專利名稱：硫酸化nf的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物制藥技術(shù)領(lǐng)域。
近十余年來，硫酸化多糖作為一類新的抗AIDS藥物，在國(guó)內(nèi)外受到人們的重視。它是一類化學(xué)結(jié)構(gòu)復(fù)雜，生物活性多樣，構(gòu)效關(guān)系鮮明的生物活性物質(zhì)。
硫酸化多糖有干擾HIV對(duì)宿主靶細(xì)胞的粘附，抑制HIV抗原的表達(dá)，抑制合胞體的形成，抑制HIV逆轉(zhuǎn)錄酶的活性，增強(qiáng)免疫功能等生物活性，這些生物活性程度與其多糖上所掛的硫酸根數(shù)量有關(guān)，也與硫酸化多糖的空間結(jié)構(gòu)有關(guān)。除了抗凝血作用的副作用以外，至今未發(fā)現(xiàn)有新的副作用。
在國(guó)外，1987年原聯(lián)邦德國(guó)Bayer與Hoechst公司聯(lián)合研制人工合成的木聚糖硫酸酯，此后美國(guó)人工合成的戊聚糖硫酸酯和硫酸化β-1，3-D葡聚糖都已經(jīng)臨床試用，均得到了滿意的結(jié)果，除抗凝血作用外，未發(fā)現(xiàn)新的副作用。在國(guó)內(nèi)，中國(guó)科學(xué)院上海藥物所的方積年、向道斌等對(duì)硫酸化多糖都有深入的研究，但至今未見有用于治療艾滋病的報(bào)道。
在發(fā)明專利《酒糟的凈化與利用方法》(專利號(hào)85104057.8)的基礎(chǔ)上，篩選培育出風(fēng)尾菇NF1菌株，已由“中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)，普通微生物中心”保藏(NF1菌株的保藏號(hào)為CGMCC NO.0852，保藏日期為2002年12月9日)，以酒糟作為培養(yǎng)基，接種NF1菌株，經(jīng)液體深層發(fā)酵工程方法，獲發(fā)酵液，從發(fā)酵液中分離、純化獲NF1菌多糖，用恩酮法檢測(cè)其含糖量，其得率為2g/1000ml，經(jīng)南京大學(xué)分析中心紅外光譜檢測(cè)其主要成份為β-1，3-葡聚糖(見附件一)，將其磺化反應(yīng)獲硫酸化NF1菌多糖，據(jù)C.R.Ricketts，《BiochemistryJournal》Vol.51報(bào)道，鑒定其硫酸化程度。將硫酸化NF1菌多糖用腸溶膠囊灌注，成為硫酸化NF1菌多糖腸溶膠囊，即為預(yù)防和治療艾滋病的藥。整個(gè)制備過程中不污染環(huán)境，無需附加環(huán)保治理設(shè)備。
硫酸化NF1菌多糖膠囊，經(jīng)江蘇省藥物檢驗(yàn)所，小鼠口服給藥的急性毒性試驗(yàn)其結(jié)果為L(zhǎng)D50＝10007mg/kg，肉眼觀察，所有內(nèi)臟器官未見明顯異常(見附件二)。經(jīng)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院、中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)、醫(yī)藥生物技術(shù)研究所病毒室，國(guó)內(nèi)著名病毒學(xué)專家陳鴻珊研究員的設(shè)計(jì)、檢驗(yàn)，該藥物(NFS1)對(duì)HIV-1 RT(逆轉(zhuǎn)錄酶)的抑制率為94.02％，同時(shí)做的NFS2，因含硫酸根量相對(duì)NFS1少，其抑制率為71.63％(見附件三)。經(jīng)云南省昆明市性疾病控制與預(yù)防中心對(duì)5例AIDS患者(志愿者)口服硫酸化NF1菌多糖腸溶膠囊(其劑量為0.3g/粒，5粒/次，2次/日)，為期6天，并在其口服前后進(jìn)行CD4和CD8的檢測(cè)，其結(jié)果表明，本藥對(duì)AIDS癥狀明顯的患者有治療效果(見附件四)。
本發(fā)明所制備硫酸化NF1菌多糖的原料是酒糟，用液體深層發(fā)酵方法，整個(gè)制備工藝相對(duì)簡(jiǎn)單，因此成本低，由此制備的藥價(jià)也相對(duì)低廉。而國(guó)內(nèi)外常用的制備抗艾滋病的藥，用人工合成方法和褐藻中提取方法等，其工藝相對(duì)復(fù)雜，因此藥價(jià)昂貴。
也因制備硫酸化NF1菌多糖的原料和方法與國(guó)內(nèi)外不同，因此其主要成份的空間結(jié)構(gòu)也會(huì)不同，根據(jù)硫酸化多糖的構(gòu)效關(guān)系原理，本藥物治療艾滋病的效果也會(huì)與國(guó)內(nèi)外有所不同。
硫酸化NF1菌多糖，可以進(jìn)一步作深度開發(fā)，據(jù)我們已有的研究表明，硫酸化NF1菌多糖可以制備降血糖、降血脂和治療肝癌病藥物的原料。
四、具體實(shí)施方案取蔗糖14公斤，玉米粉2公斤，麩皮5公斤加Ca(OH)2輔料混勻，調(diào)PH至6左右，將上述混合物加入已空消后的一噸發(fā)酵罐中，經(jīng)實(shí)消時(shí)壓力為15公斤，溫度為125℃，歷時(shí)40分鐘后，當(dāng)罐溫降至30℃時(shí)，加入風(fēng)尾菇NF1菌株，其重量約為100公斤的液體菌種，使發(fā)酵體積為1噸，經(jīng)控溫至30℃，壓力為0.5大氣壓，經(jīng)3天發(fā)酵即完成。從罐中放出發(fā)酵液，經(jīng)過濾，獲殘?jiān)?包括菌絲體在內(nèi))，作飼料出售，剩下液體經(jīng)減壓，濃縮成原體積的10％，然后在此濃縮液中加酒精沉淀法分離、純化獲NF1菌多糖，用恩酮法檢測(cè)多糖含量。將此多糖用氯磺酸-吡啶法磺化反應(yīng)方法(磺化反應(yīng)多余吡啶入水回收)獲硫酸化NF1菌多糖，用C.R.Rickett報(bào)道方法鑒定其硫酸化程度，最后將其灌注入腸溶膠囊，即成為硫酸化NF1多糖腸常用溶膠囊，也就是抗艾滋病的藥。
權(quán)利要求
1.一種鳳尾菇菌株，其特征在于風(fēng)尾菇NF1菌株，已送“中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)，普通微生物中心”保藏，保藏號(hào)為CGMCC No.0852。
2.一種硫酸化NF1菌多糖及其制備方法其特征在于以酒糟為培養(yǎng)基，接種NF1菌株，經(jīng)液體深層發(fā)酵方法獲發(fā)酵液，將其分離、純化獲NF1菌多糖，其主要成份為β-1，3-葡聚糖，將其硫酸化為硫酸化NF1菌多糖，將其灌注入腸溶膠囊，即為硫酸化NF1菌多糖腸溶膠囊。
3.根據(jù)權(quán)利要求“2”所述，硫酸化NF1菌多糖的應(yīng)用其特征在于其灌注入腸溶膠囊，經(jīng)口服可用于預(yù)防和治療艾滋病。
4.根據(jù)權(quán)利要求“2”所述，硫酸化NF1菌多糖的應(yīng)用其特征在于可用于制備降血糖、降血脂和治療肝癌病的藥物原料。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物制藥技術(shù)領(lǐng)域。在《酒糟的凈化與利用方法》專利基礎(chǔ)上，篩選培育出鳳尾菇NF
文檔編號(hào)A61K31/715GK1473926SQ0214852
公開日2004年2月11日 申請(qǐng)日期2002年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月13日
發(fā)明者陳曦, 陳濤, 陳浩, 陳 曦 申請(qǐng)人:陳曦, 陳 曦