專利名稱：：長春花及其提取物在制備抗艾滋病藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種藥用植物新的醫(yī)療用途，尤其是長春花及其提取物在制備抗艾滋病藥物中的用途，屬于中藥、天然藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：長春花(C"A"raW/n^ra^w)是夾竹桃科長春花屬植物。長春花藥用全草，具有鎮(zhèn)靜安神、平肝降壓之功效，可用于治療高血壓、白血病、肺癌、胃癌、子宮癌等多種惡性腫瘤。目前，己經(jīng)從長春花植物中分離出100余種生物堿，其中已正式用于臨床的有長春堿和長春新堿，衍生物有硫酸長春地辛和酒石酸長春瑞濱(《中華人民共和國藥典》(二部)，2005年版)。至今文獻報道多為長春花生物堿在治療癌癥等方面的研究和應(yīng)用(《天然產(chǎn)物研究與開發(fā)》，2006，18:325;《中國醫(yī)藥工業(yè)雜志》，2005，36:424)，公開專利"從長春花中提取抗癌活性成分的工藝"(專利ZL01131987.9)涉及長春堿等抗癌成分提取新工藝，"長春花生物堿及其鹽的應(yīng)用"(申請?zhí)朜0.200480016059.4)涉及長春花生物堿誘導(dǎo)胰臟產(chǎn)生胰島素等。艾滋病是一種獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)，目前尚無有效的治療手段，臨床用藥從單一藥物治療過渡到多藥聯(lián)合化療，但是,這些治療僅能延長生命而不能根除病毒,伴隨治療產(chǎn)生的許多毒副作用如肝功能衰竭和糖尿病等，使得患者的免疫系統(tǒng)受到損害。目前從天然藥物中尋找抗AIDS疾病藥物是研究的熱門課題。一些中草藥的提取物如姜黃素、甘草甜素、盧薈多糖等具有抑制HIV的活性，其化學結(jié)構(gòu)包括生物堿、多糖、噻吩類等。大蒜、蘑燕、番木瓜和人參等已被許多國家用于AIDS治療。本發(fā)明所述的長春花及其提取物在制備抗艾滋病藥物中的用途，至今尚未見文獻報道和專利公開。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供長春花新的醫(yī)療用途，即長春花及其提取物在制備抗艾滋病藥物中的用途。本發(fā)明的內(nèi)容是長春花及其提取物在制備抗艾滋病藥物中的用途，所述用途特征在于1、長春花提取物可通過下述步驟獲得長春花干燥全草，適當粉碎后用8-11倍量80-95%乙醇浸泡提取，也可滲漉提取，將提取液減壓回收乙醇，得濃縮液，濃縮液加適量水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取，減壓回收乙酸乙酯、正丁醇萃取液，得到乙酸乙酯段浸膏A和正丁醇段浸膏B，浸膏A、B干燥即得長春花提取物A和長春花提取物B;2、長春花提取物A和/或長春花提取物B，添加適當?shù)乃幱幂o料，按常規(guī)的制劑工藝，即可制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸劑、口服液等口服藥物制劑和注射藥物制劑。長春花提取物A和長春花提取物B經(jīng)薄層層析，與長春堿和長春新堿標準品對照，顯示長春花提取物A和長春花提取物B均含有長春堿和長春新堿。本發(fā)明的長春花提取物A、B，經(jīng)體外活性篩選，統(tǒng)計處理結(jié)果顯示均有較好的抗艾滋病病毒的活性。為了進一步驗證長春花及其提取物在治療艾滋病方面的功效，對長春花提取物A進行了20例病人初步的臨床療效觀察，結(jié)果表明長春花提取物A是有效的。由長春花提取物A、B的體外活性篩選和病人初步臨床療效觀察結(jié)果，可以合理推導(dǎo)長春花及其提取物可用于制備抗艾滋病藥物，即長春花及其提取物在制備抗艾滋病藥物方面的用途。本發(fā)明的有益效果是提供了長春花在通常用于制備治療高血壓、癌癥藥物以外的新的醫(yī)療用途，即長春花及其提取物在制備抗艾滋病藥物方面的用途，并采用不同的溶媒萃取得到長春花提取物A、B，長春花提取物A和/或長春花提取物B添加適當?shù)乃幱幂o料，按常規(guī)的制劑工藝，即可制成口服和注射藥物制劑。下面是長春花提取物A、B的體外活性篩選和病人初步臨床療效觀察試驗及其結(jié)果。一、體外活性篩選抗HIV活性測試多采用美國NCI的方法MTT或XTT法。該方法的基本原理是通過監(jiān)測體外CD4淋巴細胞被HIV病毒殺死的狀況并對照相同條件下加入待檢藥品后細胞存活的狀況來觀察待檢藥物對HIV病毒的抑制活性將少量的HIV病毒加入CD4淋巴細胞，在病毒繁殖的一個完整周期內(nèi)細胞完全死亡；如加入藥物，則藥物與病毒粒子、細胞或干擾病毒活性的基因產(chǎn)物相互作用，從而保護細胞不被溶解。試驗的結(jié)果將表現(xiàn)為被檢測藥物在病毒繁殖的整個周期內(nèi)所有階段的活性。待檢藥品的濃度一般為l-1000嗎/ml，如活性較好，再選則更稀濃度的樣品試驗。超過1000ng/ml濃度，其活性很低，一般不再考慮。試驗方法選用人T淋巴細胞系C8166、MT-4(P)以及HIV-1實驗株HIV-1IIIB測試樣品對C8166細胞的毒性作用、樣品對HIV-lmB誘導(dǎo)C8166細胞病變的抑制作用，樣品對HRMIIIB感染MT-4(P)細胞死亡的保護，并測出樣品的CCso值、ECso值和TI值。結(jié)果表明長春花提取物A和B對艾滋病病毒均有較好的抑制作用。實驗結(jié)果樣品對C8166細胞的毒性作用和樣品對HIV-lmB誘導(dǎo)C8166細胞病變的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>注毒性值CC5。，即藥物對細胞殺滅50%時的濃度值。CC5。值越大則毒性越小?；钚灾礒C5。，即藥物對HIV活性抑制50n/。時的濃度值。ECso值越小則活性越強。CQ。/EC5。得到它的治療指數(shù)即TI。數(shù)值越大，治療指數(shù)越大。二、初步臨床療效觀察研究對象HIV感染者，無先天和后天免疫缺陷，年齡性別不限。診斷標準1、HIV抗體呈陽性，且病毒載量為20,000-200,000;2、CD4+淋巴細胞大于200cells/ml;3、無其他任何不良癥狀；4、沒有服用過任何其他抗HIV藥物。研究方法該試驗以20名HIV感染者為研究對象，不分年齡和性別給藥，受試物為長春花提取物A。每天按時按量給藥，分別觀察服藥后的HIV載量和CD4細胞數(shù)目。以20周為試驗期限，每4周觀察病人體內(nèi)的HIV載量和CD4細胞數(shù)目。病人每天每次服用長春花提取物A2g，一天3次。病人在服藥后第4、8、12、16和20周后接受臨床檢測。治療結(jié)果(1)有8例HlV感染者病毒承載量明顯下降(4(m);(2)IO例HIV感染者病毒承載量無明顯變化(50%);(3)2例HIV感染者病毒承載量升高(10%)，前兩項之和即為總有效率90%。病人體內(nèi)的病毒載量顯著降低或維持不變，CD4細胞數(shù)量第20周比第0周升了近90cells/ml，病人的免疫能力得到增強。說明長春花提取物A初步臨床療效觀察是有效的。具體實施例方式實施例1取長春花干燥品2.0kg，用11倍量95%乙醇分3次(5、3、3倍)浸提，減壓回收乙醇，濃縮干燥得到浸膏粉，浸膏粉加入淀粉適量，混均、制粒、干燥、整粒，裝入膠囊，制成iooo粒即可。實施例2取長春花干燥品10.0kg,用9倍量90%乙醇滲漉，減壓濃縮滲漉液至無醇味得濃縮液，濃縮液加適量水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取4次，減壓回收乙酸乙酯、正丁醇萃取液，得到乙酸乙酯段浸膏A和正丁醇段浸膏B，浸膏A、B干燥即得長春花提取物A和長春花提取物B。?、倩颌诨颌?①長春花提取物A;②長春花提取物B;③長春花提取物A、B混合物)100g，加入淀粉等適量輔料，混均、制粒、干燥，壓制成1000片即可。實施例3取長春花干燥品5.0kg，用8倍量80%乙醇滲漉，減壓濃縮滲漉液至無醇味得濃縮液，濃縮液加適量水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取4次，減壓回收正丁醇萃取液，得到正丁醇段浸膏，正丁醇段浸膏干燥即得長春花提取物B;取長春花提取物B25g,加適量注射用水溶解，按常規(guī)的水針劑工藝，調(diào)PH值、過濾、灌封、滅菌制成1000ml即可；或者添加適量附加劑如甘露醇，溶解攪勻，過濾、分裝、凍干制成500瓶即可。權(quán)利要求1、長春花在制備抗艾滋病藥物中的用途，其特征在于所述長春花為夾竹桃科長春花屬植物長春花(Catharanthusroseus)，藥用全草。2、長春花提取物在制備抗艾滋病藥物中的用途，其特征在于長春花提取物可通過下述步驟獲得-長春花全草，干燥粉碎后用80-95%乙醇浸提，將浸提液減壓回收乙醇，得濃縮液，濃縮液加適量水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取，減壓回收乙酸乙酯、正丁醇萃取液，得到乙酸乙酯段浸膏A和正丁醇段浸膏B，浸膏A、B干燥即得長春花提取物A和長春花提取物B。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述長春花提取物，其特征在于所述長春花提取物A和長春花提取物B均含有長春堿和長春新堿。4、根據(jù)權(quán)利要求1、2所述用途，其特征在于將長春花提取物A和/或長春花提取物B，添加適當?shù)乃幱幂o料，按常規(guī)的制劑工藝，即可制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸劑、口服液等口服藥物制劑和凍干粉針、水針的注射藥物制劑。全文摘要本發(fā)明公開了長春花及其提取物在制備抗艾滋病藥物中的用途，屬于中藥、天然藥物領(lǐng)域。長春花通過乙醇提取，然后用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇進行萃取，得到不同的提取部位，經(jīng)實驗證明，提取所得到的乙酸乙酯部位和正丁醇部位具有抗艾滋病病毒的作用。文檔編號A61K36/24GK101167771SQ20071018127公開日2008年4月30日申請日期2007年10月26日優(yōu)先權(quán)日2007年10月26日發(fā)明者興張,戴好富,曾艷波,梅文莉,雪白,鄭永唐申請人:中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院熱帶生物技術(shù)研究所;中國科學院昆明動物研究所