專利名稱：：一種用于治療骨性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及治療骨性關(guān)節(jié)鹽的藥物組合物，具體涉及由鹽酸氨基葡萄糖、硫酸軟骨素、透明質(zhì)酸鈉組成的用于治療骨性關(guān)節(jié)炎的組合物。
背景技術(shù)：
：骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis，OA)是一種危害中老年人健康的慢性退行性骨關(guān)節(jié)病。臨床上以膝骨關(guān)節(jié)炎最常見。隨著世界老齡化人口的增加，OA發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)，嚴(yán)重影響中老年人的生活質(zhì)量，其臨床表現(xiàn)為關(guān)節(jié)疼痛、腫脹和功能障礙，主要病理改變?yōu)殛P(guān)節(jié)軟骨退變、軟骨下骨病變以及滑膜的改變，最終導(dǎo)致軟骨基質(zhì)降解、軟骨細(xì)胞死亡和關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)完整性破壞。OA的病因是多方面的，包括增齡、磨損、肥胖以及生化、遺傳等因素，這些因素抑制軟骨基質(zhì)蛋白多糖合成，促進(jìn)蛋白多糖、透明質(zhì)酸和膠原的降解。OA發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，關(guān)節(jié)內(nèi)HA減少和理化性質(zhì)的改變可能是其中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，受累關(guān)節(jié)軟骨表面粗糙和退化，無定形結(jié)構(gòu)層消失，使其屏障作用不存在。在OA退化軟骨中，軟骨基質(zhì)中的蛋白多糖降解增加，使軟骨結(jié)構(gòu)破壞，粘彈性降低，進(jìn)而使軟骨股下邊緣骨質(zhì)增生，滑膜炎性腫脹，同時(shí)，由于滑液中HA濃度和分子量降低，使?jié)櫥偷挚箼C(jī)械力作用的功能產(chǎn)生障礙。透明質(zhì)酸(hyaluronicadd，HA)，又名玻璃酸，是一種獨(dú)特的線性大分子酸性粘多糖，由(l-P-4)D-葡萄糖醛酸(l-p-3)N-乙?；?D-氨基葡萄糖的雙糖單位重復(fù)連接組成。對(duì)不同組織來源的HA進(jìn)行的結(jié)構(gòu)測(cè)定表明，其結(jié)構(gòu)均一致，沒有種屬差異，只存在相對(duì)分子量的不同，范圍為105107，雙糖單位數(shù)為3001100對(duì)。HA廣泛存在于動(dòng)物和人體結(jié)締組織細(xì)胞間質(zhì)中，在眼玻璃體、皮膚、臍帶、軟骨和關(guān)節(jié)滑液中含量較高。透明質(zhì)酸己廣泛用于骨科、眼科和皮膚燒傷科。HA在關(guān)節(jié)中以下列幾種形式存在并發(fā)揮作用①與蛋白質(zhì)結(jié)合成HA的蛋白復(fù)合物游離于關(guān)節(jié)液中，形成高度的粘彈性，對(duì)關(guān)節(jié)軟骨起著減震和潤(rùn)滑等機(jī)械保護(hù)作用；②充填于滑膜細(xì)胞基質(zhì)和滲入軟骨表層的HA對(duì)滑膜細(xì)胞和膠原纖維起著支持和穩(wěn)定作用；③軟骨基質(zhì)內(nèi)的蛋白多糖以聚合體的形式存在，被包繞在膠原纖維間基質(zhì)內(nèi)，維持膠質(zhì)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)充盈且具有高度彈性，而HA賦予軟骨特殊的多孔性和彈性，因此HA與蛋白多糖的相互作用在維持軟骨組織的完整性上起重要作用。氨基葡萄糖是軟骨基質(zhì)的重要組成物質(zhì)。氨基葡萄糖是一種氨基單糖，來源于甲殼動(dòng)物中的加殼素。隨著年齡的增長(zhǎng)，人體中的軟骨合成減少降解增加，軟骨會(huì)逐漸流失，造成人體骨密度的下降，從而引起多種老年性疾病，骨質(zhì)疏松、骨關(guān)節(jié)炎等?？茖W(xué)研究表明，氨基葡萄糖廣泛存在于人和動(dòng)物的軟骨、肌腱和韌帶等組織中，是關(guān)節(jié)軟骨生物合成和刺激合成聚氨基葡萄糖及透明質(zhì)酸骨架的基本物質(zhì)，可促進(jìn)人體軟骨的合成，增加關(guān)節(jié)韌帶及彈性，改善關(guān)節(jié)活動(dòng)。適量補(bǔ)充氨基葡萄糖，可減少軟骨的流失?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)證實(shí)，骨關(guān)節(jié)炎等退行性關(guān)節(jié)疾病會(huì)影響膝、手、脊柱和股骨的功能，而氨基葡萄糖具有軟骨保護(hù)和修復(fù)作用，且補(bǔ)充這類物質(zhì)巳在國(guó)外應(yīng)用多年，幾乎沒有不良反應(yīng)。硫酸軟骨素來源于動(dòng)物組織，是一類硫酸糖胺聚糖，由糖醛酸和葡萄糖胺以糖苷鍵鏈接起來的重復(fù)二糖單位組成的多糖鏈的混合物，由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰-D-氨基半乳糖組成的二糖單位多糖，其中由于硫酸基團(tuán)位置不同，構(gòu)成硫酸軟骨素A、C、D、E、F、和N等多種異構(gòu)體，由艾杜糖醛酸和N-乙酰-D-氨基半乳糖硫酸酯組成的二糖單位的多糖稱為硫酸軟骨素B，又稱為硫酸皮膚素。硫酸軟骨素分子量在2,000-50,000道爾頓之間，目前上市的產(chǎn)品為硫酸軟骨素鈉或硫酸軟骨素鈣的注射液、口服制劑和滴眼液。硫酸軟骨素主要通過以下兩個(gè)機(jī)制發(fā)揮對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎的治療效果(1)能夠競(jìng)爭(zhēng)性抑制降解酶的活性，減少軟骨基質(zhì)和關(guān)節(jié)滑液成分的破壞；(2)減少纖維蛋白血栓的形成，改善滑膜和軟骨下骨的血液循環(huán)。生理情況下，血小板分泌硫酸軟骨素和肝素來平衡血栓形成的傾向，隨著年齡的增長(zhǎng)，硫酸軟骨素的產(chǎn)量減少，被具較少活性的硫酸角質(zhì)素取代，從而容易形成血栓堵塞血管，加重股關(guān)節(jié)炎病情。透明質(zhì)酸、氨基葡萄糖、硫酸軟骨素作為軟骨基質(zhì)的基本組成成分，目前都有用來治療股關(guān)節(jié)病，尤其是透明質(zhì)酸應(yīng)用最為廣泛，但透明質(zhì)酸在治療骨性關(guān)節(jié)炎時(shí)，只能起到臨時(shí)減輕關(guān)節(jié)壓力，此時(shí)若加大運(yùn)動(dòng)，反倒會(huì)加重病情。因此也有發(fā)明者想到將透明質(zhì)酸其它藥物合用用來治療骨性關(guān)節(jié)炎。中國(guó)專利CN1714799A公開了將鹽酸氨基葡萄糖和透明質(zhì)酸鈉組合用來治療骨性關(guān)節(jié)炎，國(guó)際申請(qǐng)PCT/EP2002/012703公開了將透明質(zhì)酸鈉和硫酸軟骨素組合來治療骨關(guān)節(jié)炎中的軟骨損傷癥狀，中國(guó)專利申請(qǐng)CN1817348A公開了將鹽酸氨基葡萄糖和硫酸軟骨素組合用來治療關(guān)節(jié)損傷性疾病，發(fā)現(xiàn)將任何兩種組合在一起使用，均較單一用透明質(zhì)酸鈉、硫酸軟骨素或鹽酸氨基葡萄糖來治療骨性關(guān)節(jié)炎強(qiáng)。但還沒有將三者結(jié)合在一起來治療骨性關(guān)節(jié)炎的研究。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明人在骨關(guān)節(jié)病致病機(jī)理的理論基礎(chǔ)的指導(dǎo)下，將鹽酸氨基葡萄糖、透明質(zhì)酸鈉、硫酸軟骨素組合在一起用于治療骨性關(guān)節(jié)炎，氨基葡萄糖為合成體內(nèi)透明質(zhì)酸、硫酸軟骨素的基本單元；透明質(zhì)酸可以緩解骨關(guān)節(jié)炎患者的關(guān)節(jié)壓力；硫酸軟骨素能抑制蛋白水解酶和溶酶體酶，三者組合在一起，即可在外源上補(bǔ)充軟骨基質(zhì)的基本成分，而由于鹽酸氨基葡萄糖的加入，又可剌激機(jī)體自身合成內(nèi)源性軟骨基質(zhì)，如透明質(zhì)酸和硫酸軟骨素，且還能抑制一些水解酶破壞軟骨基質(zhì)成分，三者合用，起到了令人鼓舞的效果，組合在一起后，可更好的起到預(yù)防和治療骨性關(guān)節(jié)炎的效果。本發(fā)明在實(shí)驗(yàn)人員的努力下，通過大量的試驗(yàn)篩選，從中找出三者的合理組方配比。本發(fā)明中，包括下述原料藥氨基葡萄糖或其可藥用鹽、硫酸軟骨素或其可藥用鹽、透明質(zhì)酸或其可藥用鹽，三者的重量組分為氨基葡萄糖或其可藥用鹽5~10重量份，硫酸軟骨素或其可藥用鹽510重量份，透明質(zhì)酸或其可藥用鹽14重量份。優(yōu)選氨基葡萄糖或其可藥用鹽5重量份，硫酸軟骨素3重量份，透明質(zhì)酸或其可藥用鹽2重量份。本發(fā)明中的氨基葡萄糖可以是N-乙酰氨基葡萄糖，其藥用鹽主要為鹽酸氨基葡萄糖和硫酸氨基葡萄糖。本發(fā)明中硫酸軟骨素的可藥用鹽主要是其金屬鹽，優(yōu)選硫酸軟骨素鈉和硫酸軟骨素鈣。本發(fā)明中透明質(zhì)酸的可藥用鹽為其金屬鹽，優(yōu)選透明質(zhì)酸鈉。本發(fā)明組方中，三種原料藥優(yōu)選鹽酸氨基葡萄糖、硫酸軟骨素鈉和透明質(zhì)酸鈉，三者重量配比優(yōu)選為鹽酸氨基葡萄糖10份、硫酸軟骨素鈉6份、透明質(zhì)酸鈉2.5份。本發(fā)明所用的劑型主要是口服制劑，優(yōu)選片劑、膠囊劑。片劑可以是素片、糖衣片、腸衣片、泡騰片、咀嚼片、舌下含片。膠囊可以是硬膠囊劑、軟膠囊劑。本發(fā)明除主藥外，還有制藥可接受的輔料，這些輔料包括潤(rùn)滑劑、稀釋劑、助流劑、填充劑、乳化劑、防腐劑、増溶劑等。本發(fā)明膠囊劑工藝鹽酸氨基葡萄糖50g硫酸軟骨素鈉30g透明質(zhì)酸鈉12.5g淀粉312.5g將上述主藥和輔料淀粉混合均勻，裝入1000個(gè)硬膠囊中，每個(gè)膠囊裝0.4g，既得本發(fā)明硬膠囊劑。將上述鹽酸氨基葡萄糖換成硫酸氨基葡萄糖或N-乙酰氨基葡萄糖，硫酸軟骨素鈉換成硫酸軟骨素、透明質(zhì)酸鈉換成透明質(zhì)酸，即為本發(fā)明其它原料藥膠囊劑處方工藝。此膠囊劑即可作為藥品使用，也可作為保健食品使用。本發(fā)明藥物組合物可以用于制備具有治療和預(yù)防骨性關(guān)節(jié)炎疾病的藥物，也可以用于制備具有預(yù)防骨性關(guān)節(jié)炎的保健食品。具體實(shí)施例以下實(shí)施例均從表1的配方中比較，固定鹽酸氨基葡萄糖與透明質(zhì)酸鈉比例為4:1。表l本發(fā)明原料藥重量配方<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實(shí)施例l本發(fā)明對(duì)硝普納所致軟骨細(xì)胞調(diào)亡的影響試劑及藥品II型膠原酶、胰蛋白酶、二甲基亞砜、四氮唑藍(lán)(MTT)、甲苯胺染色劑、DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清、硝普納(SNP)動(dòng)物23日齡清潔級(jí)新西蘭兔用于細(xì)胞培養(yǎng)體外兔軟骨細(xì)胞的制備、培養(yǎng)和鑒定取初生新西蘭兔，處死后酒精消毒，無菌條件下在超凈工作臺(tái)切取幼兔四肢，分離肩、肘、膝關(guān)節(jié)周圍肌肉、關(guān)節(jié)囊等組織，切取未骨化的軟骨組織，放入培養(yǎng)皿，加少許10。/。FBSDMEM培養(yǎng)液，用眼科剪剪碎成lmmxlmm，室溫下離心(1500r/min)5min。除上清后將軟骨組織移入燒瓶，加入消化液(0.1%11型膠原酶，0.25%胰酶)，37"C連續(xù)消化3h，消化后將細(xì)胞懸液用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾，離心(1600/min)5min。棄上清液，分別接種于培養(yǎng)瓶和6孔培養(yǎng)板中，置于37t:、5%<302培養(yǎng)箱培養(yǎng)，用于實(shí)驗(yàn)的為第23代的傳代細(xì)胞。用甲苯胺藍(lán)染色鑒定軟骨細(xì)胞的存在。硝普納誘導(dǎo)兔軟骨細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)將10mg硝普納加入lml培養(yǎng)液中，配成C存液，使用前再加培養(yǎng)液配制成所需的終濃度。藥液配制將上述第2~7組組合物10mg各自加入到lml培養(yǎng)液中，分別用培養(yǎng)液稀釋成100ug/ml，在培養(yǎng)體系中分別加入2mmol/LSNP，24小時(shí)后將培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，細(xì)胞數(shù)為1.0xl0V孔。設(shè)7組，每組五個(gè)復(fù)孔，第一組加"培養(yǎng)液+50ng/ml的SNP"，第二至7組加"各自組合物50pg/ml+50ng/ml的SNP"，孵育48小時(shí)后，收集細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)。結(jié)果見表2表2本發(fā)明組合物對(duì)硝普納誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞凋亡的影響__細(xì)胞凋亡率(三士s)(%)培養(yǎng)液+SNP72.7±5.68第二組合物藥液+SNP39.6±2.98*第三組合物藥液+SNP35.7±3.14*第四組合物藥液+SNP37.5±3.01*第五組合物藥液十SNP32.6±2.54*第六組合物藥液+SNP28.6±2.15*第七組合物藥液+SNP_33.7±2.87*_與陰性對(duì)照組(培養(yǎng)液+SNP組)相比*P<0.01從上表結(jié)果可知，六組實(shí)驗(yàn)用藥組均對(duì)硝普納所誘導(dǎo)的兔軟骨細(xì)胞凋亡有一定的抑制作用，與陰性對(duì)照組相比，均具有顯著意義(PO.Ol)，但鹽酸氨基葡萄糖、硫酸軟骨素鈉、透明質(zhì)酸鈉三種原料藥合用時(shí)要比其它任何以兩種形式組合的原料藥效果強(qiáng)，且以鹽酸氨基葡萄糖-硫酸軟骨素鈉-透明質(zhì)酸鈉10:6:2.5時(shí)，對(duì)硝普納所誘導(dǎo)的兔軟骨細(xì)胞凋亡抑制作用最為明顯。實(shí)施例2本發(fā)明組合物對(duì)大鼠白陶土誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重130150g的雌性大鼠70只，隨機(jī)分成7組，分別為對(duì)照組，第二至第七原料藥配比實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組灌胃生理鹽水，實(shí)驗(yàn)組給予劑量為0.2g/kgBW實(shí)驗(yàn)方法灌胃給予受試物，1小時(shí)后，常規(guī)消毒右后肢踝趾關(guān)節(jié)并注射入10%滅菌白陶土生理鹽水懸浮液0.21111，注射后l、3、5天，以容積測(cè)量法測(cè)定左右后肢足跖的體積(ml)。每天給予受試物，5天后，按lml/kgBW的量注射1%伊文思蘭注入尾靜脈，于注射后2h，乙醚麻醉后處死動(dòng)物，剪下右足跖，稱重，然后浸入3ml鹽酸中，與37'C消化18h。消化后，向消化液中加入12%氯節(jié)烷銨4ml，混合并攪動(dòng)30min，再向每份樣品中加入7ml氯仿，并用力振蕩，取氯仿層液體在620nm波長(zhǎng)下比色，測(cè)定光密度。足跖伊文思蘭以pg/mg足跖表示；右跖腫脹度(％)呵右后肢足跖體積(ml)-左后肢足跖體積(ml)]/右后肢足跖體積(ml)xlOO%。結(jié)果見表3表3本發(fā)明組合物對(duì)大鼠白陶土誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎大鼠各時(shí)相足跖腫脹度H劑量(g/kgBW)5天與對(duì)照組相比，*P<0.05，**P<0.01由表3可知，注射白陶土后第5天，與對(duì)照組同時(shí)相足跖腫脹度比較，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中鹽酸氨基葡萄糖-硫酸軟骨素鈉-透明質(zhì)酸鈉為10:6:2.5時(shí)，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義更明顯(PO.Ol)，在注射后第三天時(shí)，鹽酸氨基葡萄糖-硫酸軟骨素鈉-透明質(zhì)酸鈉三種原料藥組合，與對(duì)照組同時(shí)相足跖腫脹度比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而兩種原料藥組合在一起時(shí)，腫脹度要較三中原料藥高，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義不明顯(P>0.05)，三種原料藥組合在一起與任何兩種原料藥的組合相比，各時(shí)相的大鼠足跖腫脹度均要相對(duì)小，說明三種原料藥聯(lián)合在一起使用治療關(guān)節(jié)炎，能起對(duì)照組060.21±6.1465.47±6.2340.32±3.710.258.36±3.5454.34±5.1926.38±3.67*0.258.98±4.4353.75±4.8727.21±3.14*0.258.42±3.7454.18±4.2125.14±3.45*0.257.17±4.2649.76±5.73*20.32±3.64*0.256.76±5.5747.07±5.17*17.89±3.27**0.257.06±3.4248.26±3.89*'19.54±3.83*合厶n合合厶d厶n自經(jīng)經(jīng)§經(jīng)經(jīng)3自自紹經(jīng)s二三四五六七第第第第第第到更好的治療作用。權(quán)利要求1、一種用于治療骨性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物，其特征在于由下列重量比的原料藥組成氨基葡萄糖或其可藥用鹽5～10重量份，硫酸軟骨素或其可藥用鹽5～10重量份，透明質(zhì)酸或其可藥用鹽1～4重量份。2、如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于氨基葡萄糖或其可藥用鹽10重量份，硫酸軟骨素6重量份，透明質(zhì)酸或其可藥用鹽2.5重量份。3、如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述的氨基葡萄糖可藥用鹽主要是指鹽酸氨基葡萄糖或硫酸氨基葡萄糖。4、如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述的硫酸軟骨素可藥用鹽主要是指硫酸軟骨素鈉和硫酸軟骨素鈣。5、如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其中所述的透明質(zhì)酸可藥用鹽是指透明質(zhì)酸的鈉鹽。6、由含有治療有效量的權(quán)利要求1所述的藥物組合物制成的口服制劑。7、如權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物在制備具有治療骨性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。8、如權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物在制備具有預(yù)防和調(diào)節(jié)骨性關(guān)節(jié)病保健食品中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及一種用于治療骨性關(guān)節(jié)炎的藥物組合物，本發(fā)明組合物由鹽酸氨基葡萄糖5-10重量份、硫酸軟骨素鈉5-10重量份、透明質(zhì)酸鈉1-4重量份組成，加于制藥上可接受的藥用輔料，采用常規(guī)的制劑技術(shù)可制成所需的口服劑型。本發(fā)明藥物組合物具有預(yù)防和治療骨關(guān)節(jié)炎的作用，可用于制備具有預(yù)防和治療骨關(guān)節(jié)炎作用的藥物，也可用于具有預(yù)防骨關(guān)節(jié)炎作用的保健食品。文檔編號(hào)A61K31/737GK101181294SQ20071011774公開日2008年5月21日申請(qǐng)日期2007年6月22日優(yōu)先權(quán)日2007年6月22日發(fā)明者張樹祥,熊國(guó)裕申請(qǐng)人:北京星昊醫(yī)藥股份有限公司