專利名稱：用固定化溶劑或固定化溶劑－去污劑滅活病毒的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用固定化有機(jī)溶劑(Solvant，以下簡(jiǎn)稱S)和/或去污劑(Detergent，以下簡(jiǎn)稱D)在水溶液中滅活病毒的方法。
然而，使用該方法對(duì)水溶液進(jìn)行病毒滅活雖可有效滅活模式病毒，但某些目標(biāo)產(chǎn)品的生物活性的損失也較為嚴(yán)重，需要使用大劑量的穩(wěn)定劑，使得在滅病毒后往往必須設(shè)置一個(gè)超濾工序來(lái)控制穩(wěn)定劑的量。因此，該方法不能設(shè)置在生產(chǎn)線終端(除白蛋白外)，不能解決二次污染的問(wèn)題。在產(chǎn)品活性損失及專門設(shè)置一道去穩(wěn)定劑工藝的情況下，工藝成本增加較大。2、SD滅病毒法SD(Solvant-Detergent)處理是目前世界上應(yīng)用最廣泛的病毒滅活方法之一，該方法是將液態(tài)SD劑或SD劑的水溶液加入到水溶液中進(jìn)行病毒滅活反應(yīng)。該方法首先在凝血因子(FVIII、FIX等)的病毒滅活方面顯示了強(qiáng)大的效率。自二十世紀(jì)九十年代初開始，SD法已用于工業(yè)規(guī)模的滅病毒血漿的生產(chǎn)，而且該方法還可廣泛用于其它生物制品的病毒滅活。
然而，SD法的滅病毒譜受到限制，其只對(duì)脂包膜病毒的滅活有效，對(duì)非脂包膜病毒則無(wú)能為力。其次，該方法的應(yīng)用須由一個(gè)SD劑去除工藝相隨，不能設(shè)置在生產(chǎn)線終端，因而不能解決二次污染問(wèn)題。由于要增設(shè)一個(gè)或二個(gè)專門用于去除SD劑的工藝措施，也增加了工藝成本。3、低pH法利用病毒分子與待制備的制品分子在酸性介質(zhì)中的穩(wěn)定性差異，使可能存在的病毒大分子(酸穩(wěn)定性較差的病毒大分子)失活。但該方法主要對(duì)脂包膜病毒有效，且由于是在酸性介質(zhì)中進(jìn)行，該方法對(duì)其他生物制劑的副作用較大，因而主要用于免疫球蛋白的病毒滅活。對(duì)pH敏感的產(chǎn)品，該方法不適用。4、膜過(guò)濾法利用病毒分子與待制備的制品分子在流體力學(xué)尺寸上的差異，使可能存在的病毒大分子從制品中分離出來(lái)。但該方法主要作為一種補(bǔ)充性的病毒滅活處理方法，用于加強(qiáng)分子尺寸較小的蛋白制劑的病毒安全性，而且生產(chǎn)成本非常高。5、光動(dòng)力學(xué)法以單原子氧作為活性基礎(chǔ)的光動(dòng)力學(xué)法，是目前滅病毒血漿生產(chǎn)中研究得最多的方法之一。由于該方法可以作為生產(chǎn)終端，有可能解決二次污染。在光動(dòng)力學(xué)滅活病毒處理中，本發(fā)明的發(fā)明人之一在1998年申請(qǐng)的一項(xiàng)中國(guó)專利(專利公開號(hào)CN1224657A)中公開了一種病毒滅活的方法，其中用濃度為2-200mM的單一水溶性萘類過(guò)氧化物或它們的混合物在15～80℃下與待處理的生物制劑接觸5～200分鐘。該方法需要特別光源系統(tǒng)，使其廣泛應(yīng)用受到限制。
在目前條件下，開發(fā)一種操作簡(jiǎn)單、連續(xù)、成本低廉、安全可靠的病毒滅活方法，仍是科學(xué)技術(shù)追求的目標(biāo)。
根據(jù)本發(fā)明所提供的病毒滅活方法是SD病毒滅活方法的改進(jìn)，其特征在于SD劑固定在載體上。
所述載體的活性物質(zhì)為活性炭或二氧化硅，其可為顆粒狀、纖維狀、氈狀或?yàn)V板狀。而溶劑或溶劑—去污劑是通過(guò)物理或化學(xué)作用固定于所述載體上的。
本發(fā)明的方法用于通過(guò)注射或口服而最終與人體接觸的水溶液。該水溶液包括但不限于血漿及血漿衍生物、生物制品、天然植物制品。
在我們申請(qǐng)的一項(xiàng)中國(guó)專利(題目為“作為新型解吸劑的表面活性劑及其活性炭解吸方法”，專利申請(qǐng)?zhí)枮?0120625.7)中，我們發(fā)現(xiàn)活性炭對(duì)去污劑有吸附作用。在我們已經(jīng)申請(qǐng)的另一項(xiàng)中國(guó)專利(題目為“一種除去作為病毒滅活劑的有機(jī)溶劑和/或去污劑的方法”，專利申請(qǐng)?zhí)枮?1104343.1)中，我們發(fā)明了利用含活性炭的活性物質(zhì)進(jìn)行SD劑去除的方法。盡管因此使得除SD劑的工藝成本大為下降，但對(duì)滅病毒反應(yīng)本身并未觸及。隨著我們研究的深入，我們發(fā)現(xiàn)，使用固定化SD進(jìn)行滅病毒處理，可有效地降低滅病毒反應(yīng)時(shí)間，提高生產(chǎn)過(guò)程的連續(xù)性，減少除SD劑的工藝投入。
雖然不想囿于任何理論的限制，但我們認(rèn)為當(dāng)可能含有脂胞膜病毒的流體介質(zhì)由含有SD的固相載體的反應(yīng)器中通過(guò)時(shí)，病毒分子與SD分子發(fā)生反應(yīng)，使病毒分子結(jié)構(gòu)受損，并由此使病毒分子失活。如果從反應(yīng)介質(zhì)流出的流體介質(zhì)中的SD分子濃度超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)，還可在反應(yīng)器中加設(shè)一個(gè)吸附SD劑的固相載體，以除去足夠量的SD劑，滿足SD劑的殘留標(biāo)準(zhǔn)。
在本發(fā)明的方法中，用于滅活病毒的SD劑可物理或者化學(xué)性地固定在合適的載體上，優(yōu)選通過(guò)物理方法進(jìn)行固定。所述載體的活性物質(zhì)包括但不限于活性炭和二氧化硅。其中活性炭例如是活性炭粉、活性炭濾板、活性炭纖維、或活性炭纖維氈的形式，而二氧化硅例如可以是Aerosil或含Aerosil的濾板的形式。
對(duì)于本發(fā)明中的有機(jī)溶劑S，本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何溶劑都是合適的，其包括但不限于在水溶液病毒滅活中常用的TNbP(三正丁基磷酸酯)。
對(duì)于本發(fā)明中的去污劑D，本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何去污劑都是合適的，其包括但不限于在水溶液病毒滅活中常用的吐溫類去污劑(例如Tween-80)和Triton類去污劑(例如Triton×100)。
可用本發(fā)明的方法滅活的病毒一般是指脂包膜病毒，其包括但不限于愛滋病病毒、乙肝病毒、丙肝病毒以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它脂包膜肝炎病毒等。
可用本發(fā)明的方法進(jìn)行處理的水溶液包括但不限于水、血漿及血漿衍生物、生物制品、藥物、保鍵用品等。
本發(fā)明的方法的實(shí)施條件沒有具體的限制，但一般情況下pH為2.0-12.0，溫度為-5至60℃，而流體動(dòng)力學(xué)條件(流速、壓力)則可根據(jù)病毒滅活驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)來(lái)確定。實(shí)施例1固定化SD的制備用以下預(yù)先制好的材料進(jìn)行本實(shí)施例的實(shí)施1)活性炭濾板(例如AKS4或AKS5，德國(guó)Seitz Schenk公司)，2)活性炭氈(例如ZC-1200A，中國(guó)紫川炭纖維有限公司)和3)含Aerosil的除脂濾板(例如Delipid，美國(guó)CUNO公司)。這些材料首先被制成為直徑6cm、厚度4.2mm的濾器。將TNbP/Triton×100調(diào)配成1％(V/V)的水溶液。然后使此流動(dòng)相在室溫以下以5ml/min的流速分別通過(guò)上述固定相，并在相同條件下反復(fù)循環(huán)40分鐘。S或SD在不同材料上的固定化量可通過(guò)調(diào)節(jié)加入該水溶液的用作脫吸劑的表面活性劑的劑量來(lái)控制(參考我們的另一份題目為“作為新型解吸劑的表面活性劑及其活性炭解吸方法”的發(fā)明，其專利申請(qǐng)?zhí)枮?0120625.7)。具體實(shí)驗(yàn)條件及結(jié)果見以下表1所示。
表1SD劑在固定載體相上的吸附
實(shí)施例2固定化SD劑的制備在制備活性炭板、活性纖維氈及Delipid濾板的過(guò)程中，在成型烘干前即將SD劑加入到原材料混合物中進(jìn)行混合。在此情況下，SD劑將定量地吸附在活性炭粉或Aerosil顆粒等物質(zhì)上，再經(jīng)濾板、纖維氈的正常制備工藝，即獲得固定化SD劑。其關(guān)鍵的實(shí)驗(yàn)參數(shù)與實(shí)驗(yàn)結(jié)果見以下表2所示表2SD固定相的制備條件及結(jié)果
注所有的計(jì)量均是以每立方米濾板所含或釋出的量為標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施例3人丙種球蛋白的病毒滅活150ml含有模式病毒(HIV初始滴度為104.2，VSV初始滴度104.8，sindbis病毒初始滴度105.1)的人丙種球蛋白(蛋白含量8％，pH4.5)溶液，在流速為100-300Lm-2、壓力≤1bar的條件下分別通過(guò)A)含1.81％(V/V)TNbP的活性炭濾板(厚度4.2mm，直徑6cm)；B)含1.58％(V/V)TNbP和1.77％(V/V)Triton×100(V/V)的除脂濾板(厚度4.2mm，直徑6cm)；C)含1.79％(V/V)TNBP和1.66％(V/V)Triton×100的活性炭/硅藻土混合物(混合物重量比為50/50，反應(yīng)器厚度為4.2mm，直徑6cm)。每一個(gè)固定化SD裝置后接一個(gè)活性炭濾器(厚度4.2mm，直徑6cm，AKS4，德Seitz Schenk公司)。所得的濾液收集后作進(jìn)一步的分析，其結(jié)果見表3和4所示。
表3模式病毒的滅活
表4人丙種球蛋白的分析
*稀釋效應(yīng)此外，三種反應(yīng)器濾液中TNBP的含量均小于5ppm。實(shí)施例4全血漿的病毒滅活150ml含有以下表5所列的模式病毒的人全血漿(蛋白含5.7％，pH7.85)，在流速為100-300LM-2，壓力≤1bar的條件下先后通過(guò)經(jīng)生理鹽水平衡的含1.79％(V/V)TNbP和1.66％(V/V)Triton×100的活性炭濾板(同實(shí)施例3)及另一不含SD劑的活性炭濾板(厚度4.2mm，直徑6cm，AKS4，德國(guó)Seitz Schenk公司)，所得濾液在收集后作進(jìn)一步的分析，其結(jié)果見表5和6所示。
表5模式病毒的滅活
表6經(jīng)過(guò)濾血漿的分析結(jié)果
實(shí)施例5基因工程蛋白質(zhì)反應(yīng)的病毒滅活含有以下表7所列的模式病毒的重組Alpha干擾素(干擾素濃度115萬(wàn)IU/ml，pH7.0)在流速為1ml/min條件下重復(fù)實(shí)施例4的步驟，但僅使用固定有SD劑的活性炭濾板，上清液收集后作進(jìn)一步的分析，其結(jié)果見以下表7所示。
表7重組干擾素中的病毒滅活
權(quán)利要求
1.用溶劑或溶劑—去污劑滅活病毒的方法，其特征在于所述溶劑和/或溶劑—去污劑固定在載體上。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述載體是由作為活性物質(zhì)的活性炭或二氧化硅制成的。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述載體為顆粒狀、纖維狀、氈狀或?yàn)V板狀。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述溶劑或溶劑—去污劑是通過(guò)物理或化學(xué)作用固定于所述載體上的。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其是用于通過(guò)注射或口服而最終與人體接觸的水溶液。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述水溶液包括血漿及血漿衍生物、生物制品、天然植物制品。
全文摘要
本發(fā)明涉及用溶劑或溶劑－去污劑滅活病毒的方法，其特征在于所述溶劑和/或溶劑－去污劑固定在載體上。所述載體是由作為活性物質(zhì)的活性炭或二氧化硅制成的。本發(fā)明的方法可簡(jiǎn)單并連續(xù)地操作，而且成本低廉、安全可靠。
文檔編號(hào)A61L2/16GK1402974SQ01123658
公開日2003年3月19日 申請(qǐng)日期2001年8月30日 優(yōu)先權(quán)日2001年8月30日
發(fā)明者鄒方霖, 王健霞 申請(qǐng)人:成都夸?？萍加邢薰?br>