定。比較性狀后測(cè)試各項(xiàng)指標(biāo)，并將結(jié)果與0天比較。
結(jié)果光照4500Lx條件下放置10天，除有關(guān)物質(zhì)略有升高外，其它各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯變化。高溫60℃條件下放置10天，各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)明顯變化。高溫40℃、低溫4℃條件下放置10天，各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)明顯變化。
2、加速試驗(yàn)方法置溫度40℃±2℃、相對(duì)濕度75％±5％的條件下放置6個(gè)月。在試驗(yàn)期間分別于第1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月末取樣，比較外觀后，測(cè)試各項(xiàng)指標(biāo)，將結(jié)果與0個(gè)月比較；并在6個(gè)月末增加無(wú)菌和熱原檢查。
結(jié)果溫度40℃±2℃、相對(duì)濕度75％±5％的條件下放置6個(gè)月，除有關(guān)物質(zhì)略有增加，標(biāo)示含量略有下降外，其它各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯變化，加速試驗(yàn)6個(gè)月末，熱原、無(wú)菌檢查均符合規(guī)定。
3、長(zhǎng)期試驗(yàn)方法置溫度25℃±2℃、相對(duì)濕度60％±10％的條件下放置18個(gè)月。分別于第3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月、12個(gè)月、18個(gè)月，比較外觀后，測(cè)試各項(xiàng)指標(biāo)，將結(jié)果與0個(gè)月比較；并在18個(gè)月末增加無(wú)菌和熱原檢查。
結(jié)果溫度25℃±2℃、相對(duì)濕度60％±10％的條件下放置18個(gè)月，各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯變化，長(zhǎng)期試驗(yàn)18個(gè)月末，熱原、無(wú)菌檢查均符合規(guī)定。
結(jié)論由上述考察結(jié)果得出結(jié)論，各項(xiàng)試驗(yàn)中，組合物注射液各項(xiàng)指標(biāo)均比較穩(wěn)定。
綜上所述，本發(fā)明提供的炎琥寧與連翹組合物具有協(xié)同增效作用，明顯優(yōu)于炎琥寧或連翹單獨(dú)給藥的藥效。對(duì)組合物注射液進(jìn)行的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明提供的炎琥寧與連翹組合物制成的注射劑的各項(xiàng)指標(biāo)均比較穩(wěn)定，可以用于放大生產(chǎn)。
具體實(shí)施方式以下通過(guò)實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步闡述本發(fā)明藥物組合物的制備方法，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。以下實(shí)施例中各劑型的輔料可以用藥學(xué)上可接受的輔料替換，或者減少、增加。
實(shí)施例1 連翹提取物的制備1.連翹的制備 取連翹藥材，粉碎成粗粉，加水煎煮3次，第一次加水10倍量，第二、三次分別為8倍量，每次1.5小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液(50℃)減壓濃縮至相對(duì)密度為1.10～1.20(室溫)的清膏，放冷，加入4倍量的乙醇，攪勻，靜置2小時(shí)，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇，濃縮液噴霧干燥，得連翹提取物即粗提物(供口服用)。
2.連翹提取物的精制 取連翹提取物，加水適量，加熱溶解，將溶液加到已預(yù)先處理并裝好的D2820型大孔吸附樹(shù)脂(提取物和樹(shù)脂比例為1∶15～20)慢慢滴加完后，用水洗脫至還原糖反應(yīng)呈陰性(1ml水洗脫液加入甲基萘酚0.5％試液2～3滴，沿試管壁緩緩加0.5ml濃硫酸，陰性為二試液界面出現(xiàn)棕色環(huán))，然后分別用水液和20％乙醇洗脫，收集20％乙醇洗脫液，回收乙醇，噴霧干燥，得連翹提取物即精提物(供注射或口服用)。
3.連翹提取物的鑒別取由連翹粗提物1g，精提取物0.1g，加甲醇10ml，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液作為供試品溶液。另取連翹對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。吸取上述三種溶液各10ul，分別點(diǎn)于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷—甲醇(5∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
4.連翹提取物的含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)試用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈—水(25∶75)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為277nm。理論板數(shù)按連翹苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取連翹苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取連翹粗提物1g、連翹精提物0.2g，分別精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇15ml，稱(chēng)定重量，浸漬過(guò)夜，超聲處理(功率100W，頻率40kHz)30分鐘，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5ml，蒸至近干，加中性氧化鋁1.5g攪勻，加置中性氧化鋁柱(100～120目，3g，內(nèi)徑1～1.5cm)上，用70％乙醇240ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘?jiān)?0％甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，用50％甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
連翹粗提物中連翹苷(C29H36O15)的含量為0.52％，得率為10.33％。
連翹粗提物中連翹苷(C29H36O15)的含量為0.89％，得率為13.57％。
按照上述精制工藝制得三批連翹提取物，連翹苷含量和得率見(jiàn)表5。由結(jié)果可以看出，通過(guò)本工藝制得的連翹提取物中連翹苷含量不低于10％，得率為0.5～2％。
表5 連翹提取物的含量測(cè)定結(jié)果和得率
以下實(shí)施例的連翹提取物是精制三批連翹提取物中的第三批。
以下實(shí)施例中的14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽以炎琥寧為例。
實(shí)施例2 本發(fā)明組合物粉針劑的制備處方炎琥寧40g連翹提取物333g(相當(dāng)于連翹30kg)甘露醇300g無(wú)菌注射用水 加至3000ml共制備1000支制備工藝1)首先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，膠塞等進(jìn)行無(wú)菌處理。
2)按照處方量稱(chēng)取原料和輔料。
3)取配液量40％的注射用水，加入處方量的炎琥寧，加熱攪拌溶解完全。連翹提取物加少量注射用水，加熱溶解。合并上述溶液，再加入甘露醇加熱攪拌溶解完全，補(bǔ)加無(wú)菌注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的PH值。
6)經(jīng)0.22um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)分裝于抗生素玻璃瓶中，半壓塞。將樣品放入凍干機(jī)中冷凍干燥。預(yù)凍-45℃5小時(shí)，低溫真空干燥-45℃～0℃20小時(shí)，然后升溫至25℃真空干燥3小時(shí)。
9)凍干結(jié)束，壓塞，軋蓋。
10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例3 本發(fā)明組合物水針劑的制備處方炎琥寧40g連翹提取物333g(相當(dāng)于連翹30kg)注射用水 加至2000ml共制備1000支制備工藝1)一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)取配液量40％的注射用水，加入處方量的炎琥寧溶解完全，連翹提取物加少量注射用水，加熱溶解。
2)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
3)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
4)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的PH值。
5)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
6)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
7)將溶液熔封于玻璃安瓿中。
8)100℃流通蒸汽滅菌30分鐘。
10)熱將樣品放入0.01％的亞甲藍(lán)溶液中檢漏。
11)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例4 本發(fā)明組合物輸液的制備氯化鈉輸液處方炎琥寧40g連翹提取物333g(相當(dāng)于連翹30kg)氯化鈉900g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶制備工藝1)前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)取配液量40％的注射用水，加入處方量的炎琥寧，加熱攪拌溶解完全。連翹提取物加少量注射用水，加熱溶解。將氯化鈉用配液量40％的注射用水溶解完全。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的PH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)灌裝于100ml的輸液瓶中。
9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
葡萄糖輸液處方炎琥寧40g連翹提取物333g(相當(dāng)于連翹30kg)葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶制備工藝1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗。
2)取配液量40％的注射用水，加入處方量的炎琥寧，加熱攪拌溶解完全。連翹提取物加少量注射用水，加熱溶解。將葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘。
5)經(jīng)砂濾棒過(guò)濾脫炭。測(cè)定并調(diào)節(jié)溶液的PH值。
6)經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾。
7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)。
8)灌裝于100ml的輸液瓶中。
9)115℃熱壓滅菌30分鐘。
10)燈檢，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例5 本發(fā)明組合物膠囊劑的制備處方炎琥寧40g連翹提取物333g(相當(dāng)于連翹30kg)淀粉 60.0g微晶纖維素20.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 1.0g共制備1000粒制備工藝1)將炎琥寧和連翹提取物粉碎過(guò)100目篩備用。
2)按照處方量稱(chēng)取原料和輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將炎琥寧、連翹提取物、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過(guò)20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂，過(guò)18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗(yàn)。
9)按照化驗(yàn)確定的裝量裝入膠囊。
10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例6 本發(fā)明組合物片劑的制備處方炎琥寧40g連翹提取物333g(相當(dāng)于連翹30kg)淀粉 120.0g微晶纖維素40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 2.0g羧甲淀粉鈉4.0g共制備1000片制備工藝1)將炎琥寧和連翹提取物粉碎過(guò)100目篩備用。
2)按照處方量稱(chēng)取原料和輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將炎琥寧、連翹提取物、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過(guò)20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲淀粉鈉，過(guò)18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗(yàn)。
9)按照化驗(yàn)確定的片重壓片。
10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例7 本發(fā)明組合物軟膠囊劑的制備處方炎琥寧40g連翹提取物333g(相當(dāng)于連翹30kg)大豆油500.0g大豆磷脂 50g蜂蠟 50g共制備1000粒制備工藝將炎琥寧和連翹提取物分別粉碎過(guò)100目篩，將處方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蠟加熱熔融，混勻，放冷，加入炎琥寧和連翹提取物研勻，壓制成軟膠囊即可。
實(shí)施例8 本發(fā)明組合物顆粒劑的制備處方炎琥寧40g連翹提取物333g(相當(dāng)于連翹30kg)糖粉 1000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備1000袋制備工藝1)將蔗糖粉碎過(guò)100目篩備用。將炎琥寧和連翹提取物粉碎過(guò)100目篩備用。
2)按照處方量稱(chēng)取原料和輔料。
3)將炎琥寧、連翹提取物與糖粉以等量遞加的方法混合均勻，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材，4)過(guò)20目篩制顆粒。
5)顆粒在60℃的條件下烘干。
6)干顆粒過(guò)18目篩整粒。
7)取樣，半成品化驗(yàn)顆粒中主藥的含量，確定裝量。
8)包裝，成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例9 本發(fā)明組合物口服液的制備處方炎琥寧4g連翹提取物333g(相當(dāng)于連翹30kg)苯甲酸鈉 15g甜菊甙10g水加至10000ml共制備1000支制備工藝1)先將炎琥寧加入加熱攪拌溶解完全。連翹提取物加少量水加熱溶解完全。
2)將苯甲酸鈉和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全。
3)合并上述溶液，補(bǔ)加水至全量。
4)過(guò)0.8um的微孔濾膜過(guò)濾。
5)半成品化驗(yàn)。
6)灌裝。成品全檢，包裝入庫(kù)。
實(shí)施例10 本發(fā)明組合物滴丸劑的制備處方炎琥寧4g連翹提取物333g(相當(dāng)于連翹30kg)聚乙二醇6000 600g制備工藝將聚乙二醇6000在水浴中加熱熔融，待全部熔融后加入炎琥寧和連翹提取物，攪拌溶解，60目篩過(guò)濾，保持60℃滴入冷至10℃以下的液體石蠟中制成丸。
實(shí)施例11 本發(fā)明組合物口崩片的制備處方炎琥寧40g連翹提取物333g(相當(dāng)于連翹30kg)交聯(lián)聚維酮120.0g甘露醇40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 2.0g羧甲淀粉鈉4.0g共制備1000片制備工藝1)將炎琥寧和連翹提取物粉碎過(guò)100目篩備用。
2)照處方量稱(chēng)取原料和輔料。
3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用。
4)將炎琥寧、連翹提取物、交聯(lián)聚維酮和甘露醇混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材。
5)過(guò)20目篩制顆粒。
6)顆粒在60℃的條件下烘干。
7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲淀粉鈉，過(guò)18目篩整粒，混合均勻。
8)取樣，半成品化驗(yàn)。
9)按照化驗(yàn)確定的片重壓片。
10)成品全檢，包裝入庫(kù)。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于它由14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯或其藥學(xué)上可接受的鹽與連翹或連翹提取物制成。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于其重量份數(shù)為14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽5～200份，連翹5000～150000份或連翹提取物20～3000份。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于其重量份數(shù)為14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽20～100份，連翹10000～100000份或連翹提取物50～2000份。
4.如權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征在于其重量份數(shù)為14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽40份，連翹15000～60000份或連翹提取物70～1500份。
5.如權(quán)利要求1～4所述的藥物組合物，其特征在于所述的14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽為單鉀鹽、單鈉鹽或鉀鈉鹽。
6.如權(quán)利要求1～4所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于包括以下步驟a.取連翹藥材，粉碎成粗粉，用水提取，濾過(guò)，合并濾液，濃縮得濃縮液；b.向濃縮液中加入乙醇，靜置，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇，濃縮液噴霧干燥，得連翹提取物；c.將連翹提取物、14-脫羥-11，12-二脫氫穿心蓮內(nèi)酯-3，19-二琥珀酸半酯鹽與藥物可接受的載體混合，制成制劑。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于，步驟b得到的連翹提取物中連翹苷的含量不低于0.5％。
8.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于，步驟b得到的連翹提取物還可以進(jìn)一步精制，步驟為取連翹提取物，加水適量，加熱溶解，上柱，分別用水液和乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，噴霧干燥，即得連翹提取物。其中連翹苷的含量不低于10％。
9.如權(quán)利要求1～4所述的任一藥物組合物，其特征在于該組合物可制成任何一種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。
10.如權(quán)利要求1～4所述的任一藥物組合物，其特征在于該組合物可制成注射劑。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開(kāi)了一種新的抗菌抗病毒藥物組合物及其制備方法，它由14－脫羥－11，12－二脫氫穿心蓮內(nèi)酯－3，19－二琥珀酸半酯或其藥學(xué)上可接受的鹽與連翹或連翹提取物制成，其重量份數(shù)為14－脫羥－11，12－二脫氫穿心蓮內(nèi)酯－3，19－二琥珀酸半酯鹽5～200份，連翹5000～150000份或連翹提取物20～3000份。該藥物組合物可制成各種藥學(xué)上可接受的劑型，優(yōu)選注射劑或口服制劑；具有抗菌、抗病毒、抗炎、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)咳化痰、止嘔、解熱、保肝、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等作用。
文檔編號(hào)A61P31/04GK1939420SQ200510044769
公開(kāi)日2007年4月4日 申請(qǐng)日期2005年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月26日
發(fā)明者蔡軍 申請(qǐng)人:蔡軍