專利名稱：高純度凝血酶原復(fù)合物制品冷凍干燥穩(wěn)定劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域，是幾種和幾組高純度凝血酶原復(fù)合物制品(四種凝血因子II、VII、IX、X比活均彡3. 5IU/mg)在冷凍干燥過程，可有效防止制品中主要作用凝血因子IX及凝血因子II、VII、X失活的穩(wěn)定劑。更詳細(xì)地說，在高純度凝血酶原復(fù)合物中加入0. -10%精氨酸或/和0. 1% -10%海藻糖或/和0. -10%組氨酸或/和 0. 1% -10%甘氨酸，在冷凍干燥過程中可有效保護(hù)制品凝血因子IX及凝血因子II、VII、X 的活性。
背景技術(shù)：
人凝血酶原復(fù)合物(Prothrombin Complex Concentrate，PCC)是從健康人混合血漿中分離制備成的一種能促進(jìn)血液凝固的血液制品，主要含有依賴維生素K合成的凝血因子II、VII、IX、X。在臨床上，PCC主要用于乙型血友病、凝血因子VII抗體產(chǎn)生的甲型血友病及由肝臟疾病、維生素K缺乏所引起的凝血因子水平低下而導(dǎo)致的出血癥治療。我國是乙型肝炎患者大國，再加上其他類肝臟疾病，對PCC制品的需求有較大的患者群體，隨著臨床認(rèn)同度的提高，近年來，PCC制品有較大的使用需求。自20世紀(jì)50年代PCC用于臨床以來，不斷有靜脈輸注后導(dǎo)致血栓形成的報(bào)道，因此，減少潛在致栓性發(fā)生的高端PCC制品的開發(fā)是該制品的研究重點(diǎn)。高端PCC制品應(yīng)具有較少的促栓蛋白因子，四種凝血因子II、VII、IX、X應(yīng)具有較好的純度及均衡度。目前國內(nèi)市場成型的PCC制品，凝血因子II、VII、IX、X的比活性大多在0. 3-1. 0IU/mg之間，純度相對較低。此外，凝血因子II、VII、IX、X均衡度也有待改善，從某種意義來講，國內(nèi)目前PCC 制品存在一定的血栓副反應(yīng)發(fā)生的隱患。凝血因子易失活變性，此類制品為了便于保存、運(yùn)輸，在制備過程中需冷凍干燥處理成為粉針制劑。在冷凍過程中，冰晶從溶液中析出，制品鹽離子濃度迅速增加、鹽析過程又引起制品內(nèi)部PH值變化、冷凍過程的表面誘導(dǎo)破壞和低溫條件等諸多因素均對蛋白穩(wěn)定性有負(fù)面影響；在干燥過程中，制品溶液玻璃化及玻璃化轉(zhuǎn)變、水分升華氫鍵的直接暴露等因素也容易引起蛋白質(zhì)的變性，對于易失活變性蛋白類制品，冷凍干燥過程必須添加一定的穩(wěn)定劑。高純度PCC蛋白含量相對較少，對穩(wěn)定劑的要求更較高，至今未見有關(guān)PCC冷凍干燥穩(wěn)定劑的報(bào)道，更未見精氨酸或/和海藻糖或/和組氨酸或/和甘氨酸用于高純度PCC 冷凍干燥穩(wěn)定劑的研究報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
要解決的技術(shù)問題為了能有效保護(hù)高純度PCC在冷凍干燥過程中凝血因子蛋白活性，減少凝血因子的活性損失，本發(fā)明提供幾種和幾組高純度PCC的穩(wěn)定劑，經(jīng)冷凍干燥處理能有效地保護(hù)凝血因子II、VII、IX、X的活性，其中凝血因子IX活性收率均> 70%。
技術(shù)方案本發(fā)明以高純度PCC為材料，經(jīng)冷凍干燥、成形外觀比較、活性測定、復(fù)溶澄清度比較獲得3種和6組高純度PCC冷凍干燥保護(hù)劑，具體步驟如下a)高純度PCC制備以健康人混合血漿去除冷沉淀上清為原料，利用擴(kuò)張床技術(shù)制備高純度PCC。將收集的洗脫峰溶液用所含0. OlM檸檬酸鈉、0. 5% NaCl、pH7. 0超濾緩沖液在Millipore Labscale超濾濃縮系統(tǒng)中超濾、脫鹽、濃縮并活性測定，獲得高純度PCC。上述制備的高純度PCC組成特征為
權(quán)利要求
1.精氨酸或/和海藻糖或/和組氨酸或/和甘氨酸用作高純度凝血酶原復(fù)合物冷凍干燥穩(wěn)定劑，精氨酸含量為0.1 % -10 %，海藻糖含量為0. 1 % -10 %，組氨酸含量為 0. 1% -10%，甘氨酸含量為0. 1% -10%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述精氨酸或/和海藻糖或/和組氨酸或/和甘氨酸用作高純度凝血酶原復(fù)合物冷凍干燥過程穩(wěn)定劑，其特征在于凝血酶原復(fù)合物四種凝血因子II、VII、IX、 X比活均≥3. 5IU/mg。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述精氨酸或/和海藻糖或/和組氨酸或/和甘氨酸用作高純度凝血酶原復(fù)合物冷凍干燥過程穩(wěn)定劑，其特征在于穩(wěn)定劑中還含有檸檬酸鈉和NaCl。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述精氨酸或/和海藻糖或/和組氨酸或/和甘氨酸用作高純度凝血酶原復(fù)合物冷凍干燥過程穩(wěn)定劑，同樣適用于其他各類凝血酶原復(fù)合物制品。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域，是一種高純度凝血酶原復(fù)合物制品(四種凝血因子II、VII、IX、X比活均≥3.5IU/mg蛋白)在冷凍干燥過程，有效防止制品中主要作用凝血因子IX及凝血因子II、VII、X失活的穩(wěn)定劑。本發(fā)明的穩(wěn)定劑是指精氨酸或/和海藻糖或/和組氨酸或/和甘氨酸，還含有常用檸檬酸鈉和NaCl。試驗(yàn)表明，高純度凝血酶原復(fù)合物只要含有0.1％-10％精氨酸或/和0.1％-10％海藻糖或/和0.1％-10％組氨酸或/和0.1％-10％甘氨酸，就可在冷凍干燥過程中有效地保護(hù)凝血因子IX及凝血因子II、VII、X的活性。因此本發(fā)明可用作高純度凝血酶原復(fù)合物冷凍干燥過程中的穩(wěn)定劑。
文檔編號A61K47/22GK102441172SQ201110400450
公開日2012年5月9日 申請日期2011年12月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月6日
發(fā)明者何琦, 曹海軍, 李志雄, 李長清, 林方昭, 趙紅衛(wèi), 邱家山, 黃亮 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血研究所, 中藍(lán)晨光化工研究設(shè)計(jì)院有限公司, 四川大學(xué), 成都英德生物工程有限公司