專利名稱：酪氨酸和聚合過(guò)敏素的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于過(guò)敏癥患者的脫敏治療的新型組合物。
GB-A-1492973描述了制備一種分散有改性過(guò)敏素的酪氨酸共沉淀物的方法。該過(guò)敏素已用一種試劑(例如戊二醛)處理而改性，使內(nèi)部分子交聯(lián)并且相對(duì)于未改性的過(guò)敏素降低了產(chǎn)物的過(guò)敏性。
EP-A-0367306和Nakada等人(Allergy，54437 et seq.)描述了制備聚合的過(guò)敏素的方法。這些方法是延長(zhǎng)用交聯(lián)劑處理時(shí)間從而使分子間交聯(lián)，接著過(guò)濾或滲析除去未聚合的產(chǎn)物。該聚合的過(guò)敏素具有低過(guò)敏性。
本發(fā)明提供一種含有酪氨酸和聚合過(guò)敏素的藥物組合物。該過(guò)敏素通常用酪氨酸包衣或吸附在酪氨酸上，例如用共沉淀方法。
該過(guò)敏素可以從任何引起過(guò)敏的物質(zhì)衍生，例如從花粉(如豚草屬或樺屬花粉)、食物、昆蟲毒液、霉菌，動(dòng)物皮毛，或室內(nèi)灰塵小蟲(D.farnae或屋塵螨(D.pteronyssinus))。該過(guò)敏素特別是從D.pteronyssinus衍生的。這里所說(shuō)的“過(guò)敏素”包括可以是單一來(lái)源或多于一種來(lái)源的過(guò)敏素混合物。
本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了制備本發(fā)明藥物組合物的方法，該方法包括(a)將過(guò)敏素聚合，(b)將該過(guò)敏素的含水溶液與在含水強(qiáng)酸中的酪氨酸溶液混合，(c)將該溶液混合物中和，由此而使酪氨酸和聚合過(guò)敏素共沉淀，和(d)任選地將該產(chǎn)物與生理可接受的載體混合。
合適的生理可接受的載體包括苯酚鹽水和無(wú)菌水。
通過(guò)在pH3-10，一般7±1，和0-100℃，一般4-37℃的溫度下，用二醛(例如戊二醛)處理長(zhǎng)達(dá)10小時(shí)，例如在室溫下處理約2小時(shí)，將該過(guò)敏素聚合。過(guò)敏素與戊二醛的比例一般是在1∶25-1∶2的范圍，例如約1∶4(重量/重量)，但用更長(zhǎng)的反應(yīng)時(shí)間可以使用更高的過(guò)敏素比例(例如見EP-A-0367306)，該文獻(xiàn)使用了約3∶1的比例和反應(yīng)時(shí)間為約7小時(shí))。
然后通過(guò)凝膠過(guò)濾或滲析，例如切向流滲析，除去低分子量產(chǎn)物。該產(chǎn)物冷凍干燥或直接用于下一階段。分子量一般限在至少100千道爾頓，例如至少250千道爾頓，更優(yōu)選300千道爾頓。
然后，將聚合過(guò)程中作為反應(yīng)混合物得到的或者從固體的溶劑化得到的pH為7±1的聚合過(guò)敏素溶液與在含水強(qiáng)酸中的酪氨酸溶液混合。該強(qiáng)酸通常是無(wú)機(jī)酸，優(yōu)選鹽酸。在該步驟使用的聚合過(guò)敏素溶液一般含有0.1μg/ml-100μg/ml的過(guò)敏素蛋白。在該混合物中過(guò)敏素∶酪氨酸的比例一般在1∶4×105-1∶4×102的范圍(重量/重量)。
中和所得到的過(guò)敏素和酪氨酸溶液的混合物。“中和”是指將pH調(diào)節(jié)到4.0-7.5的范圍內(nèi)。重要的是，在中和期間，該溶液的pH任何時(shí)間都不能或至少在很長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)不能明顯地升高到7.5以上。通過(guò)劇烈地?cái)嚢柙撊芤海⑷绻枰?，通過(guò)僅使用所需要量的堿可以滿足這一條件?？梢詫⒏鞣N緩沖劑有效地加入到過(guò)敏素溶液中，以便有助于在混合和中和階段控制pH。
進(jìn)行中和的特別有用的方法是使在酸中的酪氨酸溶液和中和堿液流分開流進(jìn)過(guò)敏素的溶液中。用pH控制加入液流的速度，即由一個(gè)設(shè)備調(diào)節(jié)一個(gè)或兩個(gè)溶液的流量，致使反應(yīng)混合物的pH基本上恒定在預(yù)定量上。我們發(fā)現(xiàn)，通過(guò)將pH控制在6.5-7.5的范圍內(nèi)通常得到最佳結(jié)果，盡管精確的pH可以根據(jù)過(guò)敏素的性質(zhì)而變化。
中和的結(jié)果是在酪氨酸內(nèi)夾雜和/或在酪氨酸上吸附的過(guò)敏素溶液立即發(fā)生沉淀。沉淀后，或者立即洗滌該混合物，或者在洗滌前讓其靜置幾小時(shí)-1或2天的時(shí)間。最好是得到盡可能細(xì)的沉淀物，這可以通過(guò)配合劇烈攪拌和快速中和該溶液來(lái)實(shí)現(xiàn)。
在將其再懸浮在生理可接受的載體例如苯酚鹽水或無(wú)菌水中從而生產(chǎn)適用于脫敏治療的可注射的組合物之前，通過(guò)離心分離或過(guò)濾和洗滌(例如用苯酚鹽水)，可以從溶液中分離出所得到的沉淀。
下面的實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明。
實(shí)施例將已經(jīng)通過(guò)滲析或分餾而部分純化的約2.5mg/ml的D.pteronyssinus提取蛋白的中性溶液通過(guò)加入等體積的1％(w/v)戊二醛并在室溫?cái)嚢柙摶旌衔锛s2小時(shí)使其聚合。該反應(yīng)通過(guò)加入等體積的2％(w/v)甘氨酸并在室溫下將該混合物再攪拌1小時(shí)而使反應(yīng)停止。通過(guò)能排除300千道爾頓分子量的膜滲析過(guò)濾除去低分子量物質(zhì)。然后將該混合物過(guò)濾滅菌和冷凍干燥。
或者直接從滅菌過(guò)濾的溶液，或者通過(guò)該冷凍干燥的固體，重新配制該聚合過(guò)敏素溶液。在pH7±1的磷酸鹽緩沖劑中該溶液含有10μg/ml。在劇烈攪拌下同時(shí)將1體積在HCl中的L-酪氨酸(通過(guò)將24g的L-酪氨酸用3.4M HCl溶解到100ML制備)和1體積的3.2M NaOH加入到4體積的過(guò)敏素溶液中，使該過(guò)敏素溶液與酪氨酸共沉淀。這樣形成懸浮液，離心分離、用緩沖鹽水重復(fù)地洗滌，以便除去雜質(zhì)并再懸浮于開始體積的pH6±1的緩沖鹽水中。
權(quán)利要求
1.一種含有酪氨酸和聚合過(guò)敏素的藥物組合物。
2.按照權(quán)利要求1的組合物，其中該過(guò)敏素用酪氨酸包衣和/或被吸附在酪氨酸上。
3.按照權(quán)利要求1或2的組合物，其中該過(guò)敏素是從屋塵螨衍生的。
4.一種制備前述任一權(quán)利要求的藥物組合物的方法，該方法包括(a)將過(guò)敏素聚合，(b)將該過(guò)敏素的含水溶液與在含水強(qiáng)酸中的酪氨酸溶液混合，(c)將該溶液混合物中和，由此而使酪氨酸和聚合過(guò)敏素共沉淀，和(d)任選地將該產(chǎn)物與生理可接受的載體混合。
5.用于治療的權(quán)利要求1-3中任一權(quán)利要求的組合物。
6.按照權(quán)利要求1-3中任一權(quán)利要求的組合物，用于過(guò)敏癥患者的脫敏治療。
7.權(quán)利要求1-3中任一權(quán)利要求的組合物在制備用于過(guò)敏癥患者脫敏治療的藥物中的用途。
全文摘要
一種含有酪氨酸和聚合過(guò)敏素的藥物組合物。該組合物通過(guò)以下步驟制備:(a)將過(guò)敏素聚合,(b)將該過(guò)敏素的含水溶液與在含水強(qiáng)酸中的酪氨酸溶液混合,(c)將該溶液混合物中和,由此而使酪氨酸和聚合過(guò)敏素共沉淀,和(d)任選地將該產(chǎn)物與生理可接受的載體混合。
文檔編號(hào)A61P37/08GK1183046SQ96193592
公開日1998年5月27日 申請(qǐng)日期1996年4月25日 優(yōu)先權(quán)日1995年4月29日
發(fā)明者艾倫·W·惠勒, 伊恩·泰勒 申請(qǐng)人:史密斯克萊·比奇曼公司