專利名稱：一種抗菌肽緩釋微膠囊的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種微膠囊的制備方法。
背景技術(shù)：
微膠囊技術(shù)又稱為微膠囊包埋技木，或微膠囊造粒技木，是將固體、液體和氣體物質(zhì)包埋在同一個微型膠囊內(nèi)，成為ー種固體微粒的技木。通常把構(gòu)成微膠囊外殼材料稱為“壁材”或“包衣”，把包在微膠囊內(nèi)部物質(zhì)稱為“囊心”或者“芯材”等。芯材可以是固體、液體或氣體。通常，把微膠囊化方法大致分為三類，化學法、物理法和物理化學法。其中化學法包括界面聚合法、原位聚合法、銳孔-凝固法、包絡(luò)法等；物理法包括鍋包法、空氣懸浮法、噴霧法、擠壓法等；物理化學法包括復(fù)合凝聚法、單凝聚法、油相分離法、復(fù)相乳液法、粉末床法等。 目前最為常用的是以殼聚糖、海藻酸鈉為包埋材料制備的微膠囊。將殼聚糖溶解于こ酸溶液，加入一定量的氯化鈣，并用NaOH溶液調(diào)節(jié)殼聚糖溶液的pH值；另稱取海藻酸鈉加入蒸餾水中，并使其充分溶解，然后加入芯材，用玻璃棒攪勻。最后將芯材與海藻酸鈉的水溶液緩慢滴入到殼聚糖-氯化鈣溶液中，磁力攪拌器低速攪拌，收集微膠囊，干燥備用。這種方法需要將芯材與海藻酸鈉的水溶液緩慢逐滴滴入殼聚糖-氯化鈣溶液中才能保證微膠囊中芯材的包膜率和包裹均勻；但是這種制備方式只適合于實驗室或小規(guī)模生產(chǎn)，難以形成產(chǎn)業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)?？咕木哂袕V譜殺菌作用，包括對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌，尤其對耐藥菌株有明顯的抑殺作用。例如，從麻蠅分離到的sarcotoxin I在濃度為O. 3 μ g/mL時就足以殺死志賀氏菌、巨大芽孢桿菌、微球菌、棒狀桿菌、Proteus sonnei以及對鏈霉素產(chǎn)生耐藥性的大腸桿菌。Moriein (絲蠶抗菌肽)對大腸桿菌JM109、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌等13種細菌均有明顯的抑制作用，而且它們的最小致死濃度均低于0.9 μ M。麻蠅抗菌肽SarCotoxinIA能抑制某些有害腸道菌的生長，尤其是對常引起食物中毒的大腸桿菌0157作用效果最明顯，而且它對正常人體內(nèi)的共生細菌并無損傷，因此可用來改變腸道細菌群落的組成，從而增強人體體質(zhì)?？咕膶毦鷼饔弥饕峭ㄟ^改變膜的通透性，使菌體因細胞內(nèi)溶物外瀉而死亡，或者抗菌肽穿過膜與DNA、RNA結(jié)合，快速導(dǎo)致細菌死亡，這種殺菌方式不易使細菌產(chǎn)生耐藥性的突變菌株，有望開發(fā)為新一代抗菌藥物。但是現(xiàn)有的抗菌肽也缺乏ー種有效地緩釋包膜。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決現(xiàn)有殼聚糖/海藻酸鈉微膠囊制備方式只適合于實驗室或小規(guī)模生產(chǎn)，難以形成產(chǎn)業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)和現(xiàn)有抗菌肽也缺乏有效地緩釋包膜的問題?？咕木忈屛⒛z囊按以下步驟制備一、將海藻酸鈉水溶液和殼聚糖酸溶液用高速勻質(zhì)機混勻，形成緩釋顆粒；
ニ、將抗菌肽和緩釋顆粒一同加入醫(yī)用混合機中進行包埋，得到抗菌肽微粒，然后對抗菌肽微粒進行β -環(huán)糊精包埋，即得到抗菌肽緩釋微膠囊。本發(fā)明制備方法在配制殼聚糖酸溶液過程中未添加氯化鈣，不會造成毒性殘留，并避免了氯化鈣在制備過程中對被包埋抗菌肽的影響，使其活性不喪失。殼聚糖分子鏈上有大量的伯氨基，海藻酸鈉的分子鏈上有大量的羧基，可以正負電荷吸引形成聚電解質(zhì)膜。本發(fā)明制備方法修改了緩釋微膠囊的配方和エ藝，并采用高速勻質(zhì)機和醫(yī)用混合機進行包埋，適合大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，而且抗菌肽包埋均勻。進行β-環(huán)糊精包埋不但可以將抗菌肽包封率提高到90%以上，而且本發(fā)明制備的緩釋微膠囊能更有效地進行抗菌肽的穩(wěn)定緩釋。本發(fā)明制備方法制備的抗菌肽緩釋微膠囊外觀形態(tài)圓整、均勻，抗菌肽緩釋微膠囊干燥后的粒徑I. 2 3mm。抗菌肽微粒粒徑約為O. 35 O. 65mm ;干燥后的抗菌肽微粒粒徑為O. I O. 2mm。
本發(fā)明制備方法制備的抗菌肽緩釋微膠囊不產(chǎn)生抗藥性，抗菌肽包封率高達90%以上，可大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
具體實施例方式具體實施方式
一本實施方式抗菌肽緩釋微膠囊按以下步驟制備一、將海藻酸鈉水溶液和殼聚糖酸溶液用高速勻質(zhì)機混勻，形成緩釋顆粒；ニ、將抗菌肽和緩釋顆粒一同加入醫(yī)用混合機中進行包埋，得到抗菌肽微粒，然后對抗菌肽微粒進行β -環(huán)糊精包埋，即得到抗菌肽緩釋微膠囊。
具體實施方式
ニ 本實施方式與具體實施方式
一的不同點是步驟一中殼聚糖酸溶液中殼聚糖質(zhì)量濃度為O. 25% (W/V) I. 5% (W/V)、脫こ酰度為82% 85%，殼聚糖由分子量為3. 3 X IO5 4. 6 X IO5的高分子量殼聚糖和分子量為O. 72 X IO5 I. 19 X IO5的低分子量殼聚糖按I : I的質(zhì)量比組成；而且殼聚糖酸溶液中加入葡萄糖，殼聚糖酸溶液中殼聚糖與葡萄糖的摩爾比為O. 3 O. 8。其它步驟及參數(shù)與實施方式一相同。本實施方式中殼聚糖酸溶液濃度需> O. 25% (W/V)，殼聚糖酸溶液濃度升高，微膠囊的控制性增強。本實施方式中葡萄糖作為可塑劑加入，可提高緩釋微膠囊強度5%以上。低分子量殼聚糖所制備的微膠囊顆粒強度高，其制備的微膠囊顆粒厚度高于高分子量殼聚糖，抗膨脹能力較強，因而機械強度較強；但殼聚糖分子量過低，其韌性和弾性相對較差；而殼聚糖進入海藻酸鈉的深度一祥，分子量越大的殼聚糖和海藻酸鈉的結(jié)合位點數(shù)就越多，在海藻酸鈉間架橋的能力就越強，形成微膠囊的強度就越高，控釋就相對越強。本發(fā)明中合理的配比低分子量殼聚糖與高分子量殼聚糖之間的比例，使微膠囊顆粒的強度與韌性和弾性都有明顯的提高。本發(fā)明抗菌肽緩釋微膠囊的強度達74. 95以上，韌性及彈性達58. 42以上；抗菌肽和緩釋顆粒進行包埋的包封率70. 26。而且抗菌肽在含有高分子量殼聚糖和低分子量殼聚糖的混合殼聚糖制備的微膠囊顆粒中的釋放慢，能夠有效的緩釋，達到長期穩(wěn)定持續(xù)的釋放藥物。實驗表明抗菌肽在本發(fā)明混合殼聚糖制備的微膠囊顆粒中的釋放速度比單純高分子量殼聚糖制備的微膠囊顆粒更慢，本發(fā)明抗菌肽緩釋微膠囊12小時抗菌肽釋放量為70%，而添加單純高分子殼聚糖12小時抗菌肽釋放量為85%。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一或ニ的不同點是步驟一海藻酸鈉水溶液中海藻酸鈉的質(zhì)量濃度為I. 5% 2.0%。其它步驟及參數(shù)與實施方式一或二相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一、ニ或三的不同點是步驟一海藻酸鈉水溶液與殼聚糖酸溶液混勻過程中調(diào)節(jié)PH值為5. 2 5. 7。其它步驟及參數(shù)與實施方式一、ニ或三相同。本實施方式制備方法步驟一海藻酸鈉水溶液與殼聚糖酸溶液混勻過程中調(diào)節(jié)pH值為5. 5本實施方式制備出的抗菌肽緩釋微膠囊強度最高。而且實驗證明制備過程中反應(yīng)體系的PH值越高緩釋微膠囊釋放蛋白的速度隨之加快，且釋放速度隨蛋白質(zhì)分子量的降低而增加。在體外模擬(胃液、腸液)試驗以及動物學試驗表明這個微膠囊在小鼠小腸表面能夠粘附48小時以上無破裂，從而保證藥物能夠被小腸充分吸收。微囊化藥物體外溶出實驗條件下，12小時內(nèi)在模擬腸液中釋放85%，而在模擬胃液中僅僅釋放15%，從而保證包 封藥物不被胃酸破壞，這種微膠囊在制劑エ藝條件下干燥后，能夠保持其原有的強度性能和控釋性能，可以用于固體制劑。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
一至四之一的不同點是步驟一海藻酸鈉水溶液和殼聚糖酸溶液中海藻酸鈉與殼聚糖質(zhì)量比為4 6。其它步驟及參數(shù)與實施方式一至四之一相同。
具體實施方式
六本實施方式與具體實施方式
一至五之一的不同點是步驟一形成的緩釋顆粒的粒徑為O. 35 O. 65mm，烘干后的粒徑為O. I O. 2mm。其它步驟及參數(shù)與
實施方式一至五之一相同。
具體實施方式
七本實施方式與具體實施方式
一至六之一的不同點是步驟ニ中抗菌肽與緩釋顆粒的質(zhì)量比為(3. 3 8. 6) (2 4)，抗菌肽由低分子量抗菌肽和高分子量抗菌肽按I : 2的質(zhì)量比組成,低分子量抗菌肽的相對分子量為6. 2 17. 2KD ;聞分子量抗菌肽的相對分子量為40 50KD。其它步驟及參數(shù)與實施方式一至六之一相同。本實施方式中抗菌肽選用低分子量和高分子量兩種抗菌肽，因為分子量不同其釋放速度不同，抗菌藥效也因此延續(xù)，達到持續(xù)平穩(wěn)有效地釋放。高分子量抗菌肽的獲得將低溫冷藏的蠅蛆，用組織粉碎機粉碎，過濾蛆皮等雜質(zhì)，然后用鹽析法提取高分子量抗菌肽。低分子量抗菌肽的獲得用菠蘿蛋白酶或木瓜蛋白酶(4000U/g)分解高分子量抗菌肽，高分子量抗菌肽濃度為60 100g/L、菠蘿蛋白酶或木瓜蛋白酶的用量為I. 5% (質(zhì)量分數(shù))、PH值為7、酶解溫度為45°C、酶解時間為80 200分鐘。
具體實施方式
八本實施方式與具體實施方式
一至七之一的不同點是步驟ニ中環(huán)糊精包埋按以下步驟進行向抗菌肽微粒中加入環(huán)糊精和淀粉，然后用擠壓制粒機或旋轉(zhuǎn)制粒機進行β -環(huán)糊精包埋；β -環(huán)糊精與淀粉的質(zhì)量比為(O. 05
O.I) (99. 95 99. 9)，β -環(huán)糊精和淀粉的重質(zhì)量是抗菌肽微粒質(zhì)量的6. 9 17. 2倍；β -環(huán)糊精包埋后得到的抗菌肽緩釋微膠囊的粒徑為I. 2 3_。其它步驟及參數(shù)與實施方式一至七之一相同。
具體實施方式
九本實施方式與具體實施方式
一至八之一的不同點是步驟ニ中抗菌肽微粒的粒徑為O. 35 O. 65mm。其它步驟及參數(shù)與實施方式一至八之一相同。
具體實施方式
十本實施方式與具體實施方式
一至九之一的不同點是步驟一中殼聚糖酸溶液的溶劑為體積濃度為O. I % 5%的有機酸或無機酸；溶劑優(yōu)選為こ酸。其它步驟及參數(shù)與實施方式一至九之一相同。
具體實施方式
i^一 本實施方式與具體實施方式
一至十之一的不同點是步驟ー中高速勻質(zhì)機的轉(zhuǎn)速為8000 20000r/min。其它步驟及參數(shù)與實施方式一至十之一相同。
具體實施方式
十二 本實施方式抗菌肽緩釋微膠囊按以下步驟制備一、將質(zhì)量濃度為I. 5% 2. O %的海藻酸鈉水溶液和質(zhì)量濃度為O. 25% (W/V)
I.5% (W/V)、脫こ酰度為82% 85%的殼聚糖酸溶液用高速勻質(zhì)機混勻，并調(diào)節(jié)pH值為
5.5，形成緩釋顆粒； ニ、抗菌肽與緩釋顆粒按質(zhì)量比為(3. 3 8. 6) (2 4)的比例一同加入醫(yī)用混合機中進行包埋，得到抗菌肽微粒，然后對抗菌肽微粒進行β -環(huán)糊精包埋，即得到抗菌肽緩釋微膠囊。步驟一種殼聚糖由分子量為3. 3 X IO5 4. 6 X IO5的聞分子量殼聚糖和分子量為O. 72 X IO5 I. 19 X IO5的低分子量殼聚糖按I : I的質(zhì)量比組成；而且殼聚糖酸溶液中加入葡萄糖，殼聚糖酸溶液中殼聚糖與葡萄糖的摩爾比為O. 3 O. 8 ;步驟一中殼聚糖酸溶液的溶劑為體積濃度為O. 1% 5%的有機酸或無機酸；步驟一海藻酸鈉水溶液和殼聚糖酸溶液中海藻酸鈉與殼聚糖質(zhì)量比為4 6 ；步驟ニ中抗菌肽由低分子量抗菌肽和高分子量抗菌肽按I : 2的質(zhì)量比組成，低分子量抗菌肽的相對分子量為6. 2 17. 2KD,聞分子量抗菌肽的相對分子量為40 50KD ；步驟ニ中β -環(huán)糊精包埋按以下步驟進行向抗菌肽微粒中加入β -環(huán)糊精和淀粉，然后用擠壓制粒機或旋轉(zhuǎn)制粒機進行β -環(huán)糊精包埋；β -環(huán)糊精與淀粉的質(zhì)量比為(O. 05 O. I) (99. 95 99. 9)，β -環(huán)糊精和淀粉的重質(zhì)量是抗菌肽微粒質(zhì)量的6. 9 17. 2倍；β -環(huán)糊精包埋后得到的抗菌肽緩釋微膠囊的粒徑為I. 2 3mm。步驟一中高速勻質(zhì)機的轉(zhuǎn)速為8000 20000r/min。本實施方式方法步驟ニ中抗菌肽微粒的粒徑為O. 35 O. 65mm。本實施方式方法制備的抗菌肽緩釋微膠囊抗菌肽包封率高達90%以上，可大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。本實施方式方法制備的抗菌肽緩釋微膠囊不產(chǎn)生抗藥性，針對不同的防治對象可選用不同的抗菌肽。對于志賀氏菌、巨大芽孢桿菌、微球菌、棒狀桿菌、Proteus sonnei、對鏈霉素產(chǎn)生耐藥性的大腸桿菌、大腸桿菌JM 109、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、有害腸道菌(尤其是對常引起食物中毒的大腸桿菌0157)、殺死錸刀菌Fusarium moniliforme、殺死錸刀菌Fusarium oxysporium、人類和植物病原真菌都有優(yōu)異的抑制和殺滅效果。而且采用抗菌肽對正常人體內(nèi)的共生細菌并無損傷，因此可用來改變腸道細菌群落的組成，從而增強人體體質(zhì)。本實施方式制備的抗菌肽緩釋微膠囊動物實驗本實施方式制備的抗菌肽緩釋微膠囊動物實驗表明，抗菌肽緩釋微膠囊在小鼠小腸表面能夠粘附48小時以上無破裂，從而保證藥物能夠被小腸充分吸收?？咕木忈屛⒛z囊藥物體外溶出實驗條件下，12小時內(nèi)在模擬腸液中釋放85 %，而在模擬胃液中僅僅釋放15%,從而保證包封藥物不被胃酸破壞。抗菌肽緩釋微膠囊在制劑エ藝條件下干燥后，能夠保持其原有的強度性能和控釋性能，可以用于固體制劑。本實施方式制備的抗菌肽緩釋微膠囊釋放介質(zhì)pH值實驗本實施方式制備的抗菌肽緩釋微膠囊釋放介質(zhì)pH值實驗表明，抗菌肽緩釋微膠囊在酸性或堿性介質(zhì)中釋藥性能均良好，但具有PH依賴性，在酸性介質(zhì)中釋藥速率較之在堿性介質(zhì)中快。在酸性介質(zhì)中，堿溶性的ALG (海藻酸鈉)為不溶性骨架，酸溶性的Cts (殼聚糖)為可溶性凝膠；在堿性介質(zhì)中則反之。藥物通過溶解擴散及囊材溶蝕而釋放。隨著高分子在體內(nèi)的降解，本實施方式抗菌肽緩釋微膠囊的復(fù)合膜結(jié)構(gòu)逐漸變得疏松，使內(nèi)含抗菌肽從中溶解和擴散的阻力減少，抗菌肽釋放速率加快。當抗菌肽釋放速率的加快恰好與含藥量減少所引起的釋藥速率變慢一致時，抗菌肽的長期恒量釋放得以實現(xiàn)，因而本實施方式抗菌肽緩釋微膠囊在酸性和堿性條件下均顯示出良好的釋藥性能。本實施方式制備的抗菌肽緩釋微膠的強度是75. 02，韌性及彈性是58. 42。
具體實施方式
十三本實施方式抗菌肽緩釋微膠囊按以下步驟制備一、將質(zhì)量濃度為I. 6%的海藻酸鈉水溶液和質(zhì)量濃度為I. 0% (W/V)、脫こ酰度為82%的殼聚糖酸溶液用高速勻質(zhì)機混勻，并調(diào)節(jié)pH值為5. 5，形成緩釋顆粒；ニ、抗菌肽與緩釋顆粒按質(zhì)量比為3. 3. 4的比例一同加入醫(yī)用混合機中進行包埋，得到抗菌肽微粒，然后對抗菌肽微粒進行β -環(huán)糊精包埋，即得到抗菌肽緩釋微膠囊。步驟一種殼聚糖由分子量為3. 5 X IO5 4. 5 X IO5的聞分子量殼聚糖和分子量為O. 75 X IO5 I. 15 X IO5的低分子量殼聚糖按I : I的質(zhì)量比組成；而且殼聚糖酸溶液中加入葡萄糖，殼聚糖酸溶液中殼聚糖與葡萄糖的摩爾比為O. 4 ；步驟一中殼聚糖酸溶液的溶劑為體積濃度為O. 2%的こ酸；步驟一海藻酸鈉水溶液和殼聚糖酸溶液中海藻酸鈉與殼聚糖質(zhì)量比為4 6 ；步驟ニ中抗菌肽由低分子量抗菌肽和高分子量抗菌肽按I : 2的質(zhì)量比組成，低分子量抗菌肽的相對分子量為6. 2 17. 2KD,聞分子量抗菌肽的相對分子量為40 50KD ；步驟ニ中β -環(huán)糊精包埋按以下步驟進行向抗菌肽微粒中加入β -環(huán)糊精和淀粉，然后用擠壓制粒機進行β-環(huán)糊精包埋；β-環(huán)糊精與淀粉的質(zhì)量比為O. 05 99.95，β -環(huán)糊精和淀粉的重質(zhì)量是抗菌肽微粒質(zhì)量的17倍；β -環(huán)糊精包埋后得到的抗菌肽緩釋微膠囊的粒徑為2. 5mm 3mm。步驟一中高速勻質(zhì)機的轉(zhuǎn)速為10000r/min。本實施方式制備的抗菌肽緩釋微膠的強度是75. 23，韌性及彈性是59. 17。本實施方式方法制備的抗菌肽緩釋微膠囊抗菌肽包封率為96. 5%，可大規(guī)模產(chǎn)業(yè)
化生產(chǎn)。本實施方式抗菌肽從麻蠅中分離獲得，因此本實施方式獲得的抗菌肽緩釋微膠囊可以有效地殺死志賀氏菌、巨大芽孢桿菌、微球菌、棒狀桿菌、Proteus sonnei以及對鏈霉素產(chǎn)生耐藥性的大腸桿菌。
具體實施方式
十四本實施方式抗菌肽緩釋微膠囊按以下步驟制備一、將質(zhì)量濃度為I. 6%的海藻酸鈉水溶液和質(zhì)量濃度為0. 8% (W/V)、脫こ酰度為85%的殼聚糖酸溶液用高速勻質(zhì)機混勻，并調(diào)節(jié)pH值為5. 5，形成緩釋顆粒；ニ、抗菌肽與緩釋顆粒按質(zhì)量比為4 3. 5的比例一同加入醫(yī)用混合機中進行包埋，得到抗菌肽微粒，然后對抗菌肽微粒進行β -環(huán)糊精包埋，即得到抗菌肽緩釋微膠囊。步驟一種殼聚糖由分子量為3. 8 X IO5 4. 2 X IO5的聞分子量殼聚糖和分子量為
O.80 X IO5 I. IOX IO5的低分子量殼聚糖按I : I的質(zhì)量比組成；而且殼聚糖酸溶液中加入葡萄糖，殼聚糖酸溶液中殼聚糖與葡萄糖的摩爾比為O. 5 ；
步驟一中殼聚糖酸溶液的溶劑為體積濃度為I %的鹽酸；步驟一海藻酸鈉水溶液和殼聚糖酸溶液中海藻酸鈉與殼聚糖質(zhì)量比為4 6 ；步驟ニ中抗菌肽由低分子量抗菌肽和高分子量抗菌肽按I : 2的質(zhì)量比組成，低分子量抗菌肽的相對分子量為6. 2 17. 2KD,聞分子量抗菌肽的相對分子量為40 50KD ；步驟ニ中β -環(huán)糊精包埋按以下步驟進行向抗菌肽微粒中加入β -環(huán)糊精和淀粉，然后用旋轉(zhuǎn)制粒機進行β-環(huán)糊精包埋；β-環(huán)糊精與淀粉的質(zhì)量比為O. 07 99.93，β -環(huán)糊精和淀粉的重質(zhì)量是抗菌肽微粒質(zhì)量的15倍；β -環(huán)糊精包埋后得到的抗菌肽緩釋微膠囊的粒徑為2. 2mm 2. 5mm。步驟一中高速勻質(zhì)機的轉(zhuǎn)速為12000r/min。本實施方式制備的抗菌肽緩釋微膠的強度是75. 88，韌性及彈性是59. 02。本實施方式方法制備的抗菌肽緩釋微膠囊抗菌肽包封率為97. 3%，可大規(guī)模產(chǎn)業(yè)
化生產(chǎn)。本實施方式抗菌肽為絲蠶抗菌肽，因此本實施方式獲得的抗菌肽緩釋微膠囊對大腸桿菌JM 109、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌等13種細菌均有明顯的抑制作用。
具體實施方式
十五本實施方式抗菌肽緩釋微膠囊按以下步驟制備—、將質(zhì)量濃度為2. O %的海藻酸鈉水溶液和質(zhì)量濃度為I. 2% (W/V)、脫こ酰度為84%的殼聚糖酸溶液用高速勻質(zhì)機混勻，并調(diào)節(jié)pH值為5. 5，形成緩釋顆粒；ニ、抗菌肽與緩釋顆粒按質(zhì)量比為6 3的比例一同加入醫(yī)用混合機中進行包埋，得到抗菌肽微粒，然后對抗菌肽微粒進行β -環(huán)糊精包埋，即得到抗菌肽緩釋微膠囊。步驟一種殼聚糖由分子量為3. 7 X IO5 4. IX IO5的聞分子量殼聚糖和分子量為
O.90 X IO5 I. 18 X IO5的低分子量殼聚糖按I : I的質(zhì)量比組成；而且殼聚糖酸溶液中加入葡萄糖，殼聚糖酸溶液中殼聚糖與葡萄糖的摩爾比為O. 6 ；步驟一中殼聚糖酸溶液的溶劑為體積濃度為3%的こ酸；步驟一海藻酸鈉水溶液和殼聚糖酸溶液中海藻酸鈉與殼聚糖質(zhì)量比為4 6 ；步驟ニ中抗菌肽由低分子量抗菌肽和高分子量抗菌肽按I : 2的質(zhì)量比組成，低分子量抗菌肽的相對分子量為6. 2 17. 2KD,聞分子量抗菌肽的相對分子量為40 50KD ；步驟ニ中β -環(huán)糊精包埋按以下步驟進行向抗菌肽微粒中加入β -環(huán)糊精和淀粉，然后用擠壓制粒機進行β-環(huán)糊精包埋；β-環(huán)糊精與淀粉的質(zhì)量比為O. 09 99.91，β -環(huán)糊精和淀粉的重質(zhì)量是抗菌肽微粒質(zhì)量的12倍；β -環(huán)糊精包埋后得到的抗菌肽緩釋微膠囊的粒徑為I. 8mm 2mm。步驟一中高速勻質(zhì)機的轉(zhuǎn)速為15000r/min。本實施方式制備的抗菌肽緩釋微膠的強度是74. 53，韌性及彈性是62. 52。本實施方式方法制備的抗菌肽緩釋微膠囊抗菌肽包封率為97. 3%，可大規(guī)模產(chǎn)業(yè)
化生產(chǎn)。
具體實施方式
十六本實施方式抗菌肽緩釋微膠囊按以下步驟制備
一、將質(zhì)量濃度為I. 8%的海藻酸鈉水溶液和質(zhì)量濃度為I. 3% (W/V)、脫こ酰度為84%的殼聚糖酸溶液用高速勻質(zhì)機混勻，并調(diào)節(jié)pH值為5. 5，形成緩釋顆粒；ニ、抗菌肽與緩釋顆粒按質(zhì)量比為8 2的比例一同加入醫(yī)用混合機中進行包埋，并調(diào)節(jié)PH值為5. 5，得到抗菌肽微粒，然后對抗菌肽微粒進行β -環(huán)糊精包埋，即得到抗菌肽緩釋微膠囊。步驟一種殼聚糖由分子量為3. 5 X IO5 4. OX IO5的聞分子量殼聚糖和分子量為
I.OOX IO5 I. IOX IO5的低分子量殼聚糖按I : I的質(zhì)量比組成；而且殼聚糖酸溶液中加入葡萄糖，殼聚糖酸溶液中殼聚糖與葡萄糖的摩爾比為O. 7 ；步驟一中殼聚糖酸溶液的溶劑為體積濃度為4%的こ酸；步驟一海藻酸鈉水溶液和殼聚糖酸溶液中海藻酸鈉與殼聚糖質(zhì)量比為4 6 ；
步驟ニ中抗菌肽由低分子量抗菌肽和高分子量抗菌肽按I : 2的質(zhì)量比組成，低分子量抗菌肽的相對分子量為6. 2 17. 2KD,聞分子量抗菌肽的相對分子量為40 50KD ；步驟ニ中β -環(huán)糊精包埋按以下步驟進行向抗菌肽微粒中加入β -環(huán)糊精和淀粉，然后用旋轉(zhuǎn)制粒機進行β-環(huán)糊精包埋；β-環(huán)糊精與淀粉的質(zhì)量比為0.1 99.9，β-環(huán)糊精和淀粉的重質(zhì)量是抗菌肽微粒質(zhì)量的8倍；β -環(huán)糊精包埋后得到的抗菌肽緩釋微膠囊的粒徑為I. 4mm I. 8mm。步驟一中高速勻質(zhì)機的轉(zhuǎn)速為18000r/min。本實施方式制備的抗菌肽緩釋微膠的強度是76. 58，韌性及彈性是59. 02。本實施方式方法制備的抗菌肽緩釋微膠囊抗菌肽包封率為97. 3%，可大規(guī)模產(chǎn)業(yè)
化生產(chǎn)。
權(quán)利要求
1.抗菌肽緩釋微膠囊的制備方法，其特征在于抗菌肽緩釋微膠囊按以下步驟制備 一、將海藻酸鈉水溶液和殼聚糖酸溶液用高速勻質(zhì)機混勻，形成緩釋顆粒； ニ、將抗菌肽和緩釋顆粒一同加入醫(yī)用混合機中進行包埋，得到抗菌肽微粒，然后對抗菌肽微粒進行β -環(huán)糊精包埋，即得到抗菌肽緩釋微膠囊。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的抗菌肽緩釋微膠囊的制備方法，其特征在于步驟一中殼聚糖酸溶液中殼聚糖質(zhì)量濃度為0.25% (W/V) I. 5% (W/V)、脫こ酰度為82% 85%，殼聚糖由分子量為3. 3 X IO5 4. 6 X IO5的高分子量殼聚糖和分子量為O. 72 X IO5 I. 19 X IO5的低分子量殼聚糖按I : I的質(zhì)量比組成；而且殼聚糖酸溶液中加入葡萄糖，殼聚糖酸溶液中殼聚糖與葡萄糖的摩爾比為O. 3 O. 8。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗菌肽緩釋微膠囊的制備方法，其特征在于步驟一海藻酸鈉水溶液中海藻酸鈉的質(zhì)量濃度為I. 5% 2. O %。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的抗菌肽緩釋微膠囊的制備方法，其特征在于步驟一海藻酸鈉水溶液與殼聚糖酸溶液混勻過程中調(diào)節(jié)pH值為5. 2 5. 7。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗菌肽緩釋微膠囊的制備方法，其特征在于步驟一海藻酸鈉水溶液和殼聚糖酸溶液中海藻酸鈉與殼聚糖質(zhì)量比為4 6。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗菌肽緩釋微膠囊的制備方法，其特征在于步驟一形成的緩釋顆粒的粒徑為O. 35 O. 65mm，烘干后的粒徑為O. I O. 2mm。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗菌肽緩釋微膠囊的制備方法，其特征在于步驟ニ中抗菌肽與緩釋顆粒的質(zhì)量比為(3. 3 8. 6) (2 4)，抗菌肽由低分子量抗菌肽和高分子量抗菌肽按I : 2的質(zhì)量比組成,低分子量抗菌肽的相對分子量為6. 2 17. 2KD ;聞分子量抗菌肽的相對分子量為40 50KD。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的抗菌肽緩釋微膠囊的制備方法，其特征在于步驟ニ中β-環(huán)糊精包埋按以下步驟進行向抗菌肽微粒中加入β_環(huán)糊精和淀粉，然后用擠壓制粒機或旋轉(zhuǎn)制粒機進行β -環(huán)糊精包埋；β -環(huán)糊精與淀粉的質(zhì)量比為(O. 05 O. I) (99. 95 99. 9)，β -環(huán)糊精和淀粉的重質(zhì)量是抗菌肽微粒質(zhì)量的6. 9 17. 2倍；β -環(huán)糊精包埋后得到的抗菌肽緩釋微膠囊的粒徑為I. 2 3mm。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的抗菌肽緩釋微膠囊的制備方法，其特征在于步驟ニ中抗菌肽微粒的粒徑為O. 35 O. 65mm。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的抗菌肽緩釋微膠囊的制備方法，其特征在于步驟一中殼聚糖酸溶液的溶劑為體積濃度為O. 1% 5%的有機酸或無機酸。
全文摘要
一種抗菌肽緩釋微膠囊的制備方法，它涉及一種微膠囊的制備方法。本發(fā)明解決了現(xiàn)有殼聚糖/海藻酸鈉微膠囊制備方式只適合于實驗室或小規(guī)模生產(chǎn)，難以形成產(chǎn)業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)和現(xiàn)有抗菌肽也缺乏有效地緩釋包膜的問題。制備方法一、將海藻酸鈉水溶液和殼聚糖酸溶液用高速勻質(zhì)機混勻，形成緩釋顆粒；二、將抗菌肽和緩釋顆粒一同加入醫(yī)用混合機中進行包埋，得到抗菌肽微粒，然后對抗菌肽微粒進行β-環(huán)糊精包埋，即得到抗菌肽緩釋微膠囊。本發(fā)明可用于抗菌肽藥物的生產(chǎn)，在醫(yī)藥領(lǐng)域具有極大的發(fā)展空間。
文檔編號A61K9/50GK102824332SQ201210341909
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月14日
發(fā)明者曲琪環(huán) 申請人:東北農(nóng)業(yè)大學