專利名稱：一種含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于醫(yī)學制藥工程技術領域，涉及一種含NO供體的組合藥物及其制備方法，尤其是一種含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物及其制備方法。
背景技術：
—氧化氮(nitric oxide,NO)是一種具有多種生物活性的氣體小分子物質(zhì)。在體內(nèi)由NO前體物質(zhì)L-精氨酸在一氧化氮合酶(NOS)的催化下與氧分子作用產(chǎn)生NO和L-胍氨酸。NO普遍存在于脊椎動物的各種細胞，如內(nèi)皮細 胞、巨噬細胞、神經(jīng)細胞中，是細胞間和細胞內(nèi)信息傳遞的重要調(diào)節(jié)因子，同時還是宿主免疫反應中一種細胞毒性因子。它被證實具有多種生物學活性，這包括調(diào)節(jié)血管擴張和血流、神經(jīng)信號傳遞、信號轉導、免疫調(diào)制、細胞的氧化還原狀態(tài)、肝細胞的凋亡及防御微生物等。一氧化氮供體(NO donor)是指一類能在體內(nèi)經(jīng)酶促反應或非酶促反應引入并釋放外源性NO的一類前體藥物。NO在病理生理過程中具有廣泛且重要的作用，隨著對NO認識的不斷深入，人們對NO供體的研究興趣也越來越高。在近十幾年，許多具有不同生物學特性和治療潛力的NO供體都已被合成，按其結構類型，常用的大致包括有機硝酸酯類如硝酸甘油(NG)、斯德酮亞胺類如嗎多明、亞硝基硫醇類如S-亞硝基卡托普利、NO-供體復合類如NO-阿司匹林(NCX-4061)以及金屬-NO配合物類如硝普鈉等。但這些傳統(tǒng)的NO供體在使用時，一方面，它只在溶液中釋放NO，因NO的生物半衰期極短，只有IOs左右，一旦生成就會被迅速氧化，導致細胞內(nèi)的NO很難達到有效濃度；另一方面，NO釋放缺乏特異性使其在攻擊目的細胞的同時，也可殺傷正常細胞，如促進肝細胞纖維化等。因此，NO供體的組織特異性在NO控釋中越來越受到重視。有文獻報道，設計并合成了一個新型的糖基化NO供體化合物β -半乳糖基化偶氮烯翁二醇，其利用半乳糖連接偶氮烯翁二醇末端氧來保護在水溶液中易自發(fā)分解產(chǎn)生NO的偶氮烯翁二醇，此外，更主要的是，由于分子中引入了半乳糖，使其對高表達β-半乳糖苷酶的病菌及腫瘤細胞具有了特異性[李松，陳暢，史艷秋，等.新型NO供體β-Gal-NONOate對C6細胞的抗腫瘤作用.中國生化藥物雜志，2007，28 (4) :217-220]。然而，β -半乳糖基化偶氮烯翁二醇對環(huán)境溫度和濕度敏感，僅可于4°C保存IOd左右，H+也會加速其的降解。若采用單一藥物的形式，β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇在外環(huán)境存放或在體內(nèi)的轉運時易提前釋放出NO，影響所有的器官，有時會產(chǎn)生嚴重的副作用和并發(fā)癥，而在NO缺乏的器官卻沒有達到有效的藥物劑量?，F(xiàn)于以上缺陷，合成選擇性高、穩(wěn)定性好的靶向釋放NO的供體藥物或通過添加其它輔料制成能達到同樣目的的NO供體組合藥物已經(jīng)成為當今制藥工程領域的熱點。

發(fā)明內(nèi)容
基于上述現(xiàn)有技術，本發(fā)明提供了一種選擇性高、穩(wěn)定性好的含β -半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物及其制備方法。該組合藥物中的β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇由于分子中引入了半乳糖，不僅阻滯了偶氮烯翁二醇遇水溶液易自發(fā)分解產(chǎn)生NO，而且使其對高表達β_半乳糖苷酶的病菌及腫瘤細胞具有了較好的組織特異性。滑爪蟾素是含21-27個氨基酸殘基的堿性陽離子肽，除了自身具有抗菌及抗腫瘤作用之外，還可以作為酸堿緩沖對，減少H+對NO供體的影響。蒙脫石是由顆粒極細的含水鋁硅酸鹽構成的層狀礦物，具有很強的吸附力及陽離子交換性能，因此，對呈陽性的β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇及滑爪蟾素有一定吸附能力，從而能夠延緩β_半乳糖基化偶氮烯翁二醇的釋放。防潮劑的加入，則使得蒙脫石多吸附了一隔水層，避免了 NO供體及滑爪蟾素等藥物層及直接與水接觸，增加組合藥物的穩(wěn)定性。本發(fā)明所述的含半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物由NO供體藥物、滑爪蟾素、蒙脫石、防潮劑組成。本發(fā)明所述的含β -半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物中各組份含量為5-40質(zhì)量份的NO供體藥物、4-9質(zhì)量份的滑爪蟾素、35-70質(zhì)量份的蒙脫石、5_30質(zhì)量份的防潮劑。所述的蒙脫石為鈉蒙脫石或/和鈣蒙脫石；所述的防潮劑為硬脂酰聚甘油酯、乙基纖維素及聚二甲基硅氧烷中的一種或幾種。所述的NO供體藥物為β -半乳糖基化偶氮烯翁二醇，或者質(zhì)量比為(O. 1-0. 3):1的化合物A與β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇。 所述化合物A結構式如下
權利要求
1.一種含3-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物，其特征在于，所述的組合藥物由NO供體藥物、滑爪蟾素、蒙脫石、防潮劑組成，所述的NO供體藥物為P -半乳糖基化偶氮烯翁二醇。
2.如權利要求1所述的一種含3-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物，其特征在于，所述的組合藥物中各組份含量為5-40質(zhì)量份的NO供體藥物、4-9質(zhì)量份的滑爪蟾素、35-70質(zhì)量份的蒙脫石、5-30質(zhì)量份的防潮劑。
3.如權利要求2所述的一種含￠-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物，其特征在于，所述的蒙脫石為鈉蒙脫石或/和鈣蒙脫石；所述的防潮劑為硬脂酰聚甘油酯、乙基纖維素及聚二甲基硅氧烷中的一種或幾種。
4.如權利要求3所述的一種含￠-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物，其特征在于，所述的NO供體藥物為P -半乳糖基化偶氮烯翁二醇和化合物A ;化合物A與P -半乳糖基化偶氮烯翁二醇的質(zhì)量比為(0. 1-0. 3) :1 ;化合物A結構式如下
5.如權利要求4所述的一種含￠-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物，其特征在于，所述化合物A的制備方法為 (1)在反應瓶中加入30mL氯仿和240mmolN-鄰羥基芐基-氨乙酸，攪拌下用2wt%的氫氧化鈉水溶液調(diào)pH為9，加入0. 6g Bu4NBr,加熱至42 °C，滴加30mL含240mmol四乙?；?P -D-溴代半乳糖的氯仿溶液并反應4. 5h，其間以2wt %的氫氧化鈉溶液維持體系pH=9,反應完畢后，分出有機層,用5wt%的氫氧化鈉溶液和水洗漆,干燥有機層后除去溶齊U，然后加入丙酮，濾去不溶物，將濾液濃縮過柱，用乙酸乙酯洗脫，收集最先流出的色帶，得N-鄰羥基芐基-氨乙酸四乙?；?P -D-半乳糖酯； (2)將240mgBu2SnO和190mmol N-鄰羥基芐基-氨乙酸四乙?；?P-D-半乳糖酯加A 50ml無水甲醇中，900C回流2h，得N-鄰羥基芐基-氨乙酸-P -D-半乳糖酯； (3)取IlOmmolN-鄰羥基芐基-氨乙酸鄰-D-半乳糖酯，懸浮于含有3. 6g甲醇鈉的IOOml甲醇溶液中，置于高壓反應釜中，先通氮氣后抽真空，除去體系中的氧氣，再通入NO氣體，維持壓力0. 6Mpa，室溫反應5天，反應完成后通氮氣吹去未反應的NO，過濾，用無水甲醇和乙醚洗滌3次，在真空烘箱中室溫真空干燥24小時，得N-鄰羥基芐基-N-(二氮烯-1-鐵氧-2-醇鈉)-氨乙酸P -D-半乳糖酯； (4)取90mmolN-鄰羥基芐基-N-( 二氮烯-1-鎗氧-2-醇鈉)_氨乙酸P -D-半乳糖酯，懸浮于50ml DMF的密閉玻璃瓶中，冰水浴攪拌并用針通氮氣2小時，以除去反應體系中的氧氣，在氮氣的保護氛圍中，用注射器加入6ml三(2-氯乙基)胺，反應3小時；撤除冰水浴及氮氣，升至室溫，繼續(xù)密封攪拌48小時，過濾，用乙醚洗3次，在真空烘箱中室溫真空干燥24小時，即得化合物A。
6.如權利要求5所述的一種含3-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物，其特征在于，所述的N-鄰羥基芐基-氨乙酸的制備方法為在IOOOmL單口瓶中，加入300mmol乙氨酸，450mL無水乙醇,攪拌使其溶解，然后加入300mmol氫氧化鈉,攪拌IOmin后，分批加入300mmol水楊醛，攪拌2h，TLC跟蹤反應，原料消失為反應終點；反應結束后，用冰水浴冷卻至6°C,用稀鹽酸調(diào)pH=6,然后分批加入300mmol四氫硼鈉，TLC跟蹤反應；反應完全后,用稀鹽酸調(diào)PH為4，使白色沉淀充分析出，靜置，過濾，濾餅分別用水、乙醚洗滌得粗產(chǎn)品，粗產(chǎn)品用IOOml乙醇溶解，后加500ml水調(diào)極性，進行重結晶，抽濾得N-鄰羥基芐基-氨乙酸。
7.如權利要求5所述的一種含￠-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物，其特征在于，所述的四乙酰基-P-D-溴代半乳糖的制備方法為在裝有120mL乙酸酐的三口瓶中，滴加0.4mL高氯酸，35°C并在攪拌下，0. 5h內(nèi)加入300mmol ^ -D-半乳糖，繼續(xù)攪拌2h，改為冰水浴冷至5°C后加入5g紅磷，然后在20°C并攪拌下滴加9ml溴，反應0. 5h后加入8mL冰水，繼續(xù)反應2h后加入50mL氯仿，然后將此混合物倒入160mL冰水中，抽濾，除去紅磷，分出有機層，用飽和碳酸鈉溶液洗至PH為6，有機層用無水氯化鈣干燥及活性炭脫色，除去溶劑后得白色固體，即為四乙酰基-P -D-溴代半乳糖。
8.如權利要求1-7任一所述的一種含3-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物的制備方法，其特征在于，其具體操作步驟如下 1)取4-20g滑爪蟾素溶于20-40ml醇水混合溶液中，醇與水的體積比為(1:20)-(1:3)，然后加入35-70g蒙脫石，攪拌，使滑爪蟾素充分吸附于蒙脫石中，過濾，取蒙脫石，揮干醇后，放入烘箱中烘干； 2)取5-80g的NO供體藥物溶于20-80ml醇中，然后加入步驟I)得到的吸附有滑爪蟾素的蒙脫石，攪拌，使NO供體藥物充分吸附于蒙脫石中，過濾，取蒙脫石，揮干醇； 3)將步驟2)得到的吸附有滑爪蟾素和NO供體藥物的蒙脫石加入5-30g防潮劑，充分拌勻，即制得含P-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物。
9.如權利要求8所述的一種含￠-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物的制備方法，其特征在于，步驟I)和步驟2)中所述的醇為甲醇或乙醇。
10.如權利要求1-7任一所述的一種含3-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物在抗菌、抗病毒藥物制備中的應用。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)學制藥工程技術領域，涉及一種含NO供體的組合藥物及其制備方法，尤其是一種含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物及其制備方法。本發(fā)明所述的組合藥物由含有β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的NO供體藥物、滑爪蟾素、蒙脫石、防潮劑組成，其制備方法具體如下取滑爪蟾素，溶于醇溶液中，加入蒙脫石，充分攪拌，濾取蒙脫石，烘干；取含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的NO供體藥物溶于醇中，然后加入蒙脫石，充分攪拌，濾取蒙脫石，揮干醇后加入防潮劑，拌勻，即制得含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物。本發(fā)明所述的含β-半乳糖基化偶氮烯翁二醇的組合藥物防水、抗酸，而且能延長NO供體的釋放時間，達到穩(wěn)定、可控。
文檔編號A61P31/04GK103007253SQ20121053721
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月12日 優(yōu)先權日2012年12月12日
發(fā)明者陳暢, 鄧玲玲, 張會萍, 田婕 申請人:北京化工大學